——蛋白的分離純化制作孫艷芝蔣楠于海濤(存儲(chǔ)版)
【正文】 樣品液液面與凝膠柱面相平時(shí)，關(guān)閉下口，完成上樣?？色@具有一條洗脫峰的曲線，稱為洗脫曲線，用以表示被分離物質(zhì)流出的狀態(tài)。 。與此同時(shí)，再?gòu)牡鞍踪|(zhì)的管中取出 1滴于白色比板中，加入奈氏試劑 1滴，如蛋白管中不出現(xiàn)棕色，即表示蛋白質(zhì)中的硫酸銨已除去。然后將樣品加在凝膠表面，打開(kāi)柱下口開(kāi)關(guān)，控制流速，使樣品慢慢滲入凝膠內(nèi)。根據(jù) 1g干膠溶脹后的體積和所需柱床體積，即可推算出干膠的需要量。然后在層析柱中加水到所需柱床高度，將水倒出，量取柱床體積。 生物層析柱 ?平衡 裝好的凝膠柱，使用前應(yīng)該用相當(dāng)于柱床體積兩倍或更多的洗脫液流過(guò)凝膠柱，以壓實(shí)凝膠，稱為 平衡 ?上樣 上樣操作 ：先打開(kāi)層析柱的下口開(kāi)關(guān)，放出凝膠柱面上的溶液，或用皮頭吸管吸取，使液面與凝膠表面相平齊，但切忌液面低于凝膠表面。 ? 方法 ： 從每管中取出 1滴放在黑色比色板孔中（按編號(hào)順序），再分別加入 1滴 20%磺酰水揚(yáng)酸，如出現(xiàn)白色沉淀即表示蛋白質(zhì)已流出凝膠柱，如此一直檢查到蛋白質(zhì)全流出為止。凝膠長(zhǎng)期不用，可用水洗凈，分次加入百分濃度遞增的乙醇溶液
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