【正文】 老師們認(rèn)真負(fù)責(zé)的工作態(tài)度，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)精神和深厚的理論水平都使我收益匪淺。從這里走出，對我的人生來說，將是踏上一個(gè)新的征程，要把所學(xué)的知識應(yīng)用到實(shí)際工作中去。 首先，我要特別感謝我的知道郭謙功老師對我的悉心指導(dǎo)，在我的論文書寫及設(shè)計(jì)過程中給了我大量的幫助和指導(dǎo)，為我理清了設(shè)計(jì)思路和操作方法，并對我所做的課題提出了有效的改進(jìn)方案。 本人愿意按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版，同意學(xué)校保存學(xué)位 論文的印刷本和電子版，或采用影印、數(shù)字化或其它復(fù)制手段保存設(shè)計(jì)（論文）；同意學(xué)校在不以營利為目的的前提下，建立目錄檢索與閱覽服務(wù)系統(tǒng)，公布設(shè)計(jì)（論文）的部分或全部內(nèi)容，允許他人依法合理使用。對本文的研究做 出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式注明并表示感謝。 隨著分子生物學(xué)的蓬勃發(fā)展，利用基因工程技術(shù)將幾丁質(zhì)酶基因?qū)胛⑸锘蛑参飿?gòu)建工程菌，大量獲得幾丁質(zhì)酶已 成為可能。 理論上， 變性劑、抑制劑 可以使酶的結(jié)構(gòu)改變從而使酶變性失活或者與酶的活性中心結(jié)合降低酶的活性。 （ 2） 幾丁質(zhì)酶的酶學(xué)性質(zhì) 微生物幾丁質(zhì)酶最適溫度一般在 4050 ℃ ， pH 一般認(rèn)為 在 311之間 ，但絕大多數(shù)微生物幾丁質(zhì)酶適于 46 的偏酸性環(huán)境 [14]。 底物特異性試驗(yàn)證明該幾丁質(zhì)酶特異性降解膠體幾丁質(zhì)。 其中， Cu2+、 Ag+、 Hg2+對幾丁質(zhì)酶的 抑制作用 明顯 。當(dāng)溫度超過 60 ℃ 時(shí)，酶活性降低，在 80 ℃ 時(shí)， 酶 活性 降 低 至 30 %。 因此，選取第 7天的 發(fā)酵 液進(jìn)行酶 學(xué)性質(zhì)研究 。 幾丁質(zhì)酶的 pH 值穩(wěn)定性 將酶液分別在 pH 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 的緩沖液中 處理 1 h 后，然后再將反應(yīng)體系的 pH值調(diào)至 ，測定剩余的酶活性。 ④ 脫色后，將膠板置于去離子水中室溫下保存。室溫下放置 2 h，待其完全凝聚。用適量 50 mmol/mL pH TrisHCl 緩沖液溶解，并在 相同緩沖液中透析 23 d，取少量溶液加 BaCl2檢測是否透析完全。 1 mL 膠體幾丁質(zhì)與稀釋的 mL 酶液放于 50 ℃ 水浴保溫 1 h， 上清液中的還原糖 采用 DNS 法測定。每次取樣 3 mL 于 mL離心管中 20 ℃ 保存。 ⑥ 將液體儲存于棕色瓶，避光保存 7 d， 備 用。 （ 4）膠體幾丁質(zhì)的制備 ① 稱取 10 g 片狀幾丁質(zhì)（剪碎）置于 500 mL 三角瓶中，加 100 mL 濃鹽酸浸泡，然后放入 37 ℃ 搖床中至幾丁質(zhì)完全溶解， 4 ℃ 過夜。 ③ 濃縮膠緩沖液：稱取 g Tris， 48 mL 1 mol/L HCl，加 100 mL 蒸餾水溶解。 ②500B （ % Biotin， 生物素）：將 2 mg 生物素溶于 10 mL 蒸餾水中，過濾除菌后 4 ℃ 保存?zhèn)溆?。酵母表達(dá)系統(tǒng)因?yàn)槠渚哂斜容^完備的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制和對表達(dá)產(chǎn)物的加工修飾能力，而受到越來越多的重視、利用。 幾丁質(zhì)酶可以根據(jù)不同的標(biāo) 準(zhǔn)進(jìn)行分類。但由于化學(xué)方法降解幾丁質(zhì)條件苛刻、穩(wěn)定性差、處理繁瑣 、 污染嚴(yán)重，使得無法對它的進(jìn)行大規(guī)模開發(fā)利用。 Chitinase。 致謝 ............................................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 幾丁質(zhì)酶的 pH 穩(wěn)定性 ............................ 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 幾丁質(zhì)酶 的酶學(xué)性質(zhì) ........................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 培養(yǎng)基及有關(guān)溶液的配制 ....................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 涉密論文按學(xué)校規(guī)定處理 。對本研究提供過幫助和做出過貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均已在文中作了明確的說明并表示了謝意。青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 畢 業(yè) 論 文（設(shè)計(jì)） 題 目： 酵母工程菌 表達(dá) 的幾丁質(zhì)酶分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究 畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）誠信聲明 本人聲明：所呈交的畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，論文中引用他人的文獻(xiàn)、數(shù)據(jù)、圖表、資料均已作明確標(biāo)注，論文中的結(jié)論和成果為本人獨(dú)立完成，真實(shí)可靠，不包含他人成果及已獲得青島農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書使用過的材料。 作 者 簽 名： 日 期： 指導(dǎo)教師簽名： 日 期： 使用授權(quán)說明 本人完全了解 大學(xué)關(guān)于收集、保存、使用畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）的 規(guī)定，即：按照學(xué)校要求提交畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）的印刷本和電子版，并提供目錄檢索與閱覽服務(wù)；學(xué)?？梢圆捎糜坝?、縮印、數(shù)字化或其它復(fù)制手段保存論文；在不以贏利為目的前提下，學(xué)?？梢怨颊撐牡牟糠只蛉績?nèi)容。 