【正文】 。因為深海中生活的微生物能耐很高的靜水壓，如從海中篩到一株水活微球菌（Micrococcus aquivivus）,它能在600個大氣壓下生長。具有以上特性的微生物在一般土壤、水、及其他樣品中也會存在。也有人從含油污泥中篩選出能以20機械潤滑油為惟一碳源的３株石油降解菌菌株，分別為動膠菌屬（Zoogloea sp.）、氮單胞菌屬（Azomonas sp.）和假單胞菌屬（Pseudomonas sp.）。若需要篩選代謝合成某種化合物的微生物，從大量使用、生產(chǎn)或處理這種化合物的工廠附近采集樣品，容易得到滿意的結(jié)果。研究表明，微生物的營養(yǎng)需求和代謝類型與其生長環(huán)境有著很大的相關(guān)性。一般樣品取回后應(yīng)馬上分離，以免微生物死亡。隨后經(jīng)過夏季到秋季，約有7～10個月處在較高的溫度和豐富的植被下，土壤中微生物數(shù)量比任何時候都多，因此，秋季采土樣最為理想。原因是南方溫度高，溫暖季節(jié)長，雨水多，相對濕度高，植物種類多，植被覆蓋面大，土壤有機質(zhì)豐富，造成得天獨厚的微生物生長環(huán)境。葡萄或其他果樹在果實成熟時，其根部附近土壤中酵母菌數(shù)量增多。偏堿的土壤（～）環(huán)境，適合于細菌、放線菌生長。一般每克土中含菌數(shù)約幾十萬到幾十億個，并且各種類型的細菌和放線菌幾乎都能分離到。（一）根據(jù)土壤特點1．土壤有機質(zhì)含量和通氣狀況 一般耕作土、菜園土和近郊土壤中有機質(zhì)含量豐富，營養(yǎng)充足，且土壤成團粒結(jié)構(gòu)，通氣飽水性能好，因而，微生物生長旺盛，數(shù)量多，尤其適合于細菌、放線菌生長。從土壤中幾乎可以分離到任何所需的菌株，空氣、水中的微生物也都來源于土壤，所以土壤樣品往往是首選的采集目標(biāo)。 （3）從一些發(fā)酵制品中分離目的菌株，如從醬油中分離蛋白酶產(chǎn)生菌，從酒醪中分離淀粉酶或糖化酶的產(chǎn)生菌等。菌株分離、篩選（screening）雖為兩個環(huán)節(jié)，但卻不能絕然分開，因為分離中的一些措施本身就具有篩選作用。工業(yè)微生物產(chǎn)生菌的篩選一般包括兩大部分：一是從自然界分離所需要的菌株，二是把分離到的野生型菌株進一步純化并進行代謝產(chǎn)物鑒別。該類發(fā)酵制品經(jīng)過長期的自然選擇，具有悠久的歷史，從這些傳統(tǒng)產(chǎn)品中容易篩選到理想的菌株。含微生物樣品的采集 自然界含菌樣品極其豐富，土壤、水、空氣、枯枝爛葉、植物病株、爛水果等都含有眾多微生物，種類數(shù)量十分可觀。一般情況下，土壤中含細菌數(shù)量最多，且每克土壤的含菌量大體有如下的遞減規(guī)律：細菌（108）放線菌（107）霉菌（106）酵母菌（105）藻類（104）原生動物（103），其中放線菌和霉菌指其孢子數(shù)。山坡上的森林土，植被厚，枯枝落葉多，有機質(zhì)豐富，且陰暗潮濕，適合霉菌、酵母菌生長繁殖，微生物數(shù)量相應(yīng)也比較少。如好氣芽孢桿菌、假單胞菌、短桿菌、大腸桿菌、某些嫌氣菌等。反之在偏酸的土壤（）環(huán)境下，霉菌、酵母菌生長旺盛。豆科植物的植被下，根瘤菌數(shù)量比其他植被下占優(yōu)勢。4．季節(jié)條件 不同季節(jié)微生物數(shù)量有明顯的變化，冬季溫度低，氣候干燥，微生物生長緩慢，數(shù)量最少。（二）采樣方法 用取樣鏟，將表層5cm左右的浮土除去，取5～25cm處的土樣10～25g，裝入事先準(zhǔn)備好的塑料袋內(nèi)扎好。但有時樣品較多，或到外地取樣，路途遙遠，難以做到及時分離，則可事先用選擇性培養(yǎng)基做好試管斜面，隨身帶走。如森林土有相當(dāng)多枯枝落葉和腐爛的木頭等，富含纖維素，適合利用纖維素作碳源的纖維素酶產(chǎn)生菌生長；在肉類加工廠附近和飯店排水溝的污水、污泥中，由于有大量腐肉、豆類、脂肪類存在，因而，在此處采樣能分離到蛋白酶和脂肪酶的產(chǎn)生菌；在面粉加工廠、糕點廠、酒廠及淀粉加工廠等場所，容易分離到產(chǎn)生蛋白酶、糖化酶的菌株。在油田附近的土壤中就容易篩選到利用碳氫化合物為碳源的菌株。當(dāng)然，也可將一種需要降解的物質(zhì)作為樣品中微生物的惟一碳源或氮源進行富集，然后分離篩選。不過數(shù)量較少。分離耐高滲透壓酵母菌時，由于其偏愛糖分高、酸性的環(huán)境，一般在土壤中分布很少，因此，通常到甜果、蜜餞或甘蔗渣堆積處采樣。但在該地區(qū)的溫泉或堆肥中，卻會出現(xiàn)為數(shù)眾多的高溫微生物。