分子細胞遺傳學技術與產前診斷(存儲版)
【正文】 ion products are amplified by PCR using only one primer pair. ? Electrophoresis of PCR products on DNA Sequencer in GeneScan model. 三、遺傳性疾病的診斷 遺傳性疾病的診斷： （一）臨癥診斷 （二）癥狀出現(xiàn)前的診斷 （三）產前診斷 （一） 臨癥診斷 ? 根據(jù)就診患者的臨床表現(xiàn)作出（初步）判斷：疾病診斷，遺傳方式 （ 1）癥狀、體征 （ 2）系譜分析 ? 部分遺傳性疾病的診斷主要依賴于癥狀、體征 ? 對于同時存在散發(fā)病例和遺傳性病例的復雜性疾病，如腫瘤，建立相應的臨床可疑病例的判定標準 ? 根據(jù)不同的遺傳性疾病，選擇適當?shù)膶嶒炇壹夹g分析確診： 生化技術、細胞技術、分子技術 ? 多用于對先證者的診斷 Pedigree of a family 遺傳性疾病基因診斷程序 ? 臨床診斷和確定分析對象 ? 確定分析的目標基因 ? 以檢測目標基因的結構確定分析的技術構成和分析過程： ? 基因微小變異篩查： SSCP, DGGE, DHPLC, PTT, DNA測序分析 ? 基因大片段變異（缺失或重復）的分析 ? 檢出變異的性質評估和患者家族的遺傳咨詢。 ? 結合于遺傳咨詢工作。 但對于較大的DNA缺失或 DNA重復產生的突變 ， 如以外顯子為單位的 DNA缺失 ， SSCP、 DHPLC等均難以將其檢出 。 ? 技術路線：血細胞 RNA?cDNA?RTPCR?體外蛋白質合成 ?電泳分析截短了的蛋白質 ?相應基因片段的序列分析 ? 上游引物 5’端均連接 T7啟動子序列GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGAGACCACCATGG ? [35S]甲硫氨酸， T7 體外轉錄 /翻譯體系（兔網(wǎng)織紅細胞提取物）， 30℃ 孵育 90 min，完成體外蛋白質合成。 10%聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ %硝酸銀染色 ） （ DGGE） ? 利用不同 DNA序列開始變性時對變性劑濃度的要求不同，在變性劑濃度梯度凝膠內電泳，野生型 DNA和突變型 DNA序列的差異所導致其變性點不同使兩者的電泳遷移率出現(xiàn)差異 （ SSCP） ? 單鏈 DNA在中性條件下會形成二級結構 。 堿基的插入和缺失的結果 ：將導致 移碼突變（ frameshift mutation） ， 并可在突變點下游 提前出現(xiàn)終止密碼 產生 截短型蛋白 缺失突變 基因突變形式 ? 框內突變 （ inframe mutation） ： 3個或是的倍數(shù)的 堿基缺失或插入導致的突變 ， 使基因丟失或增加 1個或幾個氨基酸 。 ? 結果可能受到一些因素影響：正常細胞存在，腫瘤自身的遺傳異質性，系統(tǒng)的波動。其基本原理是用不同熒光物質分別標記腫瘤細胞 DNA和正常人細胞 DNA，然后與正常人中期細胞染色體雜交。因此在中期核內，整條染色體得以被涂染。這種 DNA序列的混合物與一條染色體上的多個位點同源。箭頭示易位到 10號染色體上的來自 9號染色體的片段 21號
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