血紅蛋白的提取與分離(存儲(chǔ)版)
【正文】 液面,②滴加透析樣品(y224。ng)的pH范圍內(nèi)，維持結(jié)構(gòu)和功能,⑥注意(zh249。,第四十九頁(yè)，共六十三頁(yè)。)的配制,①丙烯酰胺和N, N甲叉雙丙烯酰胺: 用去離子水配制29%〔29 g/100 mL，下同(xi224。y242。 x236。)膠制備,〔1〕根據(jù)(gēnj249。u)再補(bǔ)加濃縮膠溶液，使其充滿梳子之間的空隙，將凝膠垂直放置于室溫下聚合,②別離膠聚合(j249。 pǔ)別離之后的樣品,〔4〕濃縮膠聚合完全后〔30 min〕，小心(xiǎo xīn)移出梳子。將緊靠最左邊(zuǒ bian)一孔〔第一槽〕凝膠下部切去一角，以標(biāo)注凝膠的方位,第五十八頁(yè)，共六十三頁(yè)。ngxiǎn)，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。ng)。ch233。將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以2000r/min的速度離心10 min。n)別離效果,第六十三頁(yè)，共六十三頁(yè)。瓊脂糖凝膠電泳和聚丙稀酰胺凝膠電泳。ng)別離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。此外，還可以參加大分子的有色物質(zhì)，例如藍(lán)色葡聚糖—2000或紅色葡聚糖，觀察色帶移動(dòng)的情況(q237。)液至背景清楚,〔9〕脫色,〔10〕觀察結(jié)果,SDS電泳的成功關(guān)鍵之一是電泳過(guò)程中，待別是樣品制備過(guò)程中蛋白質(zhì)與SDS的結(jié)合程度,第五十九頁(yè)，共六十三頁(yè)。o)前沿進(jìn)入別離膠后，把電壓提高到15 V/cm，繼續(xù)電泳直至溴酚藍(lán)到達(dá)別離膠底部上方約1 cm處，關(guān)閉電源,〔6〕電泳(di224。樣品可以多加幾個(gè)，例如，血漿樣品紅細(xì)胞破碎后(即進(jìn)行凝膠色譜(s232。然后(r225。)時(shí)要戴好一次性手套,第五十四頁(yè)，共六十三頁(yè)。)液 0.1%的考馬斯亮藍(lán)R250，40%的甲醇，10%的冰醋酸,第五十三頁(yè)，共六十三頁(yè)。)膠和濃縮膠的Tris緩沖液,④ TEMED ：作用通過(guò)催化(cuī hu224。,〔三〕SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳,試劑(sh236。)蛋白，因此在凝膠色譜別離時(shí)可以通過(guò)觀察顏色來(lái)判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗脫液。,討論(tǎol249。)與洗脫,①調(diào)節(jié)(ti225。o)存在：,因?yàn)闅馀?q236。ili224。,底塞中插入的玻璃管的上部不得超出(chāochū)橡皮塞的凹穴底面，否那么難以鋪實(shí)尼龍網(wǎng)，還會(huì)導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)別離不徹底,本卷須知：,⑤安裝其他(q237。)樣品中分子量較小的雜質(zhì),①過(guò)程(gu242。,用濾紙(lǜzhǐ)過(guò)濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體,③別離(fēnl237。i)溶液,①過(guò)程,將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以2000r/min的速度離心10 min,第三十二頁(yè)，共六十三頁(yè)。h243。nb225。nɡ)及作用,本課題可選用豬、牛、羊或其他(q237。n)操作,樣品處理——粗別離(fēnl237。)測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量？,使用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳(di224。d236。,第二十二頁(yè)，共六十三頁(yè)。,類型(l232。n),帶電粒子在電場(chǎng)作用(zu242。tā)所對(duì)應(yīng)的次級(jí)鹽,第十六頁(yè)，共六十三頁(yè)。 suān)和弱酸(ru242。nɡ y232。fǎ)進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快。l236。ng)、變性(bi224。18,第七頁(yè)，共六十三頁(yè)。)羧基〔不計(jì)R基上的氨基和羧基〕。,生理功能,細(xì)胞和生物體的結(jié)構(gòu)物質(zhì)，是人體發(fā)育和組織更新的主要原料，具有運(yùn)輸、調(diào)節(jié)、免疫(miǎny236。nɡ)單位,氨基酸,氨基酸通式(tōngsh236。nb225。ng d224。,根本組成(zǔ ch233。n),第四頁(yè)，共六十三頁(yè)。)氨基，另一端只有一個(gè)(yī ɡ232。a (n m) nx236。,〔三〕 凝膠色譜法,②實(shí)例(sh237。nlǐ)—分子篩效應(yīng),③分子量較大的蛋白質(zhì)無(wú)法(w,〔四〕緩沖溶液(huǎn chōnɡ r243。)的組分分類,①弱酸(ru242。 jiǎn)鹽,③多元弱酸的酸式鹽和其他(q237。ini224。n)分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的別離,第十九頁(yè)，共六十三頁(yè)。,第二十一頁(yè)，共六十三頁(yè)。由幾條肽鏈組成的蛋白質(zhì)復(fù)合體在SDS的作用下會(huì)解聚成單條肽鏈，因此測(cè)定(c232。h233。y224。n)，此基團(tuán)可攜帶一分子氧或一分子二氧化碳，血紅蛋白因含有血紅素而呈紅色,②組成(zǔ ch233。ng d224。,(3)血紅蛋白(xu232。nb225。i)的水溶液層
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