【正文】 丹參幼苗生理活性的影響 8 脯氨酸含量的測定結果 脯氨酸的標準曲線 y = R2 = 00 1 2 3 4 5 6 7 圖 5 脯氨酸標準曲線 Fig5 The free pralinein standard curve 脯氨酸含量變化0102030405060700mg/L 100mg/L 200mg/L 400mg/L 800mg/L 1600mg/Lpb2+濃度脯氨酸含量(mg/kg)0天5天10天15天 圖 6 脯氨酸含量的測定情況 Fig6 The situation of Content of free pralinein 脯氨的測定結果 隨著 Pb2+含量的增加，丹參葉片中脯氨酸的含量呈現(xiàn)增加趨勢（見圖 6）。由此可知： Pb2+對丹參葉片的保水能力有破壞，并且隨著濃度的增加，脅迫時間的增長，葉片中的含水量就越低，說明 Pb2+對丹參葉片的傷害與時間，濃度的變化成正比例。沉淀用 5ml 磷酸緩沖液再提取 2 次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，低溫下保存?zhèn)溆?。g－ 1Fw） ＝ [X 提取液總量（ ml） ]/ [ 樣品鮮重（ g） 測定時提取液用量（ ml） ] 公式中： X － 從標 準 曲線 中查得的脯氨酸含 量（μ g） 丙二醛的含量測定 采用二硫代巴比妥酸顯色法 [10,18,29,21]。取出冷卻，各試管再加入 4ml 甲苯，振蕩 30 秒鐘，靜置片刻，使色素全部轉至甲苯溶液輕輕吸取各管上層脯氨酸甲苯 溶液至比色杯中，以甲苯溶液為空白對照，在 520mm 波長處測定吸光度（ A）值。取濾紙 1 張，置漏斗中，用乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過濾到 25ml 棕色容量瓶中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數(shù)次，最 后連同殘渣一起倒入漏斗中，用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。 測定含水量 將葉片從丹參植株上取下后，迅速剪成小塊，置于稱量紙上用電子天平稱重，記為 Wf。4H2O 、 、 隨著人類疾病譜的變化，丹參作為能夠預防和治療人類面臨的幾大危險疾病的植物藥之一，它的應用將會更加廣泛 [8]。 at the high lead concentrations, the chlorophyll content will deacrease in a large scale. At low lead concentration, the content of proline, content of MDA and activity of peroxidase will increase with the growth of stress time and stand in a stable level relatively。 關鍵詞： 丹參；鉛；酶；葉綠素 Effect of Pb2+ stress on physiological indices of salvia miltiorrhiza Undergraduate:WangJunlong Supervisor: LuoMinghua Abstract: In the paper, the Salvia miltiorrhiza which are planted in Zhongjiang County area in Deyang, Sichuan province were used as eaperimental materials. The moisture content, content of chlorophyll ,content of proline, content of MDA and activity of peroxidase(POD) of the Salvia miltiorrhiza is studied under different levels of lead stress in this paper. At last, the results display as follows: With the growth of stress time and the concentration of lead, the moisture content will decrease. At low lead concentrations, chlorophyll content will increase in a small degree。其現(xiàn)代藥理作用 [3,4]主要包括舒張冠脈、增加冠脈血流量 ，具有明顯的鈣拮抗劑作用；提高心室的順應性，改善心臟的舒張功能，對缺血心肌和再灌注心臟具有保護作用；抑制內源性膽固醇的合成；增加微循環(huán)流速和流量，消除局部靜脈血液瘀滯，改善組織細胞缺血、缺氧所致的代謝障礙；具有抗體外血栓形成、抗血小板聚集、抗內外凝血系統(tǒng)功能、減少血小板、促進纖維蛋白原降解作用；具有很強的清除自由基和抗氧化作用等 [7]。 營養(yǎng)液 (NO3)2對照組定時加入不含鉛的營養(yǎng)液，其他分組同時加入不 同濃度的含鉛培養(yǎng)液。稱取剪碎的新鮮樣品 ，放入研缽中，加少量碳酸鈣和石英砂及 2～3ml95％乙醇，研成均漿，再加乙醇 10ml，暗處靜置 3～ 5min。加入表中試劑后，置于沸水浴中加熱 30min。 計 算 從標 準 曲線上 查出 樣 品 測 定液中脯氨酸的含量 [14]，按下公式 計 算 樣 品中脯氨酸含量： 脯氨酸含量 （ μg將勻漿液全部轉入離心管中，于 3000g 離心 10min，上清液轉入 25ml容量瓶中。且隨 Pb2+濃度的增加而下降的越快；同等濃度的 Pb2+條件下，隨著脅迫時間的增長，含水量的下降越明顯。葉綠素在不同濃度鉛脅迫下參與葉綠素合成的礦物質吸收受陰也可能是植株葉綠素含量變化的原因。從 中可以看出脯氨酸含量在一定范圍內與鉛濃度有較好的劑量 效應關系。 綿陽師范學 2020屆畢業(yè)論 鉛離子脅迫對丹參幼苗生理活性的影響 10 酶活性的測定結果 POD酶活性變化01002003004005000mg/L100mg/L 200mg/L 400mg/L 800mg/L1600mg/L脅迫濃度酶活性{U/[min同時低 濃度鉛脅迫處理出現(xiàn)葉綠素含量升高現(xiàn)象，與巢麗儀 [21]等和徐勤松 [27]等的研究結果基本一致。丹參葉片脯氨酸含量在高鉛脅迫下急劇增加，從而支持了以往對于脯氨酸具有清除活性氧的作用，與植物抗氧化關系十分密切，是植物對逆境的一種適應性反應的論點。 (2)測定更多的相關指標，如：導電率，可溶性糖等 。 6 結論 綜合各項研究結果，本研究結論如下： (1)含水量隨鉛濃度的上 升和脅迫時間的增長而呈下降趨勢； (2)低濃度鉛 (100mg/L)時，葉綠素 a和葉綠素 b含量都有一定程度的上升，且維持在相對穩(wěn)定的水平，當鉛濃度升高 (大于 200mg/L)時，葉綠素 a和葉綠素 b 含量下降，且葉綠素 a下降的弧度更大； (3)丙二醛含量、脯氨酸含量， POD 酶活性在鉛濃度在 0~800mg/L 時維持在相對正常水平，當鉛濃度為 800~1600mg/L 時，則會出現(xiàn)快速升高。通過丙二醛含量的測定可了解膜脂氧化傷害的程度，比較植物抗逆性的差異。 POD作為細胞內清除活性氧系統(tǒng)中的重要酶，能催化 H2O2與酚類的反應，達到清除過氧化物的作用。丙二醛的積累來自不飽和脂肪酸的降解，它的生成是由體內自由基引發(fā)而產生的，丙二醛的積累能夠反映植物體內自由基的活動狀況。脯氨酸是植物蛋白質的組分之一，并以游離狀態(tài)廣泛的存在于植物體中。 葉綠素含量的高低直接反映植物光合作用能力的強弱。 結果計算 以每分鐘內 A470變化 為 1個酶活力單位（ U）。對照管加蒸餾水 2ml，迅速各管再加入 %硫代巴比妥酸溶液，搖勻，混合液在沸水浴中反應 15min，迅速冷卻后再離心，