【正文】 m2)，玉米、高梁等高稈植物應(yīng)適當(dāng)多些。 此計算結(jié)果令人驚訝。 ? 由于單循環(huán)病害發(fā)病規(guī)律相對簡單，病情穩(wěn)定，故計算公式較簡單，人們對計算結(jié)果一般無疑義。 不論 CK0和 T0， CK和 T為何值均可適用。 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 141 ⑵ 要正確選擇病害程度的計量方法： ? 為保證各小區(qū)施藥前后二次病情調(diào)查數(shù)據(jù)能準(zhǔn)確互相對應(yīng)，最好是采取 定點定株甚至是定葉片 等系統(tǒng)調(diào)查方法，并且調(diào)查 病害增長的絕對量 ? 通常采用病情指數(shù)計量病害程度，但當(dāng)處理區(qū)和對照區(qū)寄主生長量明顯不一致時，采用病情指數(shù)將造成誤差。 如果調(diào)查時間 過早 ，計算結(jié)果將 偏低 ，因為藥劑繼續(xù)發(fā)揮作用的效果尚未體現(xiàn)出來。 否則 可能出現(xiàn)較大誤差 。 ?多循環(huán)病害發(fā)病規(guī)律較復(fù)雜，計算公式相對較復(fù)雜。 此計算結(jié)果人們可以接受。 一 .進行田間藥效試驗的基本要求 ? 關(guān)于進行田間藥效試驗的基本要求，農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所生測室編寫的 《 農(nóng)藥田間藥效試驗準(zhǔn)則 》 當(dāng)中大體規(guī)定為： ⑴ 試驗地的選擇要有 代表性 和栽培條件的 均勻一致 性。 3. 菌株 抗藥性持久與否 的測定方法 ? 抗藥 菌株 → 在 無殺菌劑 培養(yǎng)基上連續(xù)生長多代（ 7代以上） → 培養(yǎng)基中加大到 較高殺菌劑濃度 → 檢驗菌株是否還有抗藥性？ ? 如仍有，則抗藥性為持久的，否則，抗藥性是可以喪失的。 即，以敏感野生菌株為 對照 （在未使用過此類殺菌劑地區(qū)分離出來），測定長期使用某種殺菌劑地區(qū)的此病原菌其它菌株的抗藥水平。 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 113 芬尼法（ Finney） ? 國外所稱的芬尼法（ Finney）實質(zhì)和共毒系數(shù)法一致 (但 不設(shè)標(biāo)準(zhǔn)藥劑 )，其計算步驟如下： ①（甲＋乙）混劑 理論 EC501＝ ∑ (單劑 EC501 單劑在混劑中的含量 ) ② 求出混劑的 毒力比值 混劑實際 EC501 / 混劑理論 EC501 ? 根據(jù) 毒力比值 大小來判斷甲、乙二藥間的相互作用。 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 107 三 .殺菌劑混用聯(lián)合毒力的測定及配方優(yōu)選 （一）殺菌劑聯(lián)合毒力測定方法 （二）配方優(yōu)選方法 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 108 聯(lián)合毒力的簡易測定常采用交叉濾紙條法 (crossedpaper)，也稱為 “ 十字紙條法 ” ，其做法很類似抑菌圈法，即將二種藥劑分別沾于濾紙條上，垂直交叉 (成90176。即為我們試驗所要求得的結(jié)果。 ◆ 如何將稀釋倍數(shù)轉(zhuǎn)化為 EC50 、 EC95 ？ 抑制率為 50%的稀釋倍數(shù)倒數(shù)即為 EC50（單位為 g/mL = 106μg/mL 抑制率為 90%的稀釋倍數(shù)倒數(shù)即為 EC95（單位為 g/mL = 106μg/mL 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 104 （二）毒力回歸線的建立及 EC50的推算 ? 利用計算機進行上述計算，可以大大提高工作效率 ，減少差錯，具有很強的實用價值。 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 101 （二）毒力回歸線的建立及 EC50的推算 ? 利用 “ 最小二乘法 ” 建立 “ 稀釋倍數(shù)對數(shù) 機率值 ” 直線。 劑量 對數(shù)值 機率值 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 99 （一）農(nóng)藥劑量與有害生物死亡率間的關(guān)系 ? 在 “ 劑量對數(shù) 機率值 ” 直線 y=a+bx 中， a＜ 0。 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 96 “常態(tài)等差 ” 應(yīng)用時不夠方便 ?Gadunum提出的方法得到了普遍接受， ?