紫外-可見(jiàn)分光光度分析法(存儲(chǔ)版)
【正文】 I ? ??? ??? *02022/8/31 10 ? 其中 ?Ee最大： 120 eV ? ?Ev次之： eV （伸縮和彎曲） ? ?Er最?。?? eV ? 可見(jiàn)，電子能級(jí)間隔比振動(dòng)能級(jí)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)間隔大 1~2個(gè)數(shù)量級(jí)，在發(fā)生電子能級(jí)躍遷時(shí)，伴有振 轉(zhuǎn)能級(jí)的躍遷，形成所謂的帶狀光譜。 ? ? 當(dāng)濃度以 g/L 表示時(shí)，稱 k 為吸光系數(shù)，以 a 表示，即 ? ? ? 當(dāng)濃度以 mol/L表示時(shí)，稱 k 為摩爾吸光系數(shù)，以 ? 表示，即 ? ? 比 a 更常用。 ? a）入射光的非單色性的影響 ：不同光對(duì)所產(chǎn)生的吸收不同，可導(dǎo)致測(cè)定偏差。 ? ? 只有 ??* 和 n?*兩種躍遷的能量小，相應(yīng)波長(zhǎng)出現(xiàn)在近紫外區(qū)甚至可見(jiàn)光區(qū)，特別是 ??* 躍遷對(duì)光的吸收強(qiáng)烈。 如 CH3CHO含水化合物有兩種可能的結(jié)構(gòu)： CH3CHOH2O及CH3CH(OH)2。 1. 電荷轉(zhuǎn)移躍遷 (Charge transfer transition) 一些同時(shí)具有電子予體 (配位體 )和受體 (金屬離子 )的無(wú)機(jī)分子 ， 在吸收外來(lái)輻射時(shí) ， 電子從予體躍遷至受體所產(chǎn)生的光譜 。如在 ，雙硫腙與 Hg2+生成穩(wěn)定有色配合物，而與 Pb2+、 Cu2+、 Ni2+、 Cd2+等離子生成的有色物不穩(wěn)定。 2022/8/31 49 2022/8/31 50 2022/8/31 51 2022/8/31 52 ? * 雙光束 ?光路：通過(guò)切光器將光源發(fā)出的光分成兩路，一路通過(guò)參比，一路通過(guò)樣品，再通過(guò)減法器扣除參比信號(hào)，從而將光源不穩(wěn)定的影響消除。 單波長(zhǎng)法 1．吸光系數(shù)法 2．標(biāo)準(zhǔn)曲線法 3．對(duì)照法：外標(biāo)一點(diǎn)法 4．標(biāo)準(zhǔn)加入法 多波長(zhǎng)法： 多波長(zhǎng)線性回歸法等 導(dǎo)數(shù)光譜法等 2022/8/31 63 蘆丁含量測(cè)定：取樣品 3mg稀釋至 25mL。 2022/8/31 56 2022/8/31 57 2022/8/31 58 ▲ 八、 紫外 可見(jiàn)光譜的應(yīng)用 定性分析 1）未知物鑒定 原則： 定性鑒別的依據(jù) → 吸收光譜的特征吸收光譜的形狀 → 吸收峰的數(shù)目 → 吸收峰的位置（波長(zhǎng)） → 吸收峰的強(qiáng)度 → 相應(yīng)的吸光系數(shù)。 常用紫外可見(jiàn)光度計(jì)儀器 ? 類型： 分光光度計(jì)分為 單波長(zhǎng)和 雙波長(zhǎng)儀器。 選波長(zhǎng) 選制備樣品 選擇掩蔽劑 選擇顯色劑 測(cè)定 2022/8/31 41 ? 2） 顯色劑用量 ： ? 配位數(shù)與顯色劑用量有關(guān)；在形成逐級(jí)配合物，其用量更要嚴(yán)格控制。 隨溶劑極性增加 ， 吸收光譜變得平滑 ， 精細(xì)結(jié)構(gòu)消失 。 對(duì)有機(jī)化合物：主要為連有雜原子的飽和基團(tuán) 例： —OH， —OR， —SH， —SR ， —NH—， —NR2—， —I 2022/8/31 28 ▲ 2)紅移和藍(lán)移 由于化合物結(jié)構(gòu)變化 （ 共軛 、 引入助 色團(tuán)取代基 ） 或采用不同溶劑后 吸收峰 位置向長(zhǎng)波方向的移動(dòng) ， 叫紅移吸收峰 位置向短波方向移動(dòng) ， 叫藍(lán)移 。 其吸收峰的位置與分子中特定的功能基團(tuán)密切相關(guān) ， 是有機(jī)化合物 、 無(wú)機(jī)配位化合物 、 生物分子的有效定性 、定量分析手段 。 多數(shù)具有拉平效應(yīng) ， 產(chǎn)生負(fù)干擾 ， 但光散射產(chǎn)生正干擾 。 2022/8/31 13 2022/8/31 14 ▲ 四 分光光度分析原理 （ LambertBeer 定律 ） I0 IV 吸光度 A：入射光強(qiáng)度與透射光強(qiáng)度之比的對(duì)數(shù) 。 2022/8/31 9 ▲ 三 、 分子吸收光譜的形成 ：運(yùn)動(dòng)的分子外層電子 吸收外來(lái)外來(lái)輻射 產(chǎn)生電子能級(jí)為主的躍遷 分子吸收譜 。 光源 分光器 樣品池 光電轉(zhuǎn)換器 I0 I0v Iv 2022/8/31 7 ? ▲ 二 . 紫外 — 可見(jiàn)分光光度分析法的特點(diǎn) ? 主要用于日常定量分析，特別是基層單位廣泛使用。 2022/8/31 4 ? 近年來(lái)分析儀器向小型化、專用化、簡(jiǎn)用化 (甚至 “ 傻瓜化 ” )的另一極端方向發(fā)展也已經(jīng)成為潮流、滿足現(xiàn)代社會(huì)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展的多樣化要求。科學(xué)地回答 “ What is this?”、“ How much ? ”、 “ Why so?” ? 現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)，實(shí)際上就是儀器分析。近代的儀器分析是涉及到 物理學(xué)、數(shù)學(xué)和生物科學(xué)以及微電子和計(jì)算機(jī)技術(shù)等 諸多領(lǐng)域的一門學(xué)科。 11 紫外 — 可見(jiàn)吸收光譜法概述 ▲ 一 . 何謂紫外 — 可見(jiàn)分光光度分析法 利用
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