實驗四__重組蛋白的sds-page(存儲版)
【正文】 ? 在不連續(xù)體系 SDSPAGE中 ,分離膠與濃縮膠中均含有 TEMED和 AP,試述其作用 ? 樣品液為何在加樣前需在沸水中加熱幾分鐘 ? 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 電泳條件： 開始電壓 90V,待樣品進入分離膠時 ，恒壓 130V， 電泳 約 ,直至 前沿 距下端約 。 用樣品緩沖液（ TrisCl， ）配制成每種標準蛋白質濃度均為 /ul的溶液，－ 20℃ 保存。 只有在蛋白質分子內的二硫鍵被徹底還原的情況下 ， SDS才能定量地結合到蛋白質分子上去 ， 并使之具有相同的構象 。 解聚后的氨基酸側鏈與 SDS充分結合形成蛋白質 SDS復合物。 分子量小且為球形的蛋白質分子所受阻力小，移動快，走在前面 。 1 樣品濃縮效應 (1)凝膠孔徑不連續(xù)性 (2)緩沖體系離子成分及 pH值的不連續(xù)性 (3)電位梯度的不連續(xù)性 (1)凝膠孔徑不連續(xù)性 : 濃縮膠 T=5% 孔徑大 分離膠 T=7%－ 15% 孔徑小 在 2層凝膠交界處，由于凝膠孔徑的不連續(xù)性使樣品遷移受阻而壓縮成很窄的區(qū)帶。 ④ 四甲基乙二胺（ TEMED） ： 是加速劑，它催化過硫酸銨形成自由基。 初步掌握應用此法測定蛋白質分子量的操作技術。 過量氧會影響鏈的延長和聚合，所以過硫酸銨 (AP)催化的化學聚合要水封以隔 O2。 當進入 分離膠 時，甘氨酸解離度增加，其有效遷移率超過蛋白質 。 3 電荷效應 進入 ，各種蛋白質所帶凈電荷不同，而有不同的遷移率。 在一定條件下， SDS與大多數(shù)蛋白質的結合比為SDS的硫酸根帶負電，使各種蛋白質的 SDS復合物都帶上相同密度的負電荷，大大超過蛋白質分子原有的電荷，因而屏蔽了不同種類蛋白質分子之間原有的電荷差異，從而使蛋白質分子的電泳遷移率主要取決于它的分子量，而與所帶電荷和形狀無關，這樣便能直接從電泳遷移率計算出蛋白質的分子量。 3. 樣品處理液的離子強度：應保持較低的離子強度 （ 低于 ） ， 這樣才能保證 SDS有較高的單體濃度 ， 與蛋白質充分結合 。棕色瓶 4℃ 保存。 用不銹鋼藥鏟撬開玻璃板 ，取出膠膜 。 :30:4321:30Mar2312Mar23 1故人江海別，幾度隔山川。 21:30:4321:30:4321:303/12/2023 9:30:43 PM 1成功就是日復一日那一點點小小努力的積累。 , March 12, 2023 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 2023年 3月 12日星期日 9時 30分 43秒 21:30:4312 March 2023 1一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。勝人者有力，自勝者強。 2023年 3月 12日星期日 下午 9時 30分 43秒 21:30: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 2023年 3月 下午 9時 30分 :30March 12, 2023 1行動出成果，工作出財富。 待測蛋白質分子量的計算 根據(jù)待測蛋白質的相對遷移率 ， 可以直接從標準曲線上查出該蛋白質的分子量 。 上下槽中加滿電極緩沖液 ， 移液槍或微量注射器加樣 ， 每孔 15ul。 通常根據(jù)樣品含有的蛋白質種類多少及所使用的檢測方法確定蛋白質濃度 ， 如用考馬斯亮藍染色 ， 每種蛋白的濃度應為 20～ 30μ g /ml,若用銀染
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