【正文】 工業(yè)發(fā)酵所用菌種為厭氣菌的有丙酮丁醇的梭狀芽孢桿菌，白酒增香用的丁酸菌、己酸菌及用于環(huán)境污水處理和水產(chǎn)養(yǎng)殖用的光合菌、反硝化菌、脫氮排硫桿菌等。第二類是中溫微生物，它們的最適生長溫度是20～40℃，超過50℃，就停止生長。加入氟哌酸（5mg/L）+制霉菌素（50mg/L）+青霉素（）也可以有效地抑制細菌和真菌，而不影響放線菌的生長。為了維持培養(yǎng)基的ph，一般要加磷酸鹽，如K2HPOKH2PO4，使培養(yǎng)基具有一定的緩沖能力。 分離堿性蛋白酶和堿性脂肪酶產(chǎn)生菌時，可以把培養(yǎng)基調(diào)到pH9～11，在此范圍內(nèi)不宜生長的微生物被抑制，這對分離本身起到濃縮作用。 篩選水解酶產(chǎn)生菌時，通常利用以底物為惟一碳、氮源的平板進行分離，如以淀粉為碳源的培養(yǎng)基可鑒定菌落能否產(chǎn)生淀粉酶；一種含纖維素粉為碳源的分離培養(yǎng)基，可以鑒別纖維素酶產(chǎn)生菌；用含有酪蛋白為有機氮源的平板培養(yǎng)基，可以鑒別蛋白酶的產(chǎn)生菌。另外，還有固氮菌（Azotobacter）、假單胞菌（Pseudomonas）、生絲微菌（Hyphomicrobium X）、菌宿根瘤菌（Rhizobium meliloti）、嗜鹽桿菌（Halobacteria）等。尤其是膜料中的聚乙烯和淀粉分布并非均勻，由于聚乙烯的流動性好，因而在吹塑過程中膜表面的聚乙烯含量偏高，使細菌在初期很難降解這類共混物，所以在降解菌的研究方面應著重考慮霉菌與放線菌。如王倩如等人從經(jīng)甲胺磷農(nóng)藥廢水長期馴化的活性污泥中，篩選到能高效降解甲胺磷農(nóng)藥的蠟狀芽孢桿菌（Bacillus crerus）和嗜中溫假單孢菌（Pseudomonas mesophilica），%。將稀釋為1500ml1的孢子懸液用上述滴管滴在濾紙上，每皿約點20點滴左右，經(jīng)恒溫培養(yǎng)，每滴約出現(xiàn)10個菌落，將單菌落移接于斜面上。以上操作全部在超凈臺或無菌室內(nèi)進行。食用菌的孢子著生在子實體的腹面的菌褶上，成熟時會自動彈出來。用肉眼或顯微鏡觀察菌落，基本確認后挑入斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)?？共《究股丶翱鼓[瘤藥物的篩選則可通過敏感細菌培養(yǎng)平板的噬菌斑來判斷。采用聯(lián)合檢驗菌，如枯草桿菌和綠色產(chǎn)色鏈霉菌活巴氏梭菌，可分離出抗菌活性低、對其他試驗菌活性高的新抗生素，如黃色霉素族的抗生素，而這些抗生素在單獨使用枯草桿菌時無法檢出。 在青霉素菌種選育中，還可利用加入青霉素酶來篩選青霉素高產(chǎn)菌株，做法如下：將產(chǎn)黃青霉孢子進行誘變處理，致死率約為99％。同樣，只要是篩選微生物所需營養(yǎng)物的產(chǎn)生菌時，都可采用生長圈法，工具菌用 相應的營養(yǎng)缺陷型菌株，由于得到所需營養(yǎng)，凡是目的微生物周圍便會出現(xiàn)混濁的生長圈。在以糖為碳源的瓊脂平板的菌落上，覆蓋一層含有鹽類的瓊脂，該藍色物質(zhì)在醇脫氫酶和NAD作用下（在少量乙醇存在時）反應產(chǎn)生的電子脫色。為提高分離篩選效率，多采用固體平板的變色圈法，如以吐溫為底物，尼羅藍（Nile blue）作為指示劑，根據(jù)變色圈大小來判斷脂肪酶活性的高低；也可用甘油三丁酸酯為底物，羅丹明B為指示劑，以熒光圈的大小來測定。 在分離某種產(chǎn)生有機酸的菌株時，也通常采用透明圈法進行初篩。（三）利用平皿的生化反應進行分離 這是一種利用特殊的分離培養(yǎng)基對大量混雜微生物進行初步分離的方法。采用該方法，在平板培養(yǎng)基上得到單菌落的機會較大，特別適合于分離易蔓延的微生物。一、好氣微生物的分離 分離的方法很多，大體可分為兩類：一類較為粗放，只能達到“菌落純”，如稀釋涂布法，劃線分離法，組織分離法等。對于含菌數(shù)量較少的樣品或分離一些稀有微生物時，采用富集培養(yǎng)以提高分離工作效率是十分必要的。 從土壤中分離芽孢桿菌時，由于芽孢具有耐高溫特性，100℃很難殺死，要在121℃才能徹底死亡。如細菌、放線菌的生長繁殖一般要求偏堿（～），霉菌和酵母菌要求偏酸（～6）。同時將苯胺濃度逐步提高，便可得到降解苯胺占優(yōu)勢的菌株培養(yǎng)液，采用稀釋涂布法或平板劃線法進一步分離，即可得到能降解高濃度苯胺的微生物。此時分離將得到所需的微生物。一、控制培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分 微生物的代謝類型十分豐富，其分布狀態(tài)隨環(huán)境條件的不同而異。