6第三章-抗體制藥(二)(存儲(chǔ)版)
【正文】 第三章 抗體制藥 第四十頁(yè)，共六十六頁(yè)。 43 第三章 抗體制藥 第四十三頁(yè)，共六十六頁(yè)。 ? 放射性免疫顯像的優(yōu)點(diǎn)：在體內(nèi)有確切定位腫瘤的作用；在體內(nèi)可檢出 厘米大小的病灶；小分子抗體容易到達(dá)腫瘤部位；抗體在腫瘤部位可保存 69 日；能觀察抗體在血中的半衰期和可能出現(xiàn)的不良反響。 放射性核素標(biāo)記的抗體治療藥物 ? 抗體作為放射性核素的導(dǎo)向載體。 ? MDR是由基因調(diào)控的，其編碼蛋白稱為 P糖蛋白，其中 P170是與腫瘤耐藥相關(guān)的主要蛋白，由 Mdr1基因編碼， 1280氨基酸殘基，分子量 170K。 ? 先克隆出細(xì)胞基因，再利用基因重組技術(shù)去除毒素中非特異性結(jié)合部位基因，經(jīng)過(guò)改造的毒素基因再與載體基因的互補(bǔ) DNA 重組，轉(zhuǎn)入受體菌中表達(dá)，形成融合蛋白，再經(jīng)純化可得到重組的免疫毒素。目前生產(chǎn)抗 HBsAg的單克隆抗體技術(shù)有基因工程與細(xì)胞工程。 57 第三章 抗體制藥 第五十七頁(yè)，共六十六頁(yè)。 ? 固定化抗大鼠 K 輕鏈單抗的制備： ? 載體也為 Sepharose 4B，其活化方法與制備固定化 tPA 相同。 ? 表達(dá)腹水瘤生產(chǎn)技術(shù)：向健康的 Lou／ c 大鼠腹腔注射 1ml 降植烷 (Pristane)，飼養(yǎng) 1— 9 周后，向大鼠腹腔接種 5x106 個(gè)雜交瘤細(xì)胞，飼養(yǎng) 9～ 11 天后即可明顯產(chǎn)生腹水，待腹水量到達(dá)最大限度而大鼠又瀕于死亡之前時(shí)，處死動(dòng)物，用毛細(xì)管抽取腹水，一般可得 50ml 左右。雙鏈抗體制備方法：化學(xué)交聯(lián)法、粘性蛋白結(jié)構(gòu)域融合法和接頭長(zhǎng)度控制法。 。 內(nèi)容總結(jié) 第三章 抗體制藥〔二〕。 63 第三章 抗體制藥 第六十三頁(yè)，共六十六頁(yè)。 于細(xì)胞融合前處死大鼠，用碘酒棉球及酒精棉球先后對(duì)右上腹部消毒，剖開(kāi)腹部，用無(wú)菌剪刀與鑷子取出脾臟，用 ， ／ L 磷酸緩沖液洗去血液，在無(wú)菌燒杯或培養(yǎng)皿中切成 1mm3 小塊，再用磷酸緩沖液洗滌 3～ 4 次，直至澄清，傾去洗滌液，參加組織塊 5～ 6 倍體積 (質(zhì)量／體積 )的 %胰蛋白酶溶液 (— )于 37 度保溫，消化 20 一 40min，每 10min 輕搖消化瓶 1 次，直至組織塊松軟為止，傾去胰蛋白酶溶液，再用上述磷酸緩沖液洗滌 3～ 5 次，然后參加少量磷酸緩沖液用 10ml 吸管吹打分散，至大局部組織塊分散為細(xì)胞，用兩層無(wú)菌紗布過(guò)濾，未分散的組織塊再加少量磷酸緩沖液吹打和分散，合并細(xì)胞濾液，離心收集細(xì)胞并用磷酸緩沖液洗滌 2— 3 次，然后用無(wú)血清的 DMEM 培養(yǎng)液稀釋制成細(xì)胞懸浮液，即為免疫大鼠脾淋巴細(xì)胞親本，備用。是使 Eagle培養(yǎng)基中 15 種氨基酸濃度增加 l 倍， 8 種維生素濃度增加 3 倍而成，用于細(xì)胞培養(yǎng)，提高了細(xì)胞生長(zhǎng)效果。 單克隆抗體生產(chǎn)工藝實(shí)例 抗 HBsAg的單克隆抗體生產(chǎn)工藝 抗乙型肝炎外表抗原 (HBsAg)單克隆抗體是專一性識(shí)別HBsAg 的單一抗體，能與 HBsAg 產(chǎn)生免疫反響。 免疫毒素的制備 ? 來(lái)源：主要是細(xì)菌毒素和植物毒素。 49 第三章 抗體制藥 第四十九頁(yè)，共六十六頁(yè)。 ? 原因：抗體相對(duì)分子量大，穿透力低，不能到達(dá)靶部位或攝取量低；鼠源性抗體的排斥反響。 45 第三章 抗體制藥 第四十五頁(yè)，共六十六頁(yè)。 熒光抗體診斷試劑 ? 是用熒光色素，如異硫氰酸熒光素〔 FITC〕、羅丹明〔 RB200〕、藻紅素〔 PE〕等標(biāo)記抗體蛋白，即成熒光抗體。 單克隆抗體是應(yīng)用 B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)抗 A 或抗 B血清。 37 第三章 抗體制藥 第三十七頁(yè)，共六十六頁(yè)。 33 第三章 抗體制藥 第三十三頁(yè)，共六十六頁(yè)。 29 第三章 抗體制藥 第二十九頁(yè)，共六十六頁(yè)。 ? 全人抗體面臨的關(guān)鍵問(wèn)題：持續(xù)分泌抗體的人 B細(xì)胞、抗體分泌細(xì)胞的保持。 噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的優(yōu)勢(shì) 18 第三章 抗體制藥 第十八頁(yè)，共六十六頁(yè)。 11 第三章 抗體制藥 第十一頁(yè)，共六十六頁(yè)。 7 第三章 抗體制藥 第七頁(yè)，共六十六頁(yè)。 3 第三章 抗體制藥 第三頁(yè)，共六十六頁(yè)。第三章 抗體制藥〔二〕 ?3學(xué)時(shí) 1 第三章 抗體制藥 第一頁(yè)，共六十六頁(yè)。 ? 三鏈抗體：在制備單鏈抗體時(shí)，當(dāng)接頭的長(zhǎng)度為 2個(gè)或 2個(gè)以下氨基酸殘基時(shí)，或者直接把 VH結(jié)構(gòu)域 N末端與 VL結(jié)構(gòu)域 C末端相連，通過(guò)非共價(jià)鍵而形成三聚體，稱三鏈抗體。 四、基因工程抗體和抗體工程 ? 抗體研究的三大階段： 1890年
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