12-基因工程ppt-第八章基因工程(存儲(chǔ)版)
【正文】 限制性內(nèi)切酶與修飾酶。 ? 發(fā)現(xiàn) 100200個(gè)子代噬菌體中，只有 1個(gè)可感染 B，即其他的噬菌體在 B中受到限制，唯有這一個(gè)受到修飾（甲基化）后感染成功。339。Xgal(5 溴 4氯 3吲哚 βD半乳糖苷 ) bp —1534 — 994 — 695 — 515 — 377 — 237 A B C M 克隆基因的表達(dá) ? 載體有轉(zhuǎn)錄、翻譯的元件； 密碼子通用 ? 原核表達(dá)體系 – 原核表達(dá)載體的標(biāo)準(zhǔn) *合適的篩選標(biāo)志 *強(qiáng)啟動(dòng)子 *翻譯控制序列 *多克隆位點(diǎn) ? 融合蛋白（ fusion protein,包涵體） – 表達(dá)的蛋白質(zhì)或多肽的 N末端由原核 DNA編碼， C末斷由克隆的真核 DNA編目。 ? 限制性酶： HindⅡ ? Nathans：用限制性酶切割猴子 SV40DNA，DNA測(cè)序。第八章 基因工程 ? 基因工程 ( geic engineering)、基因克隆、 DNA重組、 DNA克隆、分子克隆 ? 克隆（ clone） 無(wú)性繁殖 – 應(yīng)用酶學(xué)的方法，在體外將 目的基因 與 載體DNA結(jié)合成一具有自我復(fù)制能力的 DNA分子（ 復(fù)制子、重組體 ），繼而通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞、篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞，再進(jìn)行擴(kuò)增、提取獲得大量同一 DNA分子拷貝，或其 表達(dá)產(chǎn)物 。 ? 識(shí)別和切割序列：中心對(duì)稱的回文結(jié)構(gòu)。 目的基因的篩選和鑒定(screening/selection) ? 遺傳學(xué)方法 – 插入滅活法 (insertion inactivation):抗藥性標(biāo)志選擇 – 標(biāo)志補(bǔ)救 表達(dá)產(chǎn)物與營(yíng)養(yǎng)缺陷互補(bǔ) * α互補(bǔ) 藍(lán)白斑 篩選 ? 免疫學(xué)方法 ? 分子雜交 探針 – 原位雜交 ? PCR ? 限制性酶切圖譜 IPTG。 539。 ? 細(xì)菌 B：在缺甲硫氨酸的培養(yǎng)基中，細(xì)菌死亡。 ? 原因：細(xì)菌無(wú)法對(duì)自己的 DNA進(jìn)行修飾。339。 * 兩三個(gè)遺傳標(biāo)志，如抗藥性基因： 抗氨芐青霉素基因 (ampr) 、 抗四環(huán)素基因 (terr)； β半乳糖苷酶基因 (lac Z) 篩選標(biāo)志 * 多個(gè)限制酶的單一切點(diǎn)，即 多克隆位點(diǎn) (multiple cloning sites,MCS) 四環(huán)素抗性基因氨芐青霉素 抗性基因O r i
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