【正文】 透皮給藥過程中，隨著易揮發