血紅蛋白的提取和分離(優(yōu)質(zhì)課)(存儲版)
【正文】 ,2.凝膠色譜(s232。 ⑤安裝其他附屬結(jié)構(gòu)。) 及別離范圍。p224。,〔3〕樣品參加(jiār249。貼壁加樣。ng)正常。 fǒu)完成了對血液樣品的處理？你能描述處理后的樣品發(fā)生了哪些變化嗎？,第三十四頁，共四十一頁。)： 樣品處理、粗別離、純化和純度鑒定。注意：液面不要低于凝膠外表，否那么可能有氣泡混入(h249。 ②滴加透析樣品：吸管吸1ml樣品加到色譜柱的頂端，滴加樣品時，吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動加樣，同時注意不要破壞凝膠面。使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動。,第三十九頁，共四十一頁。,第四十頁，共四十一頁。裝填凝膠柱時不得有氣泡存在：因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低別離效果。,。樣品處理→粗別離→純化→純度鑒定。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。貼壁加樣?！苍趧e離過程中，如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動，說明色譜柱制作成功〕 ⑥注意：正確的加樣操作：不要觸及并破壞凝膠面。,〔3〕樣品參加(jiār249。i)別離的完整過程嗎？,第三十六頁，共四十一頁。,第三十五頁，共四十一頁。jiān)過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，也得不到純潔的紅細胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。)后的蛋白,第三十二頁，共四十一頁。,〔3〕樣品(y224。,〔2〕凝膠色譜(s232。 B、裝填：將凝膠懸浮液一次性緩慢倒入色譜柱 內(nèi)，裝填時輕輕敲動色譜柱，使凝膠填裝均勻 注意： 裝填時盡量緊密：降低凝膠顆粒之間的空隙。)，膨脹程度(ch233。 ③頂塞的制作：打孔→安裝玻璃管。y242。d236。,甲苯(jiǎ běn)層〔無色透明〕,白色(b225。)血紅蛋白溶液：,①過程：將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以2000r/min的速度(s249。,(2)血紅蛋白(xu232。):,去除(q249。,第十七頁，共四十一頁。)→純化→純度鑒定,1.樣品(y224。)進行電泳，根據(jù)分子量的標準蛋白的電泳區(qū)帶位置，可以測定未知蛋白質(zhì)的分子量。)單條肽鏈的分子量。ngch233。ng):,瓊脂糖凝膠電泳、聚丙稀酰胺凝膠電泳。n)：,帶電粒子在電場(di224。nɡ y232。ini224。,4.凝膠色譜法別離蛋白質(zhì)的原理(yu225。n)：,〔一〕 凝膠色譜法〔分配色譜法〕,第三頁，共四十一頁。,根底知識,2.凝膠：,大多數(shù)凝膠是由多糖類化合物〔如葡聚糖或 瓊脂糖〕構(gòu)成(g242。,血紅蛋白的提取(t237。,根底知識,凝膠色譜法,凝膠電泳法,第二頁，共四十一頁。ini224。,第四頁，共四十一頁。),1.概念(g224。),根底知識,3.緩沖溶液(huǎn chōnɡ r243。ini224。ix237。,N,N’亞甲基雙丙烯酰胺〔形成(x237。解聚成單條肽鏈，因此測定的結(jié)果只是(zhǐsh236。ngsh237。n)操作,樣品處理→粗別離(fēnl237。yǒu)細胞核，含有DNA，便于進行DNA的提??；人的紅細胞無細胞核，結(jié)構(gòu)簡單，血紅蛋白含量豐富，便于提取血紅蛋白。,(1)紅細胞的洗滌(xǐd237。,第十九頁，共四十一頁。,(3)別離(fēnl237。,第二十一頁，共四十一頁。)裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300ml的20mmol/l的磷酸緩沖液中〔pH為7.0〕，透析12h,②目的(m249。,利用(
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