312基因工程的基本操作程序(麗)(存儲(chǔ)版)
【正文】 + + 預(yù)期三 + + 預(yù)期四 + 既含有抗四環(huán)素基因也含有抗氨芐青霉素基因 只含有抗四環(huán)素基因 只含有抗氨芐青霉素基因 既不含有抗四環(huán)素基因也 不含有抗氨芐青霉素基因 “ +”“ ”分別表示有無細(xì)菌生長(zhǎng) 原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu) 真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu) （ 啟動(dòng)子 ） （終止子） （終止子） （ 啟動(dòng)子 ） 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的獲取 二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建 三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 四、目的基因的檢測(cè)與鑒定 目的基因主要是指 ______________________ 編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 目的基因的獲取 供體生物細(xì)胞 取出 DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 即：將需要的基因從供體生物細(xì)胞內(nèi)提取出來 目前被廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金芽孢桿菌抗蟲基因、植物抗病基因（抗病毒、抗細(xì)菌 )、人胰島素基因等。 a、 目的基因 b、 啟動(dòng)子 c、 終止子 d、 標(biāo)記基因 e、 復(fù)制原點(diǎn) (三 )將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 ? 常用的受體細(xì)胞： 動(dòng)植物細(xì)胞、大腸桿菌、土壤農(nóng)桿菌、枯草桿菌等。Ti質(zhì)粒的 TDNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的染色體上 2.轉(zhuǎn)化 1. 檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體 DNA上是否插入了目的基因 提取受體生 物全部 DNA 適當(dāng)限制 酶切割 DNA片段 用同位素標(biāo)記的 目的基因片段雜交 顯 出 雜交帶 （表明目的基因已插入） DNA分子雜交技術(shù) 2. 檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA 提取受體生 物的 mRNA 用同位素標(biāo)記的 目的基因片段雜交 顯 出 雜交帶 （表明目的基因已轉(zhuǎn)錄出了 mRNA） 檢測(cè) DNA利用的是 DNA與 DNA雜交，檢測(cè) mRNA利用的是 DNA與 mRNA雜交。 c、 延伸（ 70℃ 75℃ ） ：在 Taq酶的作用下，從 引物的 5′ 端 → 3′ 端延伸，合成與模板互補(bǔ) 的 ________。 起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精
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