【正文】 洗刷，洗后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，或用95％的乙醇、無水乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑脫水使其干燥。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置（36177。 ②稀釋度的選擇 應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之。(2)用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)，振搖混勻，做成1：100的稀釋液，換用1支1ml滅菌吸管，按上述操作依次作10倍遞增稀釋液(3)根據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)z驗樣品污染情況估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種3管。1）℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18h～24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)并作革蘭氏染色鏡檢和復(fù)發(fā)酵試驗。托盤天平、均質(zhì)器或乳缽、溫箱、顯微鏡、滅菌廣口瓶、滅菌三角燒瓶、滅菌吸管、滅菌平皿、滅菌小試管、滅菌毛細(xì)吸管、載玻片、酒精燈、滅菌金屬匙或玻璃棒、接種棒、鎳鉻絲、試管架緩沖蛋白胨水、氯化鎂孔雀綠（MM）增菌液、硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液、亞硫酸鉍瓊脂（BS）、DHL瓊脂、HE瓊脂、SS瓊脂、三糖鐵瓊脂、蛋白胨水，靛基質(zhì)試劑、尿素瓊脂、氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基、氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基、糖發(fā)酵管、緩沖葡萄糖蛋白胨，甲基紅試劑，VP試劑、丙二酸鈉培養(yǎng)基、氧化酶試劑、革蘭氏染色液、沙門氏菌因子血清應(yīng)采集可疑食品或可疑帶菌者的新鮮糞便進(jìn)行檢驗。取增菌液一環(huán)，劃線接種于沙門氏菌選擇性培養(yǎng)基上，如亞硫酸鉍瓊脂（BS）、DHL瓊脂、HE瓊脂、SS瓊脂。 (1)抗原的準(zhǔn)備 ％瓊脂斜面培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗用的抗原。不被A～F多價O血清凝集者，先用57種或144種沙門氏菌因子血清中的7種多價O血清檢查，如有其中一種血清凝集，則用這種血清所包括的O群血清逐一檢查，以確定O群。習(xí)題：一、填空題我國衛(wèi)生部頒布的食品微生物指標(biāo)有 、 和 三項。沙門氏菌檢測中前增菌的目的是 。敘述棉拭采樣法和檢樣處理的方法。由于加工過程中沙門氏菌受到損傷而處于瀕死狀態(tài)。(3)致病菌：致病菌即能夠引起人們發(fā)病的細(xì)菌。所以兩者的染色步驟和目的都不一樣。(4)染色：在涂片薄膜上滴加染色液一滴，使染色液覆蓋涂片，染色約1min。(4)斜置載玻片，滴加乙醇脫色，至流出的乙醇不現(xiàn)紫色為止，大約需時20～30s，隨即水洗。答：（1）樣品稀釋，以每小方格內(nèi)含有4～5個酵母細(xì)胞為宜。 答：若有兩個以上稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30～300之間，則視兩者之比如何來決定。1）℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)（48177。在上述的選擇性培養(yǎng)基上，挑取可疑大腸菌群1～2個進(jìn)行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，置（36177。18 / 18。1）℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18h～24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)并作革蘭氏染色鏡檢和復(fù)發(fā)酵試驗。1）℃]水浴鍋內(nèi)保溫]注入平皿15ml～20mL，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻，同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內(nèi)作空白對照。（6）對每個樣品計數(shù)三次，取其平均值，按下列公式計算每1ml菌液中所含的酵母菌個數(shù)。③先用低倍鏡觀察，對準(zhǔn)焦距，待看清物鏡測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目鏡，使目鏡測微尺的刻度與物鏡測微尺的刻度相平行，并使兩尺的左邊第一條線相重合，再向右尋找兩尺的另外一條重合線。(2)用草酸銨結(jié)晶紫染色1min后水洗。(2)干燥：涂片最好在室溫下使其自然干燥。復(fù)染色法：復(fù)染色法是用兩種以上染料染色的方法，此法除顯示細(xì)菌形態(tài)大小外，不同類型的細(xì)菌可以染上不同的顏色，從而具合鑒別細(xì)菌種類的價值，因此也稱鑒別染色法。(2)大腸菌群：大腸菌群是寄居于人及溫血動物腸道內(nèi)的腸居菌，它隨著的大便排出體外。直接計數(shù)法，間接計數(shù)法陽，陰使沙門氏菌恢復(fù)其活力。A 乳酸菌　　　B. 酵母菌　 　C. 細(xì)菌總數(shù)　　D. 大腸桿菌三、問答題 敘述食品微生物檢驗的意義。