m第十四章基因工程(存儲版)
【正文】 胰島素 治療糖尿病 干擾素 (? 1b, ?2a, ? 2b, ?) 抗病毒感染及某些腫瘤 白細(xì)胞介素 激活、剌激各類白細(xì)胞 超氧化物歧化酶 抗組織損傷 單克隆抗體 利用其結(jié)合特異性進行診斷試驗、腫瘤導(dǎo)向治療 乙肝疫苗 (CHO, 酵母 ) 預(yù)防乙肝 口服重組 B亞單位菌體霍亂菌苗 預(yù)防霍亂 目 錄 目 錄 基因診斷 (geic diagnosis)是 利用分子生物學(xué)及分子遺傳的技術(shù)和原理 ， 在 DNA水平分析 、 鑒定遺傳疾病所涉及基因的置換 、 缺失或插入等突變 。 3180。 3180。 3180。C GATCC G G CCTAG + 目的基因用 Bam HⅠ 切割 GCC TA GGCC TA GGATCCGGATCCG載體 DNA用 Bam HⅠ 切割 GCC TA GGCC TA GGA TC CGGA TC CG重組體 GCC TA GGCC TA GGA TC CGGA TC CGGCC TAGCC TAGA TC CGGA TC CG載體自連 目的基因自連 同一限制酶切位點連接 目 錄 目 錄 Bam HⅠ Bg lⅡ GGATCC CCTAGG AGATCT TCTAGA G CCTAG GATCC G + + A TCTAG GATCT A 不同限制酶切位點（配伍末端）的連接 配伍末端的連接情況和同一限制酶切位點連接相似。 這兩個相同的粘性末端稱為 配伍未端 。末端 Klenow片段 又名 DNA聚合酶 I大片段，具有完整 DNA聚合酶 I的 5??3?聚合、 3??5?外切活性，而無 5??3?外切活性。 1980年 開始建造 第一家 應(yīng)用重組 DNA技術(shù)生產(chǎn)胰島素的工廠 1997年 英國羅林研究所成功的克隆了 多莉 目 錄 一 、 重組 DNA技術(shù)相關(guān)概念 克隆 (clone) 來自同一始祖的相同副本或拷貝的集合。 目 錄 目 錄 （三）轉(zhuǎn)導(dǎo)作用 當(dāng)病毒從被感染的細(xì)胞 （ 供體 ） 釋放出來 、 再次感染另一細(xì)胞 （ 受體 ） 時 ， 發(fā)生在供體細(xì)胞與受體細(xì)胞之間的 DNA轉(zhuǎn)移及基因重組即為 轉(zhuǎn)導(dǎo)作用 。 5180。 5180。 5180。 5180。 5180。 3180。 3180。 3180。 3180。 3180。 3180。 3180。 以 ， 了解同源重組機制的 Holliday模型 。 5180。 5180。 5180。 5180。 3180。 Holiday中間體 5180。 目 錄 目 錄 片段重組體 ： 切開的鏈與原來斷裂的是同一條鏈，重組體含有一段異源雙鏈區(qū)，其兩側(cè)來自同一親本DNA。 5180。 3180。 3180。 3180。 3180。 3180。 H片段上有兩個啟動子 P， 其一驅(qū)動 hin基因表達(dá) ， 另一正向時驅(qū)動 H2和 rH1基因表達(dá) ， 反向 (倒位 )時 H2和 rH1不表達(dá) 。 也稱 基因克隆或重組 DNA 。羥基末端進行同質(zhì)多聚物加尾 堿性磷酸酶 切除末端磷酸基 目 錄 限制性核酸內(nèi)切酶 定義 限制性核酸內(nèi)切酶 (RE)是 識別 DNA的特異序列 , 并在識別位點或其周圍切割雙鏈 DNA的一類內(nèi)切酶 。 表達(dá)載體 (expression vector) 為使插入的外源 DNA序列可轉(zhuǎn)錄翻譯成多肽鏈而特意設(shè)計的載體稱為 表達(dá)載體 。 5180。 目的基因 限制酶或機械剪切 限制酶 5180。 5180。 λ核酸外切酶 λ核酸外切酶 末端轉(zhuǎn)移酶 + dATP 末端轉(zhuǎn)移酶 + dTTP T4 DNA連接酶 15186。 目 錄 （四）基因治療 定義 基因治療 (gene therapy)是向有功能缺陷的細(xì)胞補充相應(yīng)功能的基因，以糾正或補償其基因的缺陷，從而達(dá)到治療的目的。 Eco RⅠ Eco RⅠ Eco RⅠ Eco RⅠ 目 錄 目 錄 受體菌條件 安全宿主菌 （從大腸桿菌 K12改造） 限制酶和重組酶缺陷 處于感受態(tài) 導(dǎo)入方式 轉(zhuǎn)化 轉(zhuǎn)染 感染 （四）重組 DNA導(dǎo)入受體菌 目 錄 （五）重組體的篩選 1. 直接選擇法 (1) 抗藥性標(biāo)記選擇 (2) 標(biāo)志補救 (marker rescue) (3) 分子雜交法 原位雜交
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