【正文】 末端。線狀DNA變性時(shí)彼此分開，復(fù)性慢而不準(zhǔn)確，互相之間聚集形成較大的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，離心后，與變性蛋白質(zhì)和 RNA一道沉淀下來，上清液中留存下的主要是環(huán)狀 DNA分子和少量的可溶性蛋白質(zhì)和部分的 RNA，這些可溶性蛋白質(zhì)和部分的 RNA可 通過苯酚抽提及RNA酶處理去除。 2023年 1月 24日星期二 1時(shí) 51分 56秒 01:51:5624 January 2023 ? 1做前，能夠環(huán)視四周；做時(shí)，你只能或者最好沿著以腳為起點(diǎn)的射線向前。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。 , January 24, 2023 ? 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 :51:5601:51:56January 24, 2023 ? 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國(guó)見青山。 非選擇性培養(yǎng)基上生長(zhǎng)數(shù)小時(shí)，球狀細(xì)胞復(fù)原開始增殖 ,抗生素基因表達(dá)。 ? T4DNA連接酶： 是從感染 T4噬菌體的 E． coli中分離得到的一種連接酶。 （ b） 目的基因和載體用兩種產(chǎn)生粘末端的限制酶 切割后連接 ， 可控制目的基因的插入方向 (定向克隆 )。 質(zhì)粒載體 ? 具有 復(fù)制起始點(diǎn) ，這是質(zhì)粒自我增殖的必要條件。 基因表達(dá) (gene expression)： 是指目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，研究功能?？蓪⒅亟M體 DNA導(dǎo)入適合的受體細(xì)胞，使所載荷的目的基因能夠復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯（ pCDNA3）。 pFLAGCMV系列 (Sigma) TetOn/TetOff Expression Systems TetOff pTetsplice(pTetPTEN) pTetTAK PSVneo DNA分子的體外連接：方法 粘性末端：相同的粘性末端互相配對(duì)進(jìn)行連接 兩種情況： （ a） 目的基因和載體 用 同一種限制酶切割 后連接 。也可做 DNA修復(fù)。 ? 轉(zhuǎn)化效率： 只有很少比例的細(xì)胞有能力摻入質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)化時(shí)大約在 1000個(gè) DNA分子中，只有一個(gè) DNA分子獲得成功。 01:51:5601:51:5601:511/24/2023 1:51:56 AM ? 1以我獨(dú)沈久，愧君相見頻。 2023年 1月 上午 1時(shí) 51分 :51January 24, 2023 ? 1少年十五二十時(shí)，步行奪得胡馬騎。 2023年 1月 上午 1時(shí) 51分 :51January 24, 2023 ? 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 01:51:5601:51:5601:511/24/2023 1:51:56 AM ? 1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 ? 溶液 II NaOH、 SDS。 CIP的比活性比 BAP高出 10倍以上，而且對(duì)熱敏感，便于加熱使其失活。四環(huán)素失活 （ 4）目的基因片段： Bgl II SalI，載體： BamH I SalI 反向，不能進(jìn)行表達(dá)。 ? 有兩個(gè)抗性基因，便于轉(zhuǎn)化子篩選。 高保真聚合酶： HF, Pfu, Probest 等。 ? 啟始及終止密碼子。 克隆載體 : PBR322 特點(diǎn)： ? 分子量小， ，便于操作。 （ 2） EcoRISalI定向，一般不會(huì)有載體自身環(huán)化，四環(huán)素失活 （ 3） XbaISalI反向，不能進(jìn)行表達(dá)。目前采用的堿性磷酸酶有兩種，即來源于大腸桿菌的細(xì)菌堿性磷酸酶（ BAP）和來源于小牛腸的小牛腸堿性磷酸酶（ CIP）。低滲，細(xì)胞變的脆弱而易于裂解， EDTA螯和金屬離子，防止 DNA降解。 , January 24, 2023 ? 很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒有。 2023年 1月 24日星期二 上午 1時(shí) 51分 56秒 01:51: ? 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。 2023年 1月 24日星期二 1時(shí) 51分 56秒 01:51:5624 January 2023 ? 1空山新雨后，天氣晚來秋。 :51:5601:51Jan2324