凡乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性無芽胞桿菌，即報告為大腸桿菌 性；凡乳糖發(fā)酵管不產(chǎn)氣或革蘭氏染色為陽性，則報告為大腸桿菌為 性。染色是強(qiáng)化細(xì)胞或細(xì)胞組份與周圍環(huán)境之間的反差，便于利用普通光學(xué)顯微鏡來觀察微生物細(xì)胞的簡捷方法。根據(jù)試驗結(jié)果，判定O群。 在接種三糖鐵瓊脂的同時，再接種蛋白胨水（供做靛基質(zhì)試驗），尿素瓊脂（）、氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基及對照培養(yǎng)基各一管，于（36177。1）℃培養(yǎng)18h～24h。 根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，報告每100ml（g）食品中大腸菌群的最可能數(shù)。2）h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)生者，則按下列程續(xù)進(jìn)行。溫箱、水浴鍋、天平、顯微鏡、均質(zhì)器或乳缽、溫度計、平皿、試管、發(fā)酵管、吸管、載玻片、接種針乳糖—膽鹽發(fā)酵管、乳糖發(fā)酵管、蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑、麥康凱、伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB）、遠(yuǎn)騰氏瓊脂、革蘭氏染色液(1)以無菌操作將檢樣25g（或25ml）放于含有225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。一個稀釋度使用兩個平板，應(yīng)采用兩個平板平均數(shù)，其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。(5)稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時將涼至46℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基[可放置在（46177。 ⑥當(dāng)遇到位于大格線上的酵母菌，一般只計數(shù)大方格的上方和右方線上的酵母細(xì)胞(或只計數(shù)下方和左方線上的酵母細(xì)胞)。 計數(shù)室通常有兩種規(guī)格。若更換物鏡、目鏡的放大倍數(shù)時，必須再進(jìn)行校正標(biāo)定。②物鏡測微尺的構(gòu)造 物鏡測微尺為一塊特制的載玻片，其中央有一小圓圈。 酵母菌大小的測定和細(xì)胞計數(shù)學(xué)會測微尺和血球計數(shù)板的使用方法，建立對微生物大小的概念。(3)加碘液媒染1min后水洗。 (3)固定 固定常常利用高溫，手持載玻片的一端，標(biāo)本向上，在酒精燈火焰外層盡快的來回通過2～3次，共約2～3s，并不時以載玻片背面加熱觸及皮膚，不覺過燙為宜,放置待冷后，進(jìn)行染色。微生物染色 學(xué)習(xí)微生物的染色原理、染色的基本操作技術(shù)，從而掌握微生物的一般染色法和革蘭氏染色法。各種小型包裝和乳與乳制品，每件樣品量為：生奶1瓶或1包；消毒奶1瓶或1包；奶粉1瓶或1包（大包裝者200g）；奶油1塊（113g）；酸奶1瓶或1罐；煉乳1瓶或1罐；奶酪（干酪）1個。檢驗時先充分振搖吸取瓶、管中的液體，作為原液，再按要求作10倍遞增稀釋。(2)鮮、凍家禽檢樣的處理先將檢樣進(jìn)行表面消毒，用滅菌剪子或刀去皮后，剪取肌肉25g（一般可從胸部或腿部剪取），以下處理同生肉。五、食品微生物學(xué)一般檢驗技術(shù)各類食品微生物檢樣樣品的采集與制備實例(1)生肉及臟器檢樣如是屠宰場后的畜肉，可于開腔后，用無菌刀采取兩腿內(nèi)側(cè)肌肉各50g（或劈半后采取兩側(cè)背最長肌肉各50g）；如是冷藏或銷售的生肉，可用無菌刀取腿肉或其他部位的肌肉100g。(2)加入等量蒸餾水（），染色3min～5min。染5min，傾去染液，水洗。(2)滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗。長期保存在標(biāo)本中央滴加一滴加拿大樹膠，蓋上一潔凈的蓋玻片，待其自然干燥后，保存于玻片標(biāo)本盒中。 熒光染料，如金膠等也可對細(xì)菌進(jìn)行染色。故此法只顯小細(xì)菌的形態(tài)和大小，對細(xì)菌鑒別價值較小。例如wright染料中的伊紅美藍(lán)，Giemsa染料中的伊紅天青等。降低菌液的pH而使細(xì)菌帶陽電時，就可用酸性染料染色。對不同的食品和不同的場合，應(yīng)該選擇一定的參考菌群進(jìn)行檢驗。(2)原輔料檢驗：包括食用動物、谷物、添加劑等一切原輔材料。學(xué)會乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)基的制備。掌握大腸菌群的測定方法與步驟。 二、食品微生物檢驗的范圍食品微生物檢驗的范圍包括以下幾點：(1)生產(chǎn)環(huán)境的檢驗：車間用水、空氣、地面、墻壁等。(3)致病菌致病菌即能夠引起人們發(fā)病的細(xì)菌。它能與帶陽電的物質(zhì)結(jié)合，使之著色。 (三)復(fù)合染料 堿性染料與酸性染料的結(jié)合物，叫做復(fù)合染料，或叫中性染料。例如用美藍(lán)或稀釋擊炭酸復(fù)紅等，使各種細(xì)菌染成間—種顏色。在細(xì)菌檢查工作中，除異染顆粒染色法較常應(yīng)用外，其他持殊結(jié)構(gòu)染色法操作費(fèi)時，且可用其他簡易方法代替，故在日常檢驗工作中較少使用。如果需保存標(biāo)本，可在鏡檢后，用拭鏡紙沾二甲苯擦掉