【正文】 模型的 b2或 b3中任一個與 0比較，有顯著差異（ p），則該 組 數(shù)據(jù)存在非線性。 將每個濃度水平處的 DLi與設(shè)定的誤差范圍比較，如果 DLi小于預(yù)先設(shè)定誤差，即使檢測到統(tǒng)計學(xué)上的非線性，由于非線性誤差小于設(shè)定目標(biāo)，因而也是不重要的。如果在高濃度處的差值較大，則不精密度大小可能與濃度值成比例變化，此時應(yīng)用 CVr表達。這時應(yīng)檢查儀器或操作過程，找到引起不精密度低的原因，糾正后重新進行實驗。 線性度最好用差值點圖來表示，即用 一次多項式 與 三次多項式 模型的差值作為Ｙ值，每個濃度值作為Ｘ值，進行作圖。 然而下面是設(shè)定誤差目標(biāo)所要考慮的因素： 1) 線性目標(biāo)來源于偏倚目標(biāo)，因而應(yīng)小于或等于它； 2) 偏倚目標(biāo)應(yīng)小于或等于測量誤差。測量誤差是由不精密度、準(zhǔn)確度、攜帶污染、漂移所引起，能明顯影響線性范圍，也可能錯誤地解釋結(jié)果。 24 附錄 A： 稀釋列表 本附錄給出等間距不同濃度樣本的稀釋方案，對于評估線性關(guān)系來說，實際濃度值不是很重要的。假定實驗室設(shè)定的重復(fù)性和線性的允許誤差范圍分別為 2%和 5%。 但 4SD=%， 超過實驗室所規(guī)定的誤差目標(biāo) 2%。高中低濃度水平處差值的百分?jǐn)?shù)大小超過了實驗室設(shè)定的誤差范圍，因而認(rèn)為本方法不具有線性?；貧w分析用來檢查非線性模型。 測量均值 預(yù)期值 1st 預(yù)期值 3rd 差值 % 差值 我們除去最后一個點，如果剩下的五個點呈可接受的線性關(guān)系，則該方法的線性范圍為 到 15，也適合實驗室的需求，修正后的分析見下表。圖 C C6顯示去掉最后一個點后的擬合模型，及 1級和 2級模型之間的差值，盡管在視覺上是非線性的，但所有點的差值均在規(guī)定 32 范圍內(nèi)。 三次多項式 模型還有較低的標(biāo)準(zhǔn)差，也提示較 二次多項式 和 一次多項式 模型有較好的適合性。 結(jié)果見下表，有測量均值和兩次測量的差值。注意，我們主要評價非線性模型的系數(shù)，而不關(guān)注截距和線性模型。 從 以上可知， %的重復(fù)性誤差似乎比 。例如，當(dāng)雙側(cè) 檢驗可信度為 95%，自由度為 10時， t值為 ，那么計算得到的統(tǒng)計值大于 ，在 a= 平時具有顯著性意義。 可選的附加信息 增加 醫(yī)學(xué) 決定水平處的允許偏差范圍是有用的 。本委員會建議用戶與廠家聯(lián)系，有助于解決這些問題。目標(biāo)的確定應(yīng)基于實驗室客戶的需要及所用方法的特性。簡單的圖表就可以顯示結(jié)果是否遵循線性及非線性明顯的區(qū)域，圖表也有助于全面了解數(shù)據(jù)，可 以排除線性，但不能接受線性，也不能判斷每個濃度處的非線性度。 將 SDr與不精密度的設(shè)定目標(biāo)進行比較（濃度單位或百分比單位）。這是檢測方法的重復(fù)性，用 SDr（或 CVr相對誤差）來表示。如果要換算成百分比，則將每個 DLi 除以該濃度值（已知值）或測量均值（相對濃度）再乘以 100%。查 t值表（附錄 B)（雙側(cè) α=）。 二次多項式 模型代表一種拋物線反應(yīng)曲線，有增加趨勢（曲線上升）或減少趨勢（曲線下降）兩種。事實上，多項式回歸是用來評價非線性的，這也是我們選擇多項式線性評價的原因。 離群值檢查 在本指南中，離群值指單個檢測結(jié)果目視或在統(tǒng)計學(xué)上明顯偏離其它檢查結(jié)果，僅適用于評價單個重復(fù)測定結(jié)果，而不適用于某濃度水平的多次重復(fù)測定或測量均值。數(shù)據(jù)中可以發(fā)現(xiàn)操作中存在的真實問題。如果數(shù)據(jù)不可用，參照 。 