分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)與產(chǎn)前診斷-文庫(kù)吧
2025-07-03 10:59 本頁(yè)面
【正文】 位。 ? 無(wú)需進(jìn)行染色體培養(yǎng)，對(duì)于不易制備良好分裂相的實(shí)體瘤尤為適用。 ? 所需染色體 DNA可來(lái)自各種組織，如新鮮組織、福爾馬林固定的組織、石蠟包埋組織，可在很少量的基礎(chǔ)上檢測(cè)，利于做回顧性研究。 CGH的局限性： ? 難以檢出以下異常：平衡易位，微小突變，基因重排，倍體水平改變。 ? 結(jié)果可能受到一些因素影響：正常細(xì)胞存在，腫瘤自身的遺傳異質(zhì)性，系統(tǒng)的波動(dòng)。 ? 靈敏度：限于檢測(cè)較大范圍的缺失（ 10 — 30MB） 二、突變分析與分子診斷 （一）基因突變類(lèi)型 ? 點(diǎn)突變 ：只有一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的改變 ， 是突變中最多見(jiàn)的形式 。 ? 穩(wěn)定突變 ：傳遞中不改變?cè)械耐蛔?。 ? 動(dòng)態(tài)突變 ：傳遞中不斷改變自己 ， 多見(jiàn)于短重復(fù)序列的突變 ， 在一代代傳遞中重復(fù)次數(shù)發(fā)生明顯變化 。 點(diǎn)突變的結(jié)果： （ 1） 同義突變 （ samesense mutation） ：堿基替換后 ， 雖然密碼子發(fā)生改變 ， 但編碼氨基酸沒(méi)有改變 （ 遺傳密碼的兼并性 ） ， 亦稱(chēng)靜止突變 。 （ 2） 錯(cuò)義突變 （ missense mutation） ：堿基替換 ， 密碼子發(fā)生改變后 ， 編碼氨基酸亦發(fā)生改變 ， 編碼另一個(gè)氨基酸 。 （ 3） 無(wú)義突變 （ nonsense mutation）：堿基替換后，使編碼氨基酸的密碼子變成一個(gè)終止密碼子。 （ 4）中性突變：包含兩種情況，即 “ 同義突變 ” 和不改變蛋白質(zhì)功能的 “ 錯(cuò)義突變 ” 基因突變形式 — 堿基的插入和缺失 ? 堿基 的插入和缺失：基因編碼序列中插入或丟失一個(gè)或幾個(gè)堿基 ， 其結(jié)果是突變點(diǎn)下游堿基序列發(fā)生移碼 ， 編碼氨基酸序列都發(fā)生改變 ， 又稱(chēng)移碼突變 （ frameshift mutation） ， 并可在突變點(diǎn)下游提前出現(xiàn)終止密碼 。 堿基的插入和缺失的結(jié)果 ：將導(dǎo)致 移碼突變（ frameshift mutation） ， 并可在突變點(diǎn)下游 提前出現(xiàn)終止密碼 產(chǎn)生 截短型蛋白 缺失突變 基因突變形式 ? 框內(nèi)突變 （ inframe mutation） ： 3個(gè)或是的倍數(shù)的 堿基缺失或插入導(dǎo)致的突變 ， 使基因丟失或增加 1個(gè)或幾個(gè)氨基酸 。 ? DNA 大片段缺失或復(fù)制 （ large deletion or duplication)： 幾百個(gè) bp至幾十個(gè) kb的 堿基 缺失或復(fù)制 。 各種類(lèi)型病理性突變的比例 1. 無(wú)義突變和移碼突變： 60％ 2. 稀有的錯(cuò)義突變： 20％ 3. DNA大片段缺失或重復(fù) : 20％ 另外：可能和疾病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估有關(guān)的大量的多態(tài)位點(diǎn) 微小突變 （二） 目前常用的對(duì) 已知 點(diǎn)突變的分析技術(shù) ? 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（ RFLP） ? 等位基因特異性（ PCR）擴(kuò)增（ ASA） ? 等位基因特異性寡核苷酸雜交（ ASO） ? DNA芯片 （ RFLP）分析 ? 當(dāng)突變影響到某一限制性?xún)?nèi)切酶位點(diǎn)時(shí)，可通過(guò)酶切 PCR產(chǎn)物，電泳分析 :限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（ RFLP） （ PCR）擴(kuò)增
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