實驗13大學瓊脂糖凝膠電泳的原理和方法(存儲版)
【正文】 五、交變脈沖電場凝膠電泳 27 1983年， Schwartz等人根據(jù) DNA分子彈性弛豫時間 (外推為零的滯留時間 )與 DNA分子大小有關的特性，設計了脈沖電場梯度凝膠，交替采用兩個垂直方向的不均勻電場，使 DNA分子在凝膠中不斷改變方向，從而使 DNA按分子大小分開。 1982年 Reinhart等用電轉移法將等電聚焦后的蛋白質區(qū)帶從凝膠轉移到特定膜上 ， 稱 Eastern印跡 23 目前國內外有多種核酸、蛋白質印跡轉移的電泳裝置出售，使印跡轉移速度快、效率高、重復性好，應用更加廣泛，儀器的使用方法可參照廠家說明書。在低電壓條件下，線性 DNA分子的電泳遷移率與所用的電壓呈正比。目前更多用的是后者，因為它制膠和加樣比較方便，電泳槽簡單，易于制作，又可以根據(jù)需要制備不同規(guī) 18 (2) 缺少離子時，電流太小， DNA遷移慢；相反，高離子強度的緩沖液由于電流太大會大量產熱 ，嚴重時，會造成膠熔化和 DNA 常用的電泳緩沖液有 EDTA()和 Tris乙酸 (TAE)， Tris硼酸 (TBE)或 Tris磷酸 (TPE)等 ，濃度約為 50mmol/L() 。在一定的電場強度下， DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應，即 DNA分子本身的大小和構型。 (3) 瓊脂糖支持層上的區(qū)帶易于擴散 ， 電泳后必須立即固定染色 。 3 概念： 以 瓊脂糖凝膠 作支持體的電泳方式。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的 中性物質 ，不帶電荷。由于這種方法操作方便，設備簡單，需樣品量少，分辨能力高，已成為基因工程研究中常用實驗方法之一。此時電泳的遷移率不再依賴于分子大小，因此，應用瓊脂糖凝膠電泳分離 DNA時，分子大小不宜超過此值。 工作液也可提供足夠的緩沖能力。通常在室溫下進行電泳，只有當凝膠濃度低于 %時，為增加凝膠硬度，可在 4℃ ，進 (6) 常用熒光染料溴乙錠 (EB)染色，在紫外光下觀察 DNA條帶，用紫外分析儀拍照，或用凝膠成像系統(tǒng)輸出照片，并進行有關的數(shù)據(jù)分析。還要注意凝膠與支持膜之間不能有氣泡。 28 一塊正方形瓊脂糖凝膠板 (10cm 10cm或20cm 20cm)呈 45176。交變脈沖電泳可有效分離數(shù)百萬 bp的大分子 DNA。首先向 S極移動，然后改向 E極。如此時 改變電場方向 ，則 DNA分
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