05版藥典微生物限度檢查法操作要點(diǎn)-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]：代表革蘭陽(yáng)性桿菌；霉菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證所用的菌株：白色念珠菌[CMCC（F）98001]：代表酵母菌；黑曲霉[CMCC（F）98003：代表霉菌；由于每個(gè)菌株代表不同類型的菌，所以只有這五個(gè)菌株的回收率均達(dá)到要求，才表明樣品中污染的各種類型的菌都可能檢出來(lái)，否則，所得的結(jié)果是不能真實(shí)地反映樣品的污染情況的。 1．常規(guī)法就是取1:10的供試液1ml和50~100個(gè)試驗(yàn)菌株加入到1個(gè)平皿中，立即傾注相應(yīng)的瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，培養(yǎng)，計(jì)算各菌株的回收率。每lml供試液所注的平皿中生長(zhǎng)的菌數(shù)之和即為lml的菌落數(shù)，計(jì)算每1ml供試液的平均菌落數(shù)，按平皿法計(jì)數(shù)規(guī)則報(bào)告菌數(shù)；控制菌檢查時(shí)，可加大增菌培養(yǎng)基的用量。沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或真菌瓊脂培養(yǎng)上。 驗(yàn)證方法（1）試驗(yàn)組 取規(guī)定量供試液及10~100cfu試驗(yàn)菌加入增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查法進(jìn)行檢查。檢查時(shí)，按已驗(yàn)證的計(jì)數(shù)方法進(jìn)行供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌菌數(shù)的測(cè)定。 培養(yǎng)和計(jì)數(shù) 除另有規(guī)定外，細(xì)菌培養(yǎng)48小時(shí)，逐日點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，一般以48小時(shí)的菌落數(shù)報(bào)告；霉菌、酵母菌培養(yǎng)72小時(shí)，逐日點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)，一般以72小時(shí)的菌落數(shù)報(bào)告；必要時(shí)，可適當(dāng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至5～7天進(jìn)行菌落汁數(shù)并報(bào)告。菌數(shù)報(bào)告規(guī)則 宜選取細(xì)菌、酵母菌平均菌落數(shù)在30～300之間、霉菌平均菌落數(shù)在30～100之間的稀釋級(jí)，作為菌數(shù)報(bào)告(取兩位有效數(shù)字)的依據(jù)。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。若供試品每1g或lml所含的菌數(shù)較多時(shí)，可取適宜稀釋級(jí)的供試液lml，過(guò)濾。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn) 供試品進(jìn)行控制菌檢查時(shí)，應(yīng)做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)。 膽鹽乳糖發(fā)酵管若無(wú)菌生長(zhǎng)、或有菌生長(zhǎng)但不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，判該管未檢出大腸菌群；若產(chǎn)酸產(chǎn)氣，應(yīng)將發(fā)酵管中的培養(yǎng)物分別劃線接種于曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)18～24小時(shí)。各培養(yǎng)基管在厭氧條件下培養(yǎng)72～96小時(shí)。若供試品的細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)及控制菌三項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果均符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定，判供試品符合規(guī)定；若其中任何一項(xiàng)不符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定，判供試品不符合規(guī)定。若上述可疑菌落為革蘭陽(yáng)性梭菌，有或無(wú)卵圓形或球形的芽孢，過(guò)氧化氫酶陰性，判供試品檢出梭菌，否則判供試品未檢出梭菌。 根據(jù)大腸菌群的檢出管數(shù)，按表3報(bào)告1g或lml供試品中的大腸菌群數(shù)。陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。陰性對(duì)照試驗(yàn) 取試驗(yàn)用的稀釋液lml照上述薄膜過(guò)濾法操作，作為陰性對(duì)照。為發(fā)揮濾膜的最大過(guò)濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。 (3)當(dāng)各稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)均小于30，以最低稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)。一般營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細(xì)菌計(jì)數(shù)；玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)；酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于酵母菌計(jì)數(shù)。取供試液lml，置直徑90mm的無(wú)菌平皿中（培養(yǎng)基稀釋法，則將1ml供試液均勻分注入2個(gè)或以上的平皿中），注入15~20
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