基因工程技術(shù)概述(存儲版)
【正文】 物 經(jīng) 42℃ 熱休克后，復(fù)合物被細(xì)胞吸收。 ? 溶液 II NaOH、 SDS。 01:51:5601:51:5601:51Tuesday, January 24, 2023 ? 1乍見翻疑夢，相悲各問年。 01:51:5601:51:5601:511/24/2023 1:51:56 AM ? 1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 上午 1時(shí) 51分 56秒 上午 1時(shí) 51分 01:51: ? 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 2023年 1月 上午 1時(shí) 51分 :51January 24, 2023 ? 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 :51:5601:51:56January 24, 2023 ? 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 1月 上午 1時(shí) 51分 :51January 24, 2023 ? 1少年十五二十時(shí)，步行奪得胡馬騎。 上午 1時(shí) 51分 56秒 上午 1時(shí) 51分 01:51: ? 沒有失敗，只有暫時(shí)停止成功！。 01:51:5601:51:5601:511/24/2023 1:51:56 AM ? 1以我獨(dú)沈久，愧君相見頻。 試劑作用： ? 溶液 I葡萄糖、 、 EDTA。 ? 轉(zhuǎn)化效率： 只有很少比例的細(xì)胞有能力摻入質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)化時(shí)大約在 1000個(gè) DNA分子中，只有一個(gè) DNA分子獲得成功。 堿性磷酸酶 根據(jù) DNA重組的需要，為防止兩 DNA片段末端之間連接，經(jīng)常采用堿性磷酸酶處理，使 DNA末端的 5′ P成為 5′ OH。也可做 DNA修復(fù)。Sal I) 其他方法： Bgl II AGATCT TCTAGA BamH I GGATCC CCTAGG A GATCT TCTAG A G GATCC CCTAG G 連接 策略 ： 選擇連接位點(diǎn)： （ 1） HindIII粘性末端 載體自身環(huán)化，四環(huán)素失活 ,方向不確定。 pFLAGCMV系列 (Sigma) TetOn/TetOff Expression Systems TetOff pTetsplice(pTetPTEN) pTetTAK PSVneo DNA分子的體外連接：方法 粘性末端：相同的粘性末端互相配對進(jìn)行連接 兩種情況： （ a） 目的基因和載體 用 同一種限制酶切割 后連接 。 是細(xì)菌染色體外能夠自我復(fù) 制的雙鏈環(huán)狀 DNA 分子?？蓪⒅亟M體 DNA導(dǎo)入適合的受體細(xì)胞，使所載荷的目的基因能夠復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯（ pCDNA3）。 ? 加上想要的標(biāo)簽，如 Flag, Myc, His, HA。 基因表達(dá) (gene expression)： 是指目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，研究功能。 片斷的回收與純化 載體： ? 載體 (Vector)是目的基因的運(yùn)載工具，其作用是將目的基因帶入受體細(xì)胞中，并使目的基因擴(kuò)增和表達(dá)。 質(zhì)粒載體 ? 具有 復(fù)制起始點(diǎn) ，這是質(zhì)粒自我增殖的必要條件。 ? 有幾個(gè)常用的限制性內(nèi)切酶的單一位點(diǎn)，分布在抗性基因上， 7種位于四環(huán)素選擇標(biāo)記上， 4種位于 Amp抗性基因上。 （ b） 目的基因和載體用兩種產(chǎn)生粘末端的限制酶 切割后連接 ， 可控制目的基因的插入方向 (定向克隆 )。四環(huán)素失活 （ 5） Not I修平 SalI 一個(gè)粘性末端，一個(gè)平端 SmaI修平 SalI 正向連接，四環(huán)素失活 PstI ？ SacI ？ 連接濃度： ? 片段與載體連接機(jī)率＞自身環(huán)化 ? 一般計(jì)算公式： 粘性末端： 載體片段含量
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