聚丙烯酰胺凝膠雙向電泳(存儲(chǔ)版)
【正文】 注射器 1 mL（ 帶長(zhǎng)針頭 ） 、 微量注射器 100μL（ 或 50μL）各 1支 大塑料盒 1個(gè) 滴管 1支 2．溶液配制 (1)覆蓋溶液（ 25 mL/班） 含 8 mol/L尿素， 1%兩性電解質(zhì) pH 3~， 5% (w/v) NP40(Nonidet P 40 Substitute)和 100 mmol/L DTT 取 12 g尿素， mL兩性電解質(zhì) (pH 3~)， mL的10%的 NP40和 g DTT，用重蒸水溶解后，定容到25mL。 (4) 10%(w/v) NP40（ 20mL/班） 配制 100 mL溶液，稱量10 g NP40，用重蒸水定容到 100 mL，室溫存放。 (2)配制第一向凝膠溶液（ 8mL /4組） 配制方法見(jiàn)表 1。在電泳槽的下槽加 2021 mL 10 mmol/L H3PO4溶液，將柱膠下端浸入到 H3PO4溶液中，注意膠下端不可有氣泡 (如果有氣泡，可以先用注射器將膠下端用 H3PO4溶液灌滿，再將柱膠插入 H3PO4溶液中 )。 (2) 10% SDS 稱 10 g SDS用重蒸水溶解，定容到 100 mL，室溫存放。 (5)電極緩沖液（ 2500 mL/2組） 稱 6 g的 Tris， 29 g甘氨酸， g SDS，用蒸餾水定容到 L。L 20 20 20 10% AP /181。L 45 總體積 /mL 15 (5)安裝第二向電泳裝置 在冷卻槽上取下紅色密封條，安裝上白色密封條，將夾心式凝膠板從灌膠支架底座上取下，安裝在冷卻槽上。 (10)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 凝膠掃描。 3\操作步驟 ① 將膠置于 150ml 40％甲醇－ 10％冰醋酸中浸泡，搖動(dòng)固定過(guò)夜。 ⑨ 將凝膠放在 3％ Na2CO3溶液（內(nèi)含 120μl/120ml甲醛，可根據(jù)情況增減）的顯影液中顯影。 ⑦ 用大量的去離子水將膠漂洗約 23min。 (6) 3％ Na2CO3溶液（內(nèi)含 60100μl/100ml甲醛） 150ml。 (8)固定 倒去電極緩沖液，拆開(kāi)電泳槽，取下凝膠板，放入固定液中，室溫過(guò)夜。 試劑 凝膠濃度 5 % 30% Acrylamide儲(chǔ)液 /mL 濃縮膠緩沖液 /mL 重蒸水 /mL 10% SDS /mL TEMED /181。 (2)分離膠配制 分離膠按照凝膠濃度不同分為三層，自下而上濃度遞減，每層高度約 4~5 cm，分別按照表 2配制，并依次灌制。 C保存。 第二向電泳 SDS聚丙烯酰胺凝膠電（ SD
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