嗜熱微生物是嗜熱菌最好的來源。 嗜冷菌（thermophiles）的最適生長溫度為15℃，在0℃也可生長繁殖，最高溫度不超過20℃。 具有特殊性質(zhì)的微生物通常分布在一些特殊的環(huán)境中。氧氣充足的土層中按理只適合于好氧菌生長，實際上也有一些嫌氣菌生活，原因是好氣菌生長繁殖消耗了土層中大量氧氣，為嫌氣菌創(chuàng)造了局部生長的有利環(huán)境，故一般土壤中也能分離到嫌氣菌。 在篩選一些具有特殊性質(zhì)的微生物時，需根據(jù)該微生物獨特的生理特性到相應的地點采樣。Hartman等人曾從乙烯氯化物的工廠附近分離到一株以乙烯氯化物為碳源和能源的分枝桿菌。到一處將取好的土樣混勻，取3～4撒到試管斜面上，這樣可避免菌株因不能及時分離而死亡。到了春天隨著氣溫的升高，微生物生長旺盛，數(shù)量逐漸增加。由于植物根部的分泌物有所不同，因此，植被對微生物分布也有一定的影響。 從土層的縱剖面看，1～5cm的表層土由于陽光照射，蒸發(fā)量大，水分少，且有紫外線的殺菌作用，因而微生物數(shù)量比5～25cm土層少；25cm以下土層則因土質(zhì)緊密，空氣量不足，養(yǎng)分與水分缺乏，含菌量也逐步減少。但總體來講土壤樣品的含菌量最多。 在實驗工作中，為使篩選達到事半功倍的效果，總的說來可從以下幾個途徑進行收集和篩選：（1）向菌種保藏機構索取有關的菌株，從中篩選所需菌株。（2）由自然界采集樣品，如土壤、水、動植物體等，從中進行分離篩選。一、從土壤中采樣 土壤由于具備了微生物所需的營養(yǎng)、空氣和水分，是微生物最集中的地方。因此，采土樣最好的土層是5～25cm。如番茄地或腐爛番茄堆積處有較多維生素C生產(chǎn)菌。但就南方來說，春季往往雨水多，土壤含水量高，通氣不良，即使有微生物所需的溫度、濕度，也不利于其生長繁殖。二．根據(jù)微生物生理特點采樣 每種微生物對碳\氮源的需求不一樣,分布也有差異。含1%乙烯氯化物的空氣通過該菌培養(yǎng)可除去93%的毒性。如篩選高溫酶產(chǎn)生菌時，通常到溫度較高的南方，或溫泉、火山爆發(fā)處及北方的堆肥中采集樣品；分離低溫酶產(chǎn)生菌時可到寒冷的地方，如南北極地區(qū)、冰窖、深海中采樣；分離耐壓菌則通常到海洋底部采樣。 海洋對于微生物來說是一個特殊的局部環(huán)境，盡管許多微生物也是經(jīng)河水、污水、雨水或塵埃等途徑而來，但由于海洋獨特的高鹽度、高壓力、低溫及光照條件，使海洋微生物具備特殊的生理活性，相應也產(chǎn)生了一些不同于陸地來源的特殊產(chǎn)物。如得克薩斯州中南部的一個巖洞中存在著大量嗜堿性的，能進行氨氧化和產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的微生物，其原因是這里生活這2000萬只蝙蝠，它們每晚吃釣5萬lb（磅）昆蟲，其排泄物造成了洞內(nèi)0m深的豐富營養(yǎng)層，這種特殊的環(huán)境對該種微生物起了選擇和富集的作用。主要分布于寒冷的環(huán)境中，如南北兩極地區(qū)、冰窟、高山、深海和土壤等低溫環(huán)境中。有人從溫泉和海底火山口分離出了極端嗜熱菌。如果環(huán)境中含有較多某種物質(zhì)，則其中能分解利用該物質(zhì)的微生物也較多。又如要分離耐高滲酵母菌，由于該類菌在一般樣品中含量很少，富集培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件必須嚴密設計。移種的時間既可根據(jù)底物的降解情況，也可通過微生物的生長情況確定。因此，富集培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)到被分離微生物的要求范圍不僅有利于自身生長，也可排除一部分不需要的菌類。可先將土樣加熱到80℃或在50%乙醇溶液中浸泡1h，殺死不產(chǎn)芽孢的菌種后再進行分離。但是如果按通常分離方法，在培養(yǎng)基平板上能出現(xiàn)足夠數(shù)量的目的微生物，則不必進行富集培養(yǎng)，直接分離、純化即可。前兩種方法由于操作簡便有效，工業(yè)生產(chǎn)中應用較多。 （二）劃線分離法 用接種環(huán)取部分樣品或菌體，在事先已準備好的培養(yǎng)基平板上劃線，當單個菌落長出后，將菌落移入斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后備用。分離培養(yǎng)基是根據(jù)目的微生物特殊的生理特性或利用某些代謝產(chǎn)物生化反應來設計的。在選擇性培養(yǎng)