【正文】 影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的因素 ? R=(A+B+C) D + E ? R:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的總反應(yīng) ? A:動(dòng)物種間的共同反應(yīng) ? B:動(dòng)物品種，品系特有的反應(yīng) ? C:動(dòng)物的個(gè)體反應(yīng) ? D:環(huán)境因素（包括實(shí)驗(yàn)處理） ? E:實(shí)驗(yàn)誤差 ? A,B,C是由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身的遺傳因素決定的，被選擇的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物， 在嚴(yán)格控制環(huán)境因素 D或改變其中某一條件后就可能得到一個(gè)理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 R。 ?1968年 ， Pantelouris解剖發(fā)現(xiàn)裸鼠失去了 正常的胸腺 。 血小板活性因子 (PAF)誘發(fā) ： 目前已知的唯一能引起氣道高反應(yīng)性炎癥介質(zhì)。 誘癌物 放射線局部照射、化學(xué)致癌物（ 烷化劑、亞硝胺類、芳香胺類 ）、生物毒素（ 黃曲酶毒素 ）、細(xì)菌（ 幽門螺桿菌 ）等。 經(jīng)濟(jì)性原則 無菌兔 人類疾病動(dòng)物模型 What is the Animal Model? ? an animal model in which normative biology or behavior can be studied, or in which a spontaneous or induced pathological process can be investigated, and in which the phenomenon in one or more respects resembles the same phenomenon in humans or other species of animal. ?醫(yī)學(xué)研究中建立的具有人類疾病模擬表現(xiàn)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)象和相關(guān)材料。第八章 醫(yī)學(xué)研究中實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)動(dòng)物的選擇及應(yīng)用 如何做好動(dòng)物實(shí)驗(yàn) —— 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù) 田楓 “I’m so proud! All of my kids are going into research” 田楓 主要內(nèi)容 ? 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇 ? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型 ? 影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的因素 ? 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù) ? 如何做好動(dòng)物實(shí)驗(yàn) ?動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是根據(jù)研究目的，恰當(dāng)?shù)剡x用標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種、品系，進(jìn)行各種科學(xué)實(shí)驗(yàn)，觀察和記錄動(dòng)物的反應(yīng)過程或反應(yīng)結(jié)果，以探討或檢驗(yàn)生命科學(xué)中未知因素的一種活動(dòng)。太老的動(dòng)物的各器官老化，代謝功能下降，只在老年醫(yī)學(xué)研究中使用； ?體重 在正常營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)和飼養(yǎng)條件下，體重與年齡有一定的相關(guān)性； ?性別 許多實(shí)驗(yàn)證明，同一品種（系）不同性別的動(dòng)物對(duì)外界刺激的反應(yīng)不一致。 異位誘發(fā)腫瘤具有易于觀察和取材的優(yōu)點(diǎn)。當(dāng)豚鼠再次接觸此抗原時(shí)， IgE介導(dǎo)發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，使細(xì)胞脫顆粒，釋放出活性化學(xué)物質(zhì)如組胺、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子等，作用于支氣管引起氣道高反應(yīng)致哮喘。 ?1966年證實(shí)是由于第 11對(duì)染色體基因突變所致 。 SHO（ SCID Hairless Outbred） ? 人們一直想讓 SCID小鼠擁有裸鼠無毛的優(yōu)點(diǎn) ? Charles River Lab的研究人員自 2022年開始就著手培育無毛的 SCID小鼠，他們通過 Crl:HAPrkdcscid和 Crl:SKH1Hrhr這兩個(gè)品系雜交，最終在 2022年得到了兩條染色體上均帶有 SCID基因的 無毛封閉群小鼠模型 SHO（ SCID Hairless Outbred） . ? 