建立 線性 方法： 9到 11個樣本，每個樣本重復(fù)測定 2到 4次； 驗證 聲明范圍或改良方法： 7到 9個樣本，每個樣本重復(fù)測定 2到 3次； 在實驗室內(nèi)證實線性范圍有效性： 5到 7個 樣本，每個樣本重復(fù)測定 2次。 樣本管 1和 5每管需 ； 樣本管 2：加 1管溶液和 5管溶液； 樣本管 3：加 1管溶液和 5管溶液； 樣本管 4：加 1管溶液和 5管溶液，第 4管溶液 的濃度計算為： (40*+120*)/(+)=100 單位。注意在操作過程中，要有最準(zhǔn)確和精確 的加樣技術(shù)。對于等間距濃度來說，每管可以用整數(shù)（如 1， 2， 3， 4， 5等）來分配號碼，也就是說，每一管的的濃度分析前可以未知。 制成分析樣本的添加物的選擇 選擇添加物時要仔細(xì)考慮，使用其它物種來源的原料也會引起一些影響。 用鹽水或其它稀釋劑而不是推薦稀釋液 如用到這些稀釋液，注意基質(zhì)效應(yīng)可能會影響到檢測結(jié)果。當(dāng)存在干擾物時，在報告中需提及其來源、純度、預(yù)期影響等。以下為可能用到的樣本類型，注意在一些特殊方法時要選擇合適的基質(zhì)。5到 11個濃度水平的等間距標(biāo)本的配制方法見附錄 A。 當(dāng)一個新的測量方法（或廠家或?qū)嶒炇腋牧家粋€ 實驗方法時）需要建立新的線性范圍時，需要 7到 11能覆蓋預(yù)期的測量范圍的不同濃度的標(biāo)本。 本質(zhì)上，多項式回歸是設(shè)計用來評價曲線的反應(yīng)模型，因而它適合于評價非線性。 回歸標(biāo)準(zhǔn)誤 （ Standard deviation of y about a regression/standard error of regression， SDy,x)： 獨立變量 Y與預(yù)期變量 X相對應(yīng)的可估計變量 Y’平均值之間的差量檢測大小。 線性回歸 （ Linear regression） ： 待測變量（非獨立）的浮動經(jīng)?？梢裕ú糠值兀w因于其他變量（獨立），回歸的方法量化了獨立變量和非獨立變量之間的關(guān)系。注：一般情況下，偏倚指公認(rèn)的方法（決定性，參考性或指定方法）與比較方法的測量結(jié)果的差值，用數(shù)值或百分?jǐn)?shù)表示。 Krouwer和 Schlain提出一種通用的方法，即 LPO（ last point off the line），需要多次計算最小二乘法方程。如果用戶在自己的實驗室要驗證已知的線性范圍（廠家提供），測量時僅覆蓋該范圍即可。首先要確定一種方法的非線性濃度范圍，及在每個濃度水平上非線性的程度。標(biāo)準(zhǔn)防護 和全身防護指南見美國 CDC文件 和 NCCLS M29保護實驗室員工避免職業(yè)性感染。 Repeatability(重復(fù)性 )代替批內(nèi)精密度 ， 可以恰當(dāng)?shù)赜脕砻枋鲈谝欢l件下連續(xù)測量同份分析物的接近程度。 在以前的版本中也提到過，評價線性關(guān)系時，首先必須在圖上點上數(shù)據(jù)。這種方法的缺點是精密度好的檢測系統(tǒng)有很小的樣本方差，在 LOF檢驗的比率中，均值方差很小時，得出在統(tǒng)計學(xué)上差異顯著，即呈非線性。 確保分析方法呈線性在臨床上也是很重要的。 評 論 寄 往 NCCLS 行 政 辦 公 室 ： 940 West Valley Road, Suite 1400,Wayne,Pennsylvania19087,USA。應(yīng)審定并評價最終文件的用途，以保證獲得一致同意（即對以前版本的意見已圓滿解決），并確定對其它標(biāo)準(zhǔn)的需要。 報告 ： 沒有經(jīng)過一致化審定過程的文件，由理事會頒布。 NCCLS通過各臨床實驗室、檢驗團體學(xué)會、工廠和政府機構(gòu)的參與而代表臨床檢驗界。 NCCLS所依據(jù)的原則是，對病人高質(zhì)量服務(wù)所需的臨床實驗室檢測，自愿一致的標(biāo)準(zhǔn)是必不可少的。使用者可以使用成文文件或修改指南以適應(yīng)特定的需要。 