生物化學(xué)第六章酶ppt課件-文庫吧在線文庫
【正文】 關(guān)系 ? 在酶促反應(yīng)系統(tǒng)中，當(dāng)?shù)孜餄舛却蟠蟪^酶的濃度，酶被底物飽和時，反應(yīng)速率達最大速率。 四、 pH通過改變酶和底物分子解離狀態(tài)影響反應(yīng)速率 ? 酶催化活性最高時反應(yīng)體系的 pH稱為酶促反應(yīng)的最適 pH (optimum pH)。 這種抑制作用稱為競爭性抑制作用 。 這樣 ， 既減少從中間產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的量 ，也同時減少從中間產(chǎn)物解離出游離酶和底物的量 。 產(chǎn)率％ = 純化步驟 總蛋白 mg 總活力 . 比活力./mg 回收率％ 純化倍數(shù) 勻漿液 106 106 2 100 1 等電點沉淀 4 104 106 35 50 DEAE柱色譜 8 103 1 106 125 36 CM柱色譜 5 103 9 105 180 32 90 一、寡聚酶 寡聚酶 (oligomeric enzyme) 含有 2個以上的亞基，多的可含 60個亞基，巧妙地結(jié)合成具有催化活性的酶。 ? 同工酶存在于同一種屬或同一個體的不同組織或同一細胞的不同亞細胞結(jié)構(gòu)中，它使不同的組織、器官和不同的亞細胞結(jié)構(gòu)具有不同的代謝特征。 變構(gòu)激活 變構(gòu)抑制 變構(gòu)酶的Ｓ形曲線 [S] V 無變構(gòu)效應(yīng)劑 酶的變構(gòu)調(diào)節(jié)是體內(nèi)代謝途徑的重要快速調(diào)節(jié)方式之一。 當(dāng)抗體和底物結(jié)合時 ， 就可使底物轉(zhuǎn)變?yōu)檫^渡態(tài)進而發(fā)生催化反應(yīng) 。 （二）酶的分子工程是方興未艾的酶工程學(xué) 酶分子工程主要是利用物理 、 化學(xué)或分子生物學(xué)方法對酶分子進行改造 ， 包括對酶分子中功能基團進行化學(xué)修飾 、 酶的固定化 、抗體酶等等 ， 以適應(yīng)醫(yī)藥業(yè) 、 工業(yè) 、 農(nóng)業(yè)等的某種需要 ?？寡赣欣w溶酶、葡激酶、尿激酶與鏈激酶，后兩者的作用是使無活性的纖溶酶原轉(zhuǎn)化為有活性的纖溶酶，使血液中纖維蛋白溶解，防止血栓形成。 三、固定化酶及其在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用 ?固定化酶 （ immobilized enzyme） 是將水溶性酶經(jīng)物理或化學(xué)方法處理后 ， 成為不溶于水但仍具有酶活性的酶衍生物 。 6．其他酶類藥物 細胞色素 C是呼吸鏈電子傳遞體 ，可用于治療組織缺氧。上述酶適用于消炎、消腫、消瘡、排膿與促進傷口愈合。 酶可以代替同位素與某些物質(zhì)相結(jié)合 ， 從而使該物質(zhì)被酶所標記 。核酶的底物是 RNA分子，可催化 RNA的切割和剪接。調(diào)節(jié)酶分子中有活性區(qū)和調(diào)節(jié)區(qū)，其催化活力可因與調(diào)節(jié)劑的結(jié)合而改變，有調(diào)節(jié)代謝反應(yīng)的功能。如鼠肝蘋果酸脫氫酶含 2個亞基，酵母己糖激酶含 4個亞基，大腸桿菌谷氨酰胺合成酶含 12個亞基。 ? 種類 ?必需激活劑 (essential activator) ?非必需激活劑 (nonessential activator) 第五節(jié) 酶的分離、提純及活性測定 一、酶的分離與提純 (一 ) 酶的抽提 1．破碎細胞膜 2．抽提 一般的酶都可以用稀鹽、稀酸或稀堿的水溶液在低溫下抽提出來。 但酶 底物 抑制劑復(fù)合物 (ESI)不能進一步釋放出產(chǎn)物 。 （一）不可逆性抑制劑主要與酶共價結(jié)合 ESSA s C H C H C l +C H 2 S HC H S HC H 2 O HES HS H+C H 2 SC H SC H 2 O HA s C H C H C lR OR 39。 ? 酶促反應(yīng)速率最快時反應(yīng)體系的溫度稱為酶促反應(yīng)的最適溫度 (optimum temperature)。 Km值 Vmax ?意義： Vmax=k3 [E] ?定義： Vm是酶完全被底物飽和時的反應(yīng)速率，與酶濃度成正比。 [S] V Vmax ?隨著底物濃度的增高： 反應(yīng)速率不再成正比例加速；反應(yīng)為混合級反應(yīng)。 ?這種鄰近效應(yīng) (proximity effect)與定向排列(orientation arrange)實際上是將分子間的反應(yīng)變成類似于分子內(nèi)的反應(yīng)，從而提高反應(yīng)速率。 （三）酶原的激活使無活性的酶原轉(zhuǎn)變成有催化活性的酶 ? 酶原 (zymogen) ? 酶原的激活 ? 酶原激活的機理 酶 原 分子構(gòu)象發(fā)生改變 形成或暴露出酶的活性中心 一個或幾個特定的肽鍵斷裂，水解掉一個或幾個短肽 在特定條件下 賴 纈 天 天 天 天 甘 異 賴 纈 天 天 天 天 纈 組 絲 S S S S 46 183 甘 異 纈 組 絲 S S S S 腸激酶 胰蛋白酶 活性中心 胰蛋白酶原的激活過程 ? 酶原激活的生理意義 避免細胞產(chǎn)生的酶對細胞進行自身消化，并使酶在特定的部位和環(huán)境中發(fā)揮作用，保證體內(nèi)代謝正常進行。 轉(zhuǎn)移的基團 小分子有機化合物（輔酶或輔基） 名 稱 所含的維生素 氫原子（質(zhì)子） NAD＋ （尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸，輔酶 I 尼克酰胺（維生素 PP）之一 NADP＋ （尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，輔酶 II 尼克酰胺（維生素 PP）之一 FMN（黃素單核苷酸） 維生素 B2（核黃素） FAD（黃素腺嘌呤二核苷酸） 維生素 B2（核黃素） 醛基 TPP（焦磷酸硫胺素） 維生素 B1（硫胺素） ?；? 輔酶 A（ CoA） 泛酸 硫辛酸 硫辛酸 烷基 鈷胺素輔酶類 維生素 B12 二氧化碳 生物素 生物素 氨基 磷酸吡哆醛 吡哆醛（維生素 B6之一） 甲基、甲烯基、甲炔基、甲?；纫惶紗挝? 四氫葉酸 葉酸 某些輔酶（輔基）在催化中的作用 ? 輔酶中與酶蛋白共價結(jié)合的輔酶又稱為輔基(prosthetic group)。 ? 活性中心外的必需基團 底 物 活性中心以外的必需基團 結(jié)合基團 催化基團 活性中心 ? 溶菌酶的活性中心 ? 溶菌酶的活性中心是一裂隙 ， 可以容納肽多糖的 6個單糖基 （ A，B， C， D， E， F） ，并與之形成氫鍵和van derwaals力 。 酶的這種特性稱為酶的特異性或?qū)Ｒ恍?。④酶的催化活性是受到調(diào)節(jié)和控制的。③酶具有高度的專一性，即酶對催化的反應(yīng)和所作用的物質(zhì)有嚴格的選擇性。 ?酶和一般催化劑加速反應(yīng)的機理都是降低反應(yīng)的活化能 (activation energy)。 第三 節(jié) 酶的命名與分類 The Naming and Classification of Enzyme （一）酶可根據(jù)其催化的反應(yīng)類型予以分類 1. 氧化還原酶類 (oxidoreductases) 2. 轉(zhuǎn)移酶類 (transferases ) 3. 水解酶類 (hydrolases) 4
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