【正文】 綜合征 抗病毒治療 聚合酶鏈反應 逆轉(zhuǎn)錄 分枝信號放大系統(tǒng) 核酸序列擴增系統(tǒng) 病毒載量 能力驗證外周血單個核細胞 病毒載量質(zhì)量保證。3. 鄭家齊等，醫(yī)學檢驗質(zhì)量控制，人民衛(wèi)生出版社。確定微量加樣器經(jīng)校準；使用防氣溶膠的槍頭；槍頭緊密套在加樣器上；加試劑時槍頭位置在孔的中部；樣品凝塊或殘渣沒有被吸??；樣品加的位置與樣品和規(guī)定的位置一致；樣品按產(chǎn)品說明收集,處理和儲存；只使用干凈的一次性無菌實驗材料；檢查分液吸液操作；盛洗液的試劑瓶內(nèi)已裝有足夠量的洗液；每種試劑在實驗開始前被輕輕混勻；每種試劑預熱充分,以防有沉淀；封閉墊組裝正確；孔內(nèi)樣液沒有濺灑；分析倉門關閉嚴實；檢查背景。每次實驗后清洗并晾干洗液瓶和水瓶，倒空廢液瓶；每周清洗洗液瓶, 水瓶和廢液瓶，管路系統(tǒng)。（三） 問題原因 處理方法分子信標沒有檢測絕對信號水平太低用洗脫液重新檢測值設定（大?。┑拇笮〔煌谥翟O定（大?。┑拇笮?nèi)參照數(shù)據(jù)設定的大小不同于數(shù)據(jù)設定的大小重新設定內(nèi)參照數(shù)據(jù)測定的曲線不連續(xù)所測定曲線不連續(xù)性用洗脫液重新檢測沒有擴增內(nèi)參照和最大最小信號的比值都低于閾值用洗脫液或者樣品再開始測擴增弱曲線斜率太低用洗脫液重新檢測計算錯誤曲線擬合程序產(chǎn)生錯誤用洗脫液重新檢測不正確的擴增動力學擬合曲線沒有正確地描述所觀察的數(shù)據(jù)用洗脫液重新檢測延遲時間太短起始熒光增加的速度太快用洗脫液重新檢測。如果需要定量的結(jié)果，稀釋原始樣品用標準的樣品處理程序重新檢測。結(jié)果偏高（）計算的拷貝數(shù)高于測定上限。（）如果采用標準樣品處理程序，用陰性的人血漿稀釋原始樣品并用標準的樣品處理程序重新檢測。176。，以防樣品濺出或產(chǎn)生交叉污染。 評估結(jié)果反饋：艾滋病參比實驗室根據(jù)各實驗室的兩次考核結(jié)果，每年反饋最后的評估結(jié)果。 T樣品的檢測：要求將考核樣品同實驗室常規(guī)樣品一起檢測，由常規(guī)檢測人員進行，不應作為特殊樣品處理。建議國內(nèi)所有從事病毒載量檢測的實驗室參加該項目，在規(guī)定時間內(nèi)使用有效試劑與實驗樣品一起檢測，填寫病毒載量實驗結(jié)果報告單（附表），上報艾滋病參比實驗室。 復核人對檢測結(jié)果進行仔細復核并對結(jié)果提出結(jié)論、簽字。在質(zhì)控圖上顯示所有次質(zhì)控品檢測值的值、平均值以及 值范圍。 實驗室環(huán)境的要求；，應避免陽光直射設備；℃；；，病毒載量檢測儀應配備穩(wěn)壓電源；，無灰塵。人員病毒載量檢測人員分為檢驗人、復核人、簽發(fā)人。實時熒光定量擴增的實驗檢測過程可分為：（）樣品制備,抽提和濃縮目標分子，并除去可能存在的抑制因子。此步驟可釋放病毒核酸，降解酶或使變性, 然后靶探針結(jié)合到靶或并固定在固相板上；（）冷卻洗板；（）加信號放大探針()到各孔內(nèi)；（）孵育. 此步驟使雜交到靶探針的相應部位；（）冷卻洗板；（）加標記探針到各孔內(nèi)；（）孵育，此步驟使酶標記的探針雜交到上；（）冷卻洗板；（）加化學發(fā)光底物到各孔中；（）孵育，此步驟讓酶和底物相互作用，產(chǎn)生化學發(fā)光信號。將已知拷貝數(shù)的定量標準品加到每一個樣品中和靶序列一起共同進行樣品制備、逆轉(zhuǎn)錄、擴增、雜交和檢測并和靶序列一起擴增。