細(xì)胞生物學(xué)系列常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法(存儲(chǔ)版)
【正文】 了提高轉(zhuǎn)染效率以及轉(zhuǎn)染穩(wěn)定性、降低細(xì)胞毒性，應(yīng)盡量使用適度傳代的細(xì)胞系，并在不同次實(shí)驗(yàn)時(shí)保持細(xì)胞傳代次數(shù)的一致性。 b)、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度不合適：多數(shù)情況下，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 60%～ 80%時(shí)轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率。 d)、 DNA質(zhì)量偏低 (降解或包含內(nèi)毒素 )：為實(shí)現(xiàn)高效率、低毒性的轉(zhuǎn)染，應(yīng)使用高質(zhì)量的 DNA(高純度、無(wú)菌、無(wú)內(nèi)毒素 )。 c)、誘導(dǎo)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)：一般情況下誘導(dǎo)幾個(gè)小時(shí)就可以出現(xiàn)早期凋亡，因此通常不需要處理大于 48小時(shí)以上；誘導(dǎo)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)使 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)耗盡，導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)差，假陽(yáng)性結(jié)果偏高。 二、 Vazyme的 Annexin V系列 1)、 Annexin VFITC染 色失敗或者陽(yáng)性率偏低 a)、要確定實(shí)驗(yàn)中的誘導(dǎo)劑是否能產(chǎn)生凋亡：可通過(guò)設(shè)定確切凋亡誘導(dǎo)效果的陽(yáng)性藥物對(duì)照來(lái)排除這一情況。 2)、熒光信號(hào)弱或無(wú)信號(hào) a)、細(xì)胞建議用 Triton100通透，切片用蛋白酶 K處理，切片厚度小于 1015181。 X100和 5mg/ml BSA的 PBS洗三次，每次 5分鐘。 b)、在制備貼到顯微鏡載玻片的細(xì)胞懸液時(shí)，離心過(guò)程中用含 1%BSA的 PBS洗細(xì)胞。
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