但發(fā)現(xiàn) “ 常態(tài)等差 ” 之值在有害生物死亡率 小于 50%時為負數(shù) ， ?應(yīng)用時仍有不夠方便之處。 ? 從數(shù)學(xué)角度看，農(nóng)藥劑量對數(shù)與有害生物死亡率間的關(guān)系，表現(xiàn)為： 以中心點對稱的 “ S”型曲線關(guān)系。 價格 :48,600 元 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 88 （二）含毒介質(zhì)培養(yǎng)法 ? 生長速率法適用于不長孢子而菌絲生長較快的真菌。 ? 這方法是通過不同藥劑或同一藥劑不同濃度對真菌孢子萌發(fā)或其它病原物個體(如菌核 )萌發(fā)的 抑制 情況來比較藥效的。 普遍存在于各種細菌細胞內(nèi)。 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 58 carbohydrate fermentation (糖類發(fā)酵 ) 對照 產(chǎn)酸 產(chǎn)酸 , 產(chǎn)氣 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 59 VP test (伏普試驗 ) VP試驗 陽性（紅色）陰性（不變） 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 60 吲哚 (indol)試驗 ： 吲哚試驗 陽性（液面紅）陰性（ 液面 黃） 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 61 正反應(yīng) (黑色 ) 負反應(yīng) (黃色 ) Hydrogen sulfide test (硫化氫試驗 ) 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 62 Urease test (脲酶試驗 ) 尿素酶試驗 陰性（黃）陽性（紅） 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 63 Catalast test (觸酶試驗 ) 正反應(yīng)－產(chǎn)氣泡 負反應(yīng)－不產(chǎn)氣泡 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 64 Oxidast test (氧化酶試驗 ) 正反應(yīng)－藍色 負反應(yīng)－不變色 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 65 賴氨酸脫羧酶、丙二酸鹽 試驗 賴氨酸脫羧酶試驗 對照 陽性（紫） 陰性（黃） 丙二酸鹽試驗 陽性（蘭） 陰性（不變） 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 66 微量多項試驗鑒定系統(tǒng) （ 1） API 20 系統(tǒng)： 法國 Bio梅里埃公司生產(chǎn)，有 很多 種不同的生化反應(yīng)，可鑒定 700 多種細菌，分不同系列，如 20A——厭氧菌， 20E——腸道菌。 ? 之所以不采用細菌的鞭毛染色進行分屬，是因為細菌的鞭毛染色較困難，不易成功。 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 46 接種的注意事項 掌握適當(dāng)?shù)慕臃N量， 過少不易發(fā)病， 過多不代表田間自然情況。 ? 采用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)時間 通常培養(yǎng)時間在 48h較好。 ? 在 25℃ 培養(yǎng)數(shù) d，待平板上 長出菌落 后， ? 根據(jù) 目標(biāo)菌菌落特征 計算出平均每個平板上的 菌落數(shù) ，再乘以總的稀釋倍數(shù) ， ? 即可得出菌懸液中的細菌數(shù)。 不太適用于細菌等個體較小的細胞。 如放在－ 20℃ 或－ 80℃ 冰箱中及液氮罐中，則存活期可以更長。 ? 或?qū)⑵渑囵B(yǎng)基 養(yǎng)分降低 到原來的 1/2。 ? 細菌菌落常表現(xiàn)為 濕潤、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻 以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致等。 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 20 煙草過敏反應(yīng)： 在確定分離的細菌有無致病性時采用 馬鈴薯環(huán)腐病菌、梨火疫病菌在煙草上 引起過敏性壞死反應(yīng) (HR) 過敏性反應(yīng) 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 21 三 .