不可忽視的細(xì)節(jié)—血液基因組提取(存儲版)
【正文】 存和前處理－ 口拭子 /漱口水 保存 口拭子：干燥后室溫保存 漱口水： 4℃ 保存或離心得到沉淀 20℃ 或 70℃ 保存 樣本前處理 1. 拭子將拭子棉頭剪入到離心管里，加入緩沖液直接進(jìn)行提取。 加入裂解液（如： TIANGEN試劑盒中的 GB或 FG）和蛋白酶 K需要徹底混勻。 2. 加入異丙醇顛倒混勻后應(yīng)出現(xiàn)絲狀沉淀，動(dòng)作要輕柔，避免基因組因過于猛烈的外力而降解。 溶解 DNA Buffer：純化得到的基因組 DNA最好溶解在 TB Buffer (TIANGEN) 或者 Tris緩沖液里，因?yàn)榇笃蔚幕蚪M DNA在酸性水溶液中不穩(wěn)定，易水解。 DNA提取的原則 基因組提取方法 樣本保存和前處理 基因組提取流程 DNA保存及檢測方法 試劑選擇原則 內(nèi)容 試劑選擇指南 硅膠膜吸附法 微量樣本（ DP316） 口拭子（ DP322） (DP318) 應(yīng)用： 1. HLA分型、親子鑒定及芯片檢測實(shí)驗(yàn)：對 DNA的純度、濃度均有要求。各取2μ l基因組 DNA為模板，擴(kuò)增 GAPDH基因，熒光定量 PCR分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 DNA提取的原則 基因組提取方法 樣本保存和前處理 基因組提取流程 DNA保存及檢測方法 試劑選擇原則 內(nèi)容 濃度： 100－ 300ng/ul 純度：任何雜質(zhì)都可能導(dǎo)致 DNA在儲存過程中的降解，因此要確保純化得到的核酸的純度。通過硅膠膜特異吸附核酸的特性將裂解溶液中的核酸吸附到硅膠膜上。有時(shí)血液需要進(jìn)行兩次裂解，注意第二次加入裂解液后需要將沉淀 votex徹底混勻。 2. 干血點(diǎn)加入緩沖液直接進(jìn)行提取。 樣本保存和前處理－ 血清 /血漿 保存 現(xiàn)在很多科研者使用血清 /血漿提取游離核酸進(jìn)行研究，例如：腫瘤研究。 血凝塊前期破碎程度越高，提取基因組就越容易！ 樣本保存和前處理－ 白膜層 保存 全血分離得到的白膜層放置 20℃ 或 70℃ 長期保存。盡可能保證樣本不經(jīng)過反復(fù)凍融。 傳統(tǒng)酚氯仿法： 傳統(tǒng)方法，抽提時(shí)間長，成本低。 樣本保存和前處理－ 非抗凝血 保存 非抗凝血即血凝塊。白細(xì)胞則
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