【正文】 被測酶 被測酶 始發(fā)反應(yīng) 始發(fā)反應(yīng) 指示反應(yīng) 指示酶 指示反應(yīng) 指示酶 A B C P Ex Ea Ei 輔助酶 輔助反應(yīng) 酶偶聯(lián)體系 輔助酶 輔助反應(yīng) P149 26 1. 酶偶聯(lián)反應(yīng)時相 酶偶聯(lián)反應(yīng)一開始不能反映酶活性，在反應(yīng)中存在幾個時相。此階段 340nm處 A出現(xiàn)明顯的線性變化。 P151 30 四、工具酶 工具酶：酶學(xué)分析中作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶。 如：葡萄糖、尿素、 β羥丁酸、甘油三酯、甲醇、血氨、 ALT、 AST、 LD、 GLD、 CK、 ALD、 G6PD、 ICD等。其定義為：特定條件下，一定波長的光，光徑為 ，通過所含吸光物質(zhì)的濃度為 。 掃描定量 光密度計 熒光計 P163 48 （二）色譜法 柱色譜法 離子交換色譜 親和色譜 商品化微型色譜柱 P164 49 （三）免疫分析法 免疫抑制法 免疫沉淀法 其它免疫學(xué)方法 利用同工酶的一種亞基與相應(yīng)抗體結(jié)合后，酶活性受到抑制，測定加與不加抗體前后樣品中酶活性的變化 利用分離提純的同工酶作抗原制備的抗體與含該型同工酶的待測樣品混合，在一定條件下抗原抗體復(fù)合物形成沉淀，離心后測定上清液中其它型別的酶活性，將加入抗體前測得的總活性減去上清液酶活性，即可求出被沉淀的同工酶的活性。血中 AST升高多來自心臟或肝臟損傷。 3. 標(biāo)本 GGT較穩(wěn)定，室溫下可放置 2d， 4℃ 可存放 1w， 20℃ 可儲存 1y； RBC中幾乎無 GGT，因此溶血標(biāo)本可以檢測。 3. 標(biāo)本 不得用溶血標(biāo)本， RBC中含有 AK，可干擾測定，引起測定值偏高；測定樣品宜用血清或肝素抗凝血漿，其它抗凝劑都抑制 CK活性。 LD LD5宜冷變性，不應(yīng)放在冰箱中 ， 25 ℃ 放 23d，LD活性變化不大。 4. 臨床意義 很多骨骼疾病如變形性骨炎等患者血中 ALP升高，我國常用于早期診斷佝僂病和軟骨病。 P171 71 七、淀粉酶及其同工酶 淀粉酶 （ amylase， AMY/AMS） 1. 催化反應(yīng) 將多種糖化合物，如淀粉、肝糖原等水解成糊精、麥芽糖和少量葡萄糖等產(chǎn)物的一組酶。 LPS在急性胰腺炎時活性升高的時間早， 上升的幅度大，持續(xù)的時間長，其診斷價值高于 AMY。 ，底物濃度對酶促反應(yīng)速度的 影響。 (3) AMY診斷胰腺炎其增幅與病情不成比例時，常預(yù)示壞死性胰腺炎。 P171 70 臨床意義 主要用于診斷前列腺癌 ，血清 ACP顯著上升，轉(zhuǎn)移性癌患者可達 4050ULN。 生長期兒童血清內(nèi) ALP主要來自成骨母細(xì)胞和生長中的骨軟骨細(xì)胞，少量來自肝。 一般成年人血中 LD同工酶存在如下規(guī)律：LD2LD1LD3LD4LD5，部分正常兒童血中可見 LD1LD2。CK由兩種不同亞基（ M， B）組成的二聚體，細(xì)胞質(zhì)中存在三種同工酶： CKBB(CK1)、 CKMB(CK2)、 CKMM(CK3)，線粒體中存在 CKMt(CK4)，其電泳速率最慢。 GSH＋氨基酸 γ谷氨酰氨基酸＋半胱氨酰甘氨酸 GGT P167 58 2. 組織分布 腎臟中含量最多，其次為胰、肺、肝等。其有兩種同工酶 ASTs、 ASTm，分別存在細(xì)胞質(zhì)及線粒體中。 