2022年 6月，實(shí)驗(yàn)人員通過對(duì)比的方法將人前列腺癌細(xì)胞株 PC3分別接種到 SCID和 SHO身上，研究發(fā)現(xiàn)， SHO除去具有與 SCID小鼠相同的腫瘤生長(zhǎng)特性之外，還摒除了 Nu/Nu裸鼠接種 PC3時(shí)出現(xiàn)的皮膚潰瘍現(xiàn)象。 如果環(huán)境溫度高于熱平衡區(qū)溫度的上限，代謝率也將增長(zhǎng)，這不是防御機(jī)制， 而是由于環(huán)境溫度導(dǎo)致體溫升高，升高的體溫提高了代謝率。其實(shí)，最值得關(guān)注的是籠具中的氣體或微氣候，這與籠具設(shè)計(jì)、籠具通風(fēng)、墊料材料和房間的通風(fēng)換氣密切相關(guān)。 理化因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 光照條件 （ Lighting Conditions） 光照強(qiáng)度 理想的情況是房間所有動(dòng)物在籠具水平擁有相等的光照強(qiáng)度。 理化因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的聽力均超過人類，人類的聽力范圍是 15000～ 20,000 Hz，而大鼠可測(cè)聲音高至 100,000 Hz. 噪聲（ Noise） 理化因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 噪聲（ Noise） 噪音是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)的常見原因。 居住因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 墊料必須是吸濕性的，鋸末和刨花是最常用的墊料，以紙或玉米芯為主的墊料也見應(yīng)用。嚴(yán)格控制的動(dòng)物生存條件有利于獲得有意義的和可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，但是，對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，嚴(yán)格控制的環(huán)境條件帶給它們一個(gè)顯著偏離自然的環(huán)境和生活。 經(jīng)過小心的捉拿操作和逐漸的適應(yīng) ， 動(dòng)物能夠在某種程度上學(xué)會(huì)調(diào)整其逃走的本能 。 它們每一個(gè)動(dòng)作的目的就是為了不停地重復(fù)整套動(dòng)作，而且做得那么認(rèn)真執(zhí)著，與精神病人的表現(xiàn)一模一樣，毫無二致。 ? 拌食給藥應(yīng)考慮飼料情況和動(dòng)物采食量，保證藥量足夠攝入。 1. 動(dòng)物早期營(yíng)養(yǎng)狀況 動(dòng)物早期營(yíng)養(yǎng)狀況對(duì)課題營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)測(cè)定產(chǎn)生影響。實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物的很多反應(yīng)可能隨著動(dòng)物生物學(xué)功能的周期而改變。一般情況下，動(dòng)物的耐受性比人大，也就是單位體重動(dòng)物的用藥量比人要大。 全身麻醉： 局部麻醉：（普魯卡因、利多卡因等） 揮發(fā)性麻醉劑： 吸入給藥 ——乙醚、氯仿等 非揮發(fā)性麻醉劑： 靜脈、皮下、肌肉、腹腔給藥 ——氯胺酮、戊巴比妥鈉等 Anaesthesia Apparatus 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的安樂死 安樂死必須符合的標(biāo)準(zhǔn)： 、疼痛。 。 尸體處理 動(dòng)物死尸不可亂放，除有儲(chǔ)尸桶外，應(yīng)有鮮花供奉，以示對(duì)其為科研舍身的感謝。 實(shí)驗(yàn)第 7天，頸椎脫臼處死動(dòng)物， ***。 例：材料和方法 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ： BALB/c（ nunu）裸鼠 20只， 1822g，雌雄各半， 由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部。絕不可自行處理和隨意扔掉。 。適用于大、小鼠。 Ear punching 1 5 2 金屬耳號(hào) 玻璃管動(dòng)物標(biāo)記 (微芯片 microchip)） 可以標(biāo)記的動(dòng)物種類多 體內(nèi)標(biāo)簽，不易破壞 使用壽命長(zhǎng)，達(dá)到 20年 ,可循環(huán)使用 準(zhǔn)確率高，讀錯(cuò)率為 10萬分之一 可以準(zhǔn)確標(biāo)記每一個(gè)動(dòng)物 動(dòng)物標(biāo)簽編碼規(guī)則 ? 3位國(guó)家代碼 +3位地區(qū)代碼 +12位動(dòng)物標(biāo)簽編碼 ? 如： 國(guó)碼： 720 區(qū)域： 899 序號(hào)： 075733300002 玻璃管動(dòng)物標(biāo)簽 玻璃管動(dòng)物標(biāo)簽注射器 ?? 注射（植入）標(biāo)簽前一定要保證消毒到位，以避免不必要的感染 玻璃管動(dòng)物標(biāo)簽閱讀器 注射（植入）標(biāo)簽時(shí)應(yīng) 1545度角注射，方便閱讀器以之發(fā)生電磁感應(yīng)， 敏捷地讀出數(shù)據(jù)。 對(duì)營(yíng)養(yǎng)研究的影響 病原微生物感染對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的影響 ? 病毒感染 ? 細(xì)菌感染 ? 