廣西地方標(biāo)準(zhǔn)豬藍(lán)耳病病毒美洲型野毒株和疫苗株的鑒別檢測多重?zé)晒舛糠崔D(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法征求意見稿-免費(fèi)閱讀
【正文】 酶切鑒定DB45/T XXXXX—XXXX11以提取的質(zhì)粒為模板，用 EcoR I和 Hind III內(nèi)切酶在37℃酶切2 h，進(jìn)行凝膠電泳后，用凝膠成像系統(tǒng)觀察。加完試劑后瞬時離心混勻?！〔《竞怂崽崛〖癛TPCR擴(kuò)增分別取CPRRSV VR2332株、HPPRRSV JXA1株、VPRRSV TJMF92株細(xì)胞培養(yǎng)物，反復(fù)凍融3次，以10 000 g離心 3 min，收集上清，（RT） ，獲得cDNA。圖 PRRSV 多重?zé)晒舛?RTPCR 擴(kuò)增曲線圖DB45/T XXXXX—XXXX8附 錄 B（規(guī)范性附錄）試劑盒 商業(yè)化的RNA?抽提試劑盒主要成分包括：a）細(xì)胞裂解液；b）Proteinase K；c）Carrier RNAd）洗液；e）無水乙醇；f）DEPC 水；g）過濾柱。DB45/T XXXXX—XXXX6附 錄 A（規(guī)范性附錄）引物、探針序列及結(jié)果判定 PRRSV 特異性引物序列 引物序列及擴(kuò)增片斷長度見表?。5 結(jié)果判定 結(jié)果分析條件設(shè)定閾值設(shè)定根據(jù)儀器背景噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過陰性對照樣品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)為準(zhǔn)。將熒光 PCR 反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀內(nèi)，按如下程序進(jìn)行反應(yīng)：預(yù)變性 95 ℃20 s；95 ℃5 s；56 ℃20 s ，共 40 個循環(huán)；在每次循環(huán)的退火延伸時分別收集FAM、JOE和TAMRA通道的熒光信號。L；f）NACPRRSVP 探針（25 pmol/181。在冰浴條件下，在熒光?PCR?反應(yīng)管中按下列用量分別加入各成分：a）Premix Ex Taq 聚合酶： 181。L；h）滅菌雙蒸水：補(bǔ)足總體積至 10 181。L）：?181。以 10 000 g離心 5 min，收集上清，用于總 RNA 抽提，或置 20 ℃保存?zhèn)溆??！》崔D(zhuǎn)錄試劑盒商業(yè)化的反轉(zhuǎn)錄試劑盒主要成分見附錄?B 中的 ，使用前經(jīng)技術(shù)驗(yàn)證合格。 反轉(zhuǎn)錄 reverse transcription，RT以RNA為模板合成互補(bǔ)脫氧核糖核酸（cDNA）的過程。本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬繁殖與呼吸綜合征病毒美洲型野毒株及疫苗株的鑒別檢測。ICS?B 41 DB 45廣 西 壯 族 自 治 區(qū) 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB 45/T XXXXX—XXXX 豬藍(lán)耳病病毒美洲型野毒株和疫苗株的鑒別檢測 多重?zé)晒舛糠崔D(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法Multiplex realtime RTPCR for differential detection of wild and vaccine strain of North American genotype porcine reproductive and respiratory syndrome virus點(diǎn)擊此處添加與國際標(biāo)準(zhǔn)一致性程度的標(biāo)識（征求意見稿）（本稿完成日期：2022 年 11 月 15 日）XXXX XX XX 發(fā)布 XXXX XX XX 實(shí)施廣 西 壯 族 自 治 區(qū) 質(zhì) 量 技 術(shù) 監(jiān) 督 局 ? ? ? 發(fā) 布DB45/T XXXXX—XXXXI目? ? 次前言 ..................................................................................II1 范圍 ................................................................................12 術(shù)語和定義 ..........................................................................13 材料準(zhǔn)備 ............................................................................2 試劑 ............................................................................2 儀器設(shè)備及耗材 ..................................................................24 操作方法 ........................................
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