分子生物學(xué)常見(jiàn)試題(轉(zhuǎn)載)-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 相似的Tm值,Tm值計(jì)算公式:Tm=4(G+C)+ 2(A+T)3,一般不超過(guò)3bp.4,兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列,尤其應(yīng)避免339。在這一過(guò)程中,核酸分子經(jīng)歷了變性和復(fù)性的變化,以及在復(fù)性過(guò)程中個(gè)分.(十三),影響雜交的因素答:1,核酸分子的濃度和長(zhǎng)度:核酸濃度越大,對(duì)為好.2,溫度:溫度過(guò)高不利于復(fù)性,而溫度過(guò)低,少數(shù)堿基配對(duì)形成的局部雙鏈不易解離,適宜的溫度是較TM值低25度.3,離子強(qiáng)度:在低離子強(qiáng)度下,核酸雜交非常緩慢,隨著離子強(qiáng)度的增加,度的鹽使堿基錯(cuò)配的雜交體更穩(wěn)定,所以進(jìn)行序列不完全同源的核酸分子雜交時(shí)必須維持雜交反應(yīng)液中的鹽濃度和洗膜液中的鹽濃度.4,雜交液中的甲酰胺::在低溫下探針更穩(wěn)定。6,對(duì)于表達(dá)載體還應(yīng)具備與宿主細(xì)胞相適應(yīng)的啟動(dòng)子,前導(dǎo)順序,增強(qiáng)子,加尾信號(hào)等DNA調(diào)控元件.(十),藍(lán)白篩選的原理答:某些質(zhì)粒帶有大腸桿菌的半乳糖苷酶基因片段,在半乳糖苷酶基因的基因區(qū)外又另外引入了一**段,在質(zhì)粒被導(dǎo)入lac的大腸桿菌后,質(zhì)粒攜帶的半乳糖苷酶基因?qū)⒄１磉_(dá),與大腸桿菌的半乳糖苷酶基因互補(bǔ),產(chǎn)生有活性的半乳糖苷酶,加入人工底物Xgal和誘導(dǎo)劑IPTG后,點(diǎn)上插入外源DN**段,將使lac Z基因滅活,不能生成半乳糖苷酶,種顏色標(biāo)志,重組克隆和非重組克隆的區(qū)分一目了然.(十一)SANGER雙脫氧鏈終止法的原理答:DNA鏈中核苷酸以339。2,高度親和性。其他轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶結(jié)合形成一個(gè)開放復(fù)合物.在這個(gè)過(guò)程中,反式作用因子的作用是:促進(jìn)或抑制TFⅡD與TATA盒結(jié)合。④基因組中非編碼區(qū)多于編碼區(qū)。②只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)。③形式多樣。④大小不一。③具有操縱子結(jié)構(gòu)。⑤真核基因多為不連續(xù)的斷裂基因,由外顯子和內(nèi)含子鑲嵌而成。促進(jìn)或抑制RNA聚合酶與TFⅡDDNA復(fù)合物的結(jié)合。3,可逆性。,539。能更好地保留非共價(jià)結(jié)合的核酸.5,核酸分子的復(fù)雜性:的相對(duì)雜交速率取決于樣品濃度絕對(duì)一致時(shí)的相對(duì)復(fù)雜性(即DNA中的堿基數(shù)).6,非特異性雜交反應(yīng):在雜交前應(yīng)對(duì)非特異性雜交反應(yīng)位點(diǎn)進(jìn)行封閉,以減少其對(duì)探針的非特異性吸附作用.(十四),探針的種類和優(yōu)缺點(diǎn)答:1,cDNA探針:通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA后,將其克隆于適當(dāng)?shù)目寺≥d體,通過(guò)擴(kuò)增重組質(zhì)粒而.2,基因組探針:從基因組文庫(kù)里篩選得到一個(gè)特定的基因或基因片段的克隆后,大量擴(kuò)增,純化,切取插入片段,分離純化為探針.3,寡核苷酸探針:根據(jù)已知的核酸順序,采用DNA合成儀合成一定長(zhǎng)度的寡核苷酸片段作為探針.4,RNA探針:采用基因克隆和體外轉(zhuǎn)錄的方法可以得到RNA或反義RNA作為探針.(十五),探針的標(biāo)記法答:1,缺口平移法:此法是利用適當(dāng)濃度的DNase Ⅰ在DNA雙鏈上隨機(jī)切割單鏈,造成單鏈切口.切口處產(chǎn)生一個(gè)5末端和3末端,3末端就可以作為引物,在大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的催化下,以互補(bǔ)的DNA單鏈為摸板,依次將dNTP連接到切口的3末端的羥基上,合成新的DNA單鏈。端的互補(bǔ)重疊.5,引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不超過(guò)70%,引物339。3,影響RNA轉(zhuǎn)錄和翻譯效率的因素:SD序列,mRNA。也可以通過(guò)轉(zhuǎn)入外源基因培育優(yōu)良的動(dòng)物品種.3,應(yīng)用:建立用于研究外源基因表達(dá)調(diào)控體系。培育動(dòng)物新品種。5,表達(dá)產(chǎn)物的大小。端堿基是引發(fā)延伸的起點(diǎn),39。末端為起點(diǎn)的539。脫氧核苷三磷酸.239。5,特定的作用模式(六),表皮生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑答:表皮生長(zhǎng)因子受體是一個(gè)典型的蛋白酪氨酸激酶受體,這個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的主要步驟是:1, 受體二聚化的形成及其磷酸化:表皮生長(zhǎng)因子與受體的結(jié)合使受體發(fā)生二聚化,從而改變受體構(gòu)象,使蛋白酪氨酸激酶活性增強(qiáng),受體自身的幾個(gè)蛋白酪氨酸殘基在激酶的作用下發(fā)生磷酸化.2, 募集接頭蛋白Grb2:表皮生長(zhǎng)因子受體自身被磷酸化后,不僅其激酶活性增強(qiáng),而且其構(gòu)象發(fā)生變化,.3, 調(diào)控分子SOS的活化:SOS含有可與SH3結(jié)構(gòu)域相結(jié)合的富含脯氨酸基序,當(dāng)Grb2結(jié)合到磷酸化的表皮生長(zhǎng)因子受體后,它的兩個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域即可結(jié)合SOS,使之活化.4, 低分子量G蛋白R(shí)as的活化:SOS可促進(jìn)Ras釋放GDP,結(jié)合GTP的反應(yīng),使Ras激活.活化的Ras作用其下游分子Raf,由此啟動(dòng)了MAPK的三級(jí)激活過(guò)程.5, MAPK的級(jí)聯(lián)激活:Raf是一種MAPKKK,它作用于MEK,使之磷酸化而激活,活化的MEK在作用于MAPK家族的ERK1,使之磷酸化激活由此完成了三級(jí)激活.6, 轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化及轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用:活化的ERK可以轉(zhuǎn)至細(xì)胞核內(nèi),使某些轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子發(fā)生磷酸化,從而影響基因的轉(zhuǎn)錄.(七),cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑答:1,組成:胞外信息分子(主要是胰高血糖素,腎上腺素和促腎上腺皮質(zhì)激素),受體,G蛋白,AC,cAMP , PKA.2,途徑:信號(hào)分子與受體結(jié)合,引起受體構(gòu)象變化受體活化G蛋白活化后的G蛋白激活腺苷酸環(huán)化酶(AC)AC 催化ATP生成cAMPcAMP 活化PKA,PKA使目標(biāo)蛋白磷酸化,調(diào)節(jié)代謝酶的
化學(xué)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1