【正文】 點 – 回文結(jié)構(gòu) 4～ 6 bp –出現(xiàn)兩種末端 *粘性末端 粘端 *平頭末端 平端 ? 同工異源酶： 來源不同，但能識別和切割同一位點 ? 同尾酶： 識別序列不同，但產(chǎn)生相同的粘性末端 粘性末端與平頭末端 E coR ⅠG AA T TCC TT A AG5′ 3′5′3′5′ GC T T A AA A T T CG3′3′5′粘性末端Sma ⅠC CC G GGG GG C C C5′3′3′5′5′ C C CG G GG G GC C C3′3′5′平頭末端 修飾酶 ? DNA聚合酶 Ⅰ ? 逆轉(zhuǎn)錄酶 (reverse transcriptase) ? T4DNA連接酶 (T4 ligase) ? 堿性磷酸酶 (alkaline phosphatase) ? 末端脫氧核苷酰轉(zhuǎn)移酶 (terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT) ? Taq DNA聚合酶 DNA聚合酶 Ⅰ (pol Ⅰ )的活性 ? 5′至 3′的聚合活性 – 5′→ 3′ 方向 ? 核酸 外切酶活性 – 5′→ 3′ 外切酶活性 – 3′→ 5′ 外切酶活性 ? pol Ⅰ 經(jīng)枯草桿菌蛋白酶裂解可得大、小兩個片段 – 大片段 （ Klenow片段 ）：聚合活性、 3′→ 5′ 外切活性 常用的工具酶 核酸外切酶活性 ? 3′→5′ 外切酶活性 ? 5′→3′ 外切酶活性 5 ′→3′ 外切酶活性3 ′→5′ 外切酶活性′′′′5335 末端脫氧核苷酰轉(zhuǎn)移酶(TDT) 載體 vector ? DNA ，能在宿主細胞中進行自我復(fù)制和表達 ? 克隆載體、表達載體 – 原核載體 ：質(zhì)粒 (pBR322,pUC… ） 噬菌體（ λ， M13）等 – 真核載體 ：動物病毒載體 pLXSN等 常用的克隆載體 ? 質(zhì)粒 (plasmid)— 存在于細菌染色體外的小型環(huán)狀雙鏈 DNA分子 – 理想的質(zhì)粒 * 拷貝數(shù)多 。 ? 假設(shè)：限制性內(nèi)切酶與修飾酶。339。 ? 限制性酶： HindⅡ ? Nathans：用限制性酶切割猴子 SV40DNA，DNA測序。 ? 識別和切割序列：中心對稱的回文結(jié)構(gòu)。 539。 ? 原因：細菌無法對自己的 DNA進行修飾。 * 兩三個遺傳標志，如抗藥性