寄生蟲感染 病原微生物的影響 仙臺(tái)病毒感染 仙臺(tái)病毒感染肺病變 對(duì)麻醉實(shí)驗(yàn)和吸入毒理學(xué)研究等產(chǎn)生嚴(yán)重干擾 小鼠肝炎病毒感染 裸鼠的肝臟病變 waste syndrome 出現(xiàn)消耗性疾病，給腫瘤免疫學(xué)研究造成嚴(yán)重干擾 淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒 ? LCMV is transmitted by the mon house mouse, Mus musculus, which sheds the virus in its urine. Humans bee infected by inhaling aerosolized particles of rodent excrement, by ingesting food contaminated with the virus or by direct contact of mucus membranes with infected fluids (lab and pets). 污染移植腫瘤，影響腫瘤學(xué)研究 犬細(xì)小病毒感染 免疫功能受到抑制，犬死亡。 ? 高蛋白水平不可逆升高谷草轉(zhuǎn)氨酶、蘇氨酸脫氫酶活性。 ?不同品種和品系的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物其壽命各不相同，有的以日，有的以月，有的以年計(jì)算。 ? 英國(guó)和瑞士的研究人員曾安裝一臺(tái) 24小時(shí)監(jiān)控的攝像機(jī)，記錄了實(shí)驗(yàn)小鼠的一舉一動(dòng)。 盡管經(jīng)過了眾多世代的選擇培育 ， 實(shí)驗(yàn)大鼠的這種活動(dòng)性需求依然存在 。 墊料（ Bedding） 居住因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 在生產(chǎn)和儲(chǔ)存過程中 ， 野生嚙齒類動(dòng)物可進(jìn)入和污染墊料 。 理化因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 有害氣體 動(dòng)物設(shè)施建筑 動(dòng)物設(shè)施設(shè)備 居住因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 防止外部污染 Isolation 居住因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 防止公害外 泄 containment 居住因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 我們難以使房間內(nèi)籠具的環(huán)境條件完全相等，因此，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)在籠架中自由的分布，尤其對(duì)照組動(dòng)物和給藥組動(dòng)物在籠架的位置應(yīng)是自由分布的。 理化因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 光照條件 （ Lighting Conditions） 光照強(qiáng)度 照度超過 60 lux就可造成白化動(dòng)物視網(wǎng)膜損傷。 and ammonia and other gasses, %)。 氣候因素對(duì)動(dòng)物試驗(yàn)的影響 空氣相對(duì)濕度（ Relative air humidity） 濕度是指空氣中濕氣的含量，常用相對(duì)濕度來表示，即實(shí)際空氣的濕度與在同一溫度下達(dá)到飽和狀況時(shí)的濕度之比值。 甚至可以說沒有環(huán)境控制就沒有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。 和純系 BALB/C， C3H， C57BL/6小鼠 交 配 ， 不 斷 選 育 ， 獲 得 了 三 種 近 交 系 鼠（ Inbred Nude Mice） 新種 。 ? 注射生物及生物制品引起 β 細(xì)胞破壞，如鼠腦炎、心肌炎病毒 M型變異可誘發(fā)若干品系的成年小鼠糖尿病。 Transplant Tumor Animal Model ? 腫瘤組織： 惡性程度：惡性和轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)瘤成功率較高 種類：細(xì)胞系成功率 活檢標(biāo)本 來源：淋巴瘤 、 骨腫瘤等難獲成功 部位：腫瘤塊的外周部接種易成活 ? 裸鼠 ： 遺傳背景：胰腺癌接種 BALB/c 成功 ， NIH系失敗 性別：雌激素依賴性腫瘤接種雄鼠生長(zhǎng)慢 鼠齡： 46周 動(dòng)物健康狀態(tài) Affecting Factor of Transplant Tumor Model ? 接種部位： 原位移植成功率高 ， 移植腫瘤與人類原發(fā)瘤相似 。 Tumor Animal Model Induced tumor animal model 使用致癌因素在實(shí)驗(yàn)條件下誘發(fā)動(dòng)物發(fā)生腫瘤的動(dòng)物模型。選擇時(shí)要注意 ? 解剖特性 ： 有些動(dòng)物的解剖結(jié)構(gòu)與人類差別較大，要特別注意 特殊性原則 ? 發(fā)熱、解熱和檢查致熱源實(shí)驗(yàn) 適宜選用兔做實(shí)驗(yàn)； ? 開胸和心臟實(shí)驗(yàn) 適宜選用兔做實(shí)驗(yàn)；觀察藥物對(duì)排卵的影響，進(jìn)行避孕藥研究 適宜選用兔、貓； ? 動(dòng)脈粥樣硬化實(shí)驗(yàn) 適宜選用兔、豬、猴； ? 肝外科實(shí)驗(yàn)研究 適宜選