細菌的培養(yǎng) ? 在獲得了細菌的分離物后，通常要進行細菌的培養(yǎng)， ? 即將病原菌移植于 固體 或 液體 培養(yǎng)基上，使其生長，并觀察記載該菌在該培養(yǎng)基及特定培養(yǎng)條件 (溫度、光照、pH等 )下的培養(yǎng)性狀。 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 17 病原細菌的純化 待同一平板上的菌落 性狀達到全部一致 , 再移殖其中單菌落 到斜面培養(yǎng)基 , 就認為菌種得以純化 . 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 18 病原細菌的致病性測定： ? 一般在細菌獲得分離后，緊接著就應(yīng)對其進行 致病性的測定 工作。 ? Erwinia屬 可用 MS或 CVP； ? Xanthomonas 屬可用 YDC。 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 6 (一 )劃線分離法 ? 無菌操作室或清潔安靜的房間，超凈工作臺等。 ?史密斯從 1892年起開始從事細菌病害的研究。 ? 在 19世紀末到 20世紀初同德國細菌學(xué)家 引起植物病害的問提上，進行了長達 10年的激烈論戰(zhàn)，并以大量的事實和研究成果贏得了論戰(zhàn)的勝利， 從而進一步推動了植物細菌性病害的研究。 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 7 2. 操作步驟 ? 倒平板 ? → 切取病組織 ? → 表面消毒 ? → 無菌水洗 3次 ? → 制備菌懸液 ? → 平板上 劃線 ? → 25℃ 培養(yǎng) ? → 選擇 單菌落 移入斜面 ? → 25℃ 培養(yǎng) ? → 檢查斜面上分離菌 ? → 保存菌種 培養(yǎng)后 細菌長出 選擇單菌落 移入斜面畫蛇行線 保存菌種 劃線 24小時培養(yǎng)后 ,可見菌落 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 8 劃線分離法 要形成單菌落 火焰上燒去接種環(huán)上 的細菌懸液 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 9 ⑴ 要選擇新鮮的分離材料， 如果材料上腐生菌多，應(yīng)重新接種， 發(fā)病后再用于分離。 ? G+ 各屬可用 1/萬 重鉻酸鉀（鈉） 抑制 G， ? 加一些天門冬酰胺利于 G+生長。 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 19 簡易的致病性測定方法：過敏反應(yīng)測定 ? 還有一種 簡易的致病性測定方法 ， 即進行該細菌的 過敏反應(yīng)測定 。 觀察 、 記載以下內(nèi)容： ? 菌落 （ 苔 ） 顏色 、 ? 形狀 （ 特別是 邊緣 的形狀 ） 、 ? 表面 是否 凸起 或 凹陷 、 ? 表面 是否 光亮 、 ? 是否有色素分泌 出來而滲透到培養(yǎng)基中 、 ? 生長速度 快慢等 。 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 27 讓某種細菌在液體培養(yǎng)基中生長數(shù) d后觀察、記載以下內(nèi)容： ? 液體培養(yǎng)基 表面菌膜 顏色、表面特征、 ? 是否生成 沉淀 、 產(chǎn)酸產(chǎn)氣 、 ? 是否有 色素分泌 、 ? 生長速度快慢等。 將菌種棉塞部分用油紙包好，置 2～ 8℃ 的冰箱中保藏。 很多細菌可采用蒸餾水保存法，即把細菌懸液放在滅菌蒸餾水小管中，加橡皮塞密封后置室溫下，是較好的保存方法。 2022/2/17 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 36 混濁度計數(shù)法 ? 分光光度計： 由于細菌懸液濃度越大則消光度越大， 因此可制定細菌懸液濃度與消光度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用分光光度計測定細菌數(shù)目。 ? 根據(jù)畫定的小區(qū)域面積和顯微鏡視野面積的 比值 計算，得出小區(qū)域內(nèi)細菌數(shù)目，即可得出菌懸液中的細菌數(shù)。 簡易判斷此濃度的方法 ： 在盛有菌懸液的試管后面放一張報紙，可見到明顯字塊，可辨認出模糊字形 時，大體上為此濃度。 ⑶ 創(chuàng)造適宜發(fā)病的 條件 ：溫度、濕度、光照、 pH、養(yǎng)分供應(yīng)。 ? 第二版 由 Gee Garrity主編分為 5卷，從 2022年起陸續(xù)出版。 （ 4） 國產(chǎn)： 眾多。 gene software ） ? 一般認為， 16S rDNA序列同源性小于 98%，可以認為屬于不同的種，同源性小于 93%95%，可以認