作者簽名： 日期： 年 月 日 導(dǎo)師簽名： 日期： 年 月 日 指導(dǎo)教師評閱書 指導(dǎo)教師評價(jià)： 一、撰寫（設(shè)計(jì)）過程 學(xué)生在論文（設(shè)計(jì)）過程中的治學(xué)態(tài)度、工作精神 □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 學(xué)生掌握專業(yè)知識、技能的扎實(shí)程度 □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 學(xué)生綜合運(yùn)用所學(xué)知識和專業(yè)技能分析和解決問題的能力 □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 研究方法的科學(xué)性；技術(shù)線路的可行性；設(shè)計(jì)方案的合理性 □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 完成畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）期間的出勤情況 □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 二、論文（設(shè)計(jì)）質(zhì)量 論文（設(shè)計(jì)）的整體結(jié)構(gòu)是否符合撰寫規(guī)范？ □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 是否完成指定的論文（設(shè)計(jì)）任務(wù)（包括裝訂及附件） ？ □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 三、論文（設(shè)計(jì)）水平 論文（設(shè)計(jì)）的理論意義或?qū)鉀Q實(shí)際問題的指導(dǎo)意義 □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 論文的觀念是否有新意？設(shè)計(jì)是否有創(chuàng)意？ □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 論文（設(shè)計(jì)說明書）所體現(xiàn)的整體水平 □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 建議成績： □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 （在所選等級前的□內(nèi)畫“√”） 指導(dǎo)教師： （簽名） 單位： （蓋章） 年 月 日 評閱教師評閱書 評閱教師評價(jià)： 一、論文（設(shè)計(jì)）質(zhì)量 論文（設(shè)計(jì)）的整體結(jié)構(gòu)是否符合撰寫規(guī)范？ □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 是否完成指定的論文（設(shè)計(jì)）任務(wù)（包括裝訂及附件）？ □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 二、論文（設(shè)計(jì)）水平 論文（設(shè)計(jì)）的理論意義或?qū)鉀Q實(shí)際問題的指導(dǎo)意義 □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 論文的觀念是否有新意？設(shè)計(jì)是否有創(chuàng)意？ □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 論文（設(shè)計(jì)說明書）所體現(xiàn)的整體水平 □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 建議成績： □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 （在所選等級前的□內(nèi) 畫“√”） 評閱教師： （簽名） 單位： （蓋章） 年 月 日 教研室（或答辯小組）及教學(xué)系意見 教研室（或答辯小組）評價(jià)： 一、答辯過程 畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）的基本要點(diǎn)和見解的敘述情況 □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 對答辯問題的反應(yīng)、理解、表達(dá)情況 □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 學(xué)生答辯過程中的精神狀態(tài) □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 二、論文（設(shè)計(jì)）質(zhì)量 論文（設(shè)計(jì)）的整體結(jié)構(gòu)是否符合撰寫規(guī)范？ □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 是否完成指定的論文（設(shè)計(jì)）任務(wù)（包括裝訂及附件）？ □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 三、論文（設(shè)計(jì)）水平 論文（設(shè)計(jì)）的理論意義或?qū)鉀Q實(shí)際問題的指導(dǎo)意義 □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 論文的觀念是否有新意？設(shè)計(jì)是否 有創(chuàng)意？ □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 論文（設(shè)計(jì)說明書）所體現(xiàn)的整體水平 □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 評定成績： □ 優(yōu) □ 良 □ 中 □ 及格 □ 不及格 （在所選等級前的□內(nèi)畫“√”） 教研室主任（或答辯小組組長）： （簽名） 年 月 日 教學(xué)系意見： 系主任： （簽名） 年 月 日 目錄 摘要 ............................................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 主要儀器設(shè)備 ................................. 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 2 結(jié)果與分析 ....................................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 不同金屬離子對酶活性的影響 ..................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 參考文獻(xiàn) ........................................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 Enzymatic Characterization