此外，美國馬里蘭大學(xué)也曾從海綿體內(nèi)的共生或共棲的細菌中分離到抗白血病、鼻咽癌的抗癌物質(zhì)。從海洋中采樣時，可參考其中不同種類微生物的分布規(guī)律：表層多為好氣異養(yǎng)菌，底層由于有機質(zhì)豐富，硫化氫含量高，厭氣性腐敗菌和硫酸鹽還原菌較多，兩層中則多為紫硫菌。從考拉(Koala)熊腸中也曾分離到萜烯分解酶的產(chǎn)生菌，這可能因為考拉專吃含有高萜烯的桉樹類植物，給該種微生物創(chuàng)造了一個適宜的生長環(huán)境。生活所處的特殊環(huán)境，導(dǎo)致它們具有不同與一般微生物的遺傳特性、特殊結(jié)構(gòu)和生理機能，因而在冶金、采礦及生產(chǎn)特殊酶制劑方面有著巨大的應(yīng)用價值。通常在pH9～10之間的微生物，稱之為嗜堿菌（alkaliphiles）。嗜堿菌中的基因還可以用來調(diào)節(jié)其他細菌中基因產(chǎn)物的表達和分泌。 第二節(jié)一般可從以下幾個方面來進行富集。那些能分解利用的菌株因得到充足的營養(yǎng)而迅速繁殖，其他微生物則由于不能分解這些物質(zhì)，生長受到抑制。能分解利用該底物的菌類得以繁殖，而其他微生物則因得不到碳源無法生長，菌數(shù)逐漸減少。富集培養(yǎng)基為5%～6%的麥牙汁，30%～40%葡萄糖，pH3～4，在20～25℃溫度下進行培養(yǎng)，可以達到富集的目的。如以苯胺作惟一碳源對樣品進行富集培養(yǎng)，待底物完全降解后，再以一定接種量轉(zhuǎn)接到新鮮的含苯胺的富集培養(yǎng)液中，如此連續(xù)移接培養(yǎng)數(shù)次。同時錐行瓶壁上也可觀察到微生物的生長情況。二、控制培養(yǎng)條件 在篩選某些微生物時，除通過培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的選擇外，還可通過它們對pH、溫度及通氣量等其他一些條件的特殊要求加以控制培養(yǎng)，達到有效的分離目的。篩選極端微生物時，需針對其特殊的生理特性，設(shè)計適宜的培養(yǎng)條件，達到富集的目的。三、抑制不需要的菌類 在分離篩選的過程中，除了通過控制營養(yǎng)和培養(yǎng)條件，增加富集微生物的數(shù)量以有利于分離外，還可通過高溫、高壓、加入抗生素等方法減少非目的微生物的數(shù)量，使目的微生物的比例增加，同樣能夠達到富集的目的。分離厭氧菌時，可加入少量硫乙醇酸鈉作為還原劑，它能使培養(yǎng)基氧化還原電勢下降，造成缺氧環(huán)境，有利于厭氧菌的生長繁殖。分離耐高濃度酒精和高滲酵母菌時，可分別將樣品在高濃度酒精和高濃度蔗糖溶液中處理一段時間，殺死非目的微生物后再進行分離。 因此，經(jīng)過富集培養(yǎng)后的樣品，也需要進一步通過分離純化，把最需要的菌株直接從樣品中分離出來。另一類是較細的單細胞或單孢子分離方法，可達到“菌株純”或“細胞純”的水平。 土壤樣品的稀釋程度，要看樣品中的含菌數(shù)多少，一般有機質(zhì)含量高的菜園土等，樣品中含菌量大，稀釋倍數(shù)高些，反之稀釋倍數(shù)低些。 在樣品含菌量較少或某種目的微生物不多的情況下，微生物的純種分離方法可以簡化如下：第一種方法，取一支盛有3～5ml無菌水的粗試管或小三角瓶，取混勻的樣品少許（）放入其中，充分振蕩分散，用滅菌滴管取一滴土壤懸液于瓊脂平板上涂抹培養(yǎng)，或者用接種環(huán)接一環(huán)于平板上劃線培養(yǎng)。這種方法有時分離不夠充分，可用劃線法進一步純化。 在平板培養(yǎng)基中加入溶解性較差的底物，使培養(yǎng)基混濁。如要分離該酸水解酶產(chǎn)生菌，可用雙層平板法，首先在普通平板培養(yǎng)基上把懸浮液涂抹培養(yǎng)，等長出菌落后覆蓋一層營養(yǎng)瓊脂，內(nèi)含3%酵母RNA，%，于42℃左右培養(yǎng)2～4h,四周產(chǎn)生透明圈的菌落，即為核酸分解酶產(chǎn)生菌。 對于一些不易產(chǎn)生透明圈產(chǎn)物的產(chǎn)生菌，可在底物平板中加入指示劑或顯色劑，使所需微生物能被快速鑒別出來。 在進行解脂微生物的分離時，雖然有很多精確的測定方法，如酸堿滴定法、電位滴定法、濁度滴定法、甘油滴定法及色譜分析法等，但由于步驟繁瑣，不適于大規(guī)模篩選測定。后來又由Fryer等研究出一種改良的雙層法，先在平皿內(nèi)倒一層營養(yǎng)瓊脂，把一張棉紙圓片在被維多利亞藍染了色的乳脂中浸濕，鋪在已凝固的瓊脂表面，然后覆蓋一薄層含樣品的營養(yǎng)瓊脂，保溫培養(yǎng)，解脂菌落就可以在棉紙中產(chǎn)生藍帶。 通過平板上的變色圈還可以快速分