聚合酶鏈反應人類免疫缺陷病毒定量檢測試劑盒版是在聚合酶鏈反應全自動診斷儀上定量測定人血漿中人類免疫缺陷病毒型（）水平的體外核酸擴增檢測試劑盒。技術是一種等溫擴增系統(tǒng)，其擴增基礎在于系統(tǒng)內(nèi)的混合酶系統(tǒng)，此系統(tǒng)內(nèi)含有逆轉(zhuǎn)錄酶和多聚酶在體外模擬逆轉(zhuǎn)錄病毒體內(nèi)復制過程。 樣品的處理 一般要求在采血后小時內(nèi)進行離心，室溫下離心分鐘。第三章 樣品的采集、處理、保存和運輸 樣品采集、處理、保存和運輸，按照所使用檢測方法的要求嚴格執(zhí)行。樣品處理區(qū)：：二級（320XXg，可離心 管子）：4℃，20℃，80℃：℃（μ、μ、μ），為專用設備（無和酶）：震動頻率可調(diào) 一次性工作服、帽、口罩、無粉手套、鞋套試劑準備區(qū)：（或密閉工作臺）（μ、μ、μ），為專用設備（18000g，可離心 管子）：4℃，20℃ 計時器，震動頻率可調(diào)（無、酶） 管子（無和酶）和 試管架、帽、口罩、無粉手套、鞋套擴增產(chǎn)物分析區(qū)： 病毒載量檢測儀（μ、μ、μ）：4℃，20℃ ( 41℃ )：震動頻率可調(diào)（無、酶）、帽、口罩、無粉手套、鞋套 病毒載量檢測實驗室設備分布示意圖病毒載量檢測實驗室設備分布示意圖病毒載量儀,加樣器離心機冰箱，4℃水浴箱洗手池紫外燈擴增產(chǎn)物分析區(qū)生物安全柜加樣器離心機冰箱，20℃冰箱水浴箱洗手池紫外燈樣品處理區(qū)超凈工作臺加樣器漩渦振蕩器冰箱，4℃實驗臺紫外燈試劑準備區(qū)：各區(qū)獨立、控制風向、因地制宜、方便工作。中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心主任吳尊友研究員在本指南編寫過程中提出了重要的修改意見，在此特別致謝。為了進一步規(guī)范艾滋病實驗室病毒載量檢測，建立標準化質(zhì)量控制程序，準確開展各項檢測及質(zhì)量控制工作，特制定本指南。本指南由中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心艾滋病參比實驗室組織有關專家撰寫，由中國疾病預防控制中心批準執(zhí)行。這些工作對提高病毒載量的檢測技術，保證質(zhì)量起到了重要作用。致 謝在本指南的編寫過程中，世界衛(wèi)生組織、克林頓基金中國艾滋病防治項目和美國等國際組織與機構(gòu)給予了大力支持，全國病毒載量檢測實驗室一線操作人員提出了許多建設性的意見和具體需求，艾滋病參比實驗室工作人員毛瑋、陶曉霞進行了大量的補充實驗和文字編輯工作，才保證本指南的編寫順利完成，在此一并向他們表示真誠的感謝。以下為病毒載量檢測實驗室不同分區(qū)內(nèi)必備的輔助設備及耗材。，即工作流向只能從試劑準備區(qū)開始，到樣品處理區(qū)，然后再到擴增產(chǎn)物分析區(qū)。 獲取其它信息：包括采集對象的基本信息和流行病學資料，抗病毒藥物使用情況，以往的實驗室檢測結(jié)果，在病毒載量檢測樣品送檢及接收單（附表）上備注欄注明。． 核酸序列依賴性擴增()技術最早產(chǎn)品為 定量測定方法，最近被 新一代熒光實時定量所取代。． 逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)技術目前用得最廣泛的儀器為 和相應的檢測試劑 版。定量標準品是包括作為 靶引物結(jié)合部位和擴增子單一探針結(jié)合區(qū)的非感染性 轉(zhuǎn)錄物。檢測通常包括以下步驟：（）將患者血清或血漿連同含有特異的合成寡聚核苷酸靶探針的裂解液加到微孔中；（）孵育。因此，只要獲得未知樣品的值，即可從標準曲