批準(zhǔn) ： 批準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)或指南已在臨床檢驗界得到一致同意。強烈鼓勵讀者以任何形式、在任何時間對任何 NCCLS文件 提 出 評 論 。然而，響應(yīng)物的劑量效應(yīng)曲線可以通過合適的轉(zhuǎn)換變成數(shù)學(xué)上的線性關(guān)系，而且對于一種分析方法來說，只有兩點之間呈線性關(guān)系時，才能進行計算結(jié)果。這些方差的比值即為 LOF檢驗的基礎(chǔ)。 這種方法可以： 1）在每個水平上判斷非線性度 ， 2）在評價非線性時可以控制不可接受的精密度， 3）提供一種可測試的統(tǒng)計模型 ， 4）在很多軟件上可以進行編程。 為使 ISO與 NCCLS在一些術(shù)語上保持一致 ， 下列術(shù)語用在 EP6A文件中 ： Trueness(準(zhǔn)確度 )指多次測量的平均值和分析物的真實值的接近程度。標(biāo)準(zhǔn)防護是防止所有的病原體，比僅防止血源性病原體更廣泛。 2． 介紹 2． 1 目的 本指南的目的旨在提供一種定量測量程序線性評價的統(tǒng)計學(xué)方法。 本文件適用范圍很寬，當(dāng)需建立一種方法的線性范圍時，我們需要測試一個很寬的分析濃度范圍，然后逐漸縮小直到有可接受的線性范 圍。這種 9 方法 被 Kroll、 Praestgard、 Mechaliszyn和 Styer進一步改進，并被美國病理學(xué)家學(xué)會實驗室間方法比對所采用。 偏倚（ Bias） ：測量值與公認(rèn)參考值之間的差異。 線性（ Linearity） ：在檢測樣本時，可以直接按比例得出分析物含量（一定范圍內(nèi)）的能力。 必須在相 同的測量程序、相同的儀器設(shè)備、相同的位置、在較短的時間內(nèi)重復(fù)等。 收集數(shù)據(jù)時要求有 5到 9個不同濃度的標(biāo)本多次測量，不同的濃度標(biāo)本 之間稀釋關(guān)系已知，不要求各濃度之間呈等距的。當(dāng)驗證線性范圍時，需要 5到 7個能覆蓋整個線性范圍（廠家提供）的不同濃度的標(biāo)本，每個濃度水平測量兩次。在吸取小容量標(biāo)本時要小心，用正位移液管比較有用。請參考最新版本的 NCCLS的 EP14文件 —基質(zhì)效應(yīng)的評價。 病人樣本中添加分析物 當(dāng)分析物中不含干擾物時，添加的分析物不需要高純度。要注意分析物要保持正常生理狀態(tài)下的形式（如蛋白結(jié)合或代謝產(chǎn)物狀態(tài)） 。 其它溶劑 13 當(dāng)用有機溶劑作稀釋劑時，基質(zhì)效應(yīng)可能更大。 4． 7 樣本準(zhǔn)備和濃度計算 如果高值和低值濃度是未知的，每一管必須編號來確定它的相對濃度。 （ 1）高值和低值濃度管要用可以接受的基質(zhì)，要滿足整個實驗過程中的用量，具體量的多少要依賴于分析中所用體積決定。高濃度管濃度為 120單位，低濃度管濃度為 40單位，注意測量前不需知道實際 15 濃度。以下是根據(jù)不同目的所推薦的樣本數(shù)。 5．線性范圍的核實 ——數(shù)據(jù)評估 初步數(shù)據(jù)檢查 檢測結(jié)果首先要綜合評價其可接受性和有效性。要避免沒有糾正錯誤，選擇多次重 復(fù)測定結(jié)果中的 “好 ”數(shù)據(jù)進行替代。 7) 目視檢查 XY散點圖對于后續(xù)的線性評估是非常重要的，它可以很容易的發(fā)現(xiàn)非線性，或測量范圍是否太窄或太寬，也可以為后 續(xù)的統(tǒng)計分析選擇更合適的統(tǒng)計分析方法。不論最適曲線是線性與否，都不影響（線性范圍內(nèi)）實驗數(shù)據(jù)點之間 其他濃度的反應(yīng)狀態(tài)，并可得到連續(xù)、可靠的結(jié)果的 能力。 階別 回歸方程 回歸 自由度（ Rdf） 一 次 Y=b0+b1X 2 二 次 Y= b0+b1X+b2X2 3 三 次 Y= b0+b1X+b2X2+b3X3 4