P163 47 顯色染料 偶氮染料 四唑鹽 離子型化合物，易溶于水，難溶于一般的有機試劑，利用其進行的偶合反應(yīng)，生成不同顏色的偶氮色素進行同工酶譜檢測 受氫體作用，四唑鹽可被還原成紫紅色的 formazan，常用的有： NBT、 INT、 MTT等。 國際單位 1963年， 1IU＝ 1μmol/min （ 25 176。 33 2. NAD(P)+或 NAD(P)H偶聯(lián)的脫氫酶及其指示反應(yīng) 許多氧化還原反應(yīng)，尤其是作為工具酶如 LD、 GLD、G6PD等參與時，常將底物的 H去除后傳遞給 NAD (P)+形成NAD(P)H。 (4)適當(dāng)?shù)闹甘久傅挠昧?，反?fù)實驗法確定，即做到酶偶聯(lián)速率不隨酶量的增加而升高，并在所選的最適條件下，指示酶偶聯(lián)反應(yīng)速率和酶活性濃度成正比。 加入試劑 2（即 α酮戊二酸）啟動反應(yīng)，在初始階段，產(chǎn)物 α丙酮酸開始出現(xiàn)，并逐漸增多，但處于較低水平，指示酶反應(yīng)速度也較低，不能代表待測酶的 Vx。 P149 24 （ 1）在原反應(yīng)體系中加入一些試劑，其只和酶反應(yīng)物迅速作用，產(chǎn)生可被檢出的物質(zhì)，但該試劑不和酶反應(yīng)，也不影響酶的活性。 21 連續(xù)監(jiān)測法 （動力學(xué)法、速率法） 優(yōu)點： 容易找到直線區(qū)域，選擇線性反應(yīng)期來計算酶活性， 不需終止反應(yīng)。 15 零級 一級 [P] [S] V ＝ dp dt 反應(yīng)級數(shù) 時間 4. 酶促反應(yīng)進程 延滯期 線性期 非線性期 P147 Lag phase Zero order Linear phase First order 酶促反應(yīng)時間進程曲線 16 單試劑測定體系酶促反應(yīng)進程曲線 P148 17 結(jié)論： 為了計算酶活性濃度，必須根據(jù)線性反應(yīng)期（零級反應(yīng)期）的反應(yīng)速率才能準(zhǔn)確計算出酶活性濃度否則將導(dǎo)致誤差。 （三）飲 食 血清中大多數(shù)酶不受進食影響，故測定酶活性不一定需要空腹采血。 酶的組織分布 含酶量高且血流豐富的組織器官，其細(xì)胞內(nèi)酶進入血流的可能性大；除少數(shù)組織專一性酶以外，大多數(shù)血清酶不能特異反映某個特定組織的病變。 肝或網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對血清酶的清除 少數(shù)以酶原形式存在的血清酶類（凝血酶原、纖溶酶原）在活化后迅速被肝清除，網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)也可能參與血清酶（ LD、 AST、 AMY、 CK等）的清除。 ?有助于了解同一疾病不同酶升高持續(xù)時間的差異。如 AMI時，血中最先升高的是 CK（ MW： 85kD)， LD （ MW： 125kD)出現(xiàn)升高明顯延遲。 P145 9 四、血清酶的生理差異 （一）性 別 多數(shù)酶無差異，少數(shù)有差異 男性高于女性： CK、 ALP、 γGT 女性高于男性： LDH1（青年婦女） （二）年 齡 最明顯的例子是 ALP，新生兒血清中 ALP略高于成人， 1～ 5歲增至成人的 2～ 3倍，然后逐漸下降，到 10～ 15歲， ALP又明顯升高，可達成人的 3～ 5倍， 20歲后降至成人值。因此可根據(jù)酶促反應(yīng)進程曲線，采用合理的方法進行酶活性濃度的檢測。其是臨床測定酶活性濃度最常用方法。 （ 2） 利用一類人工合成的所謂色原性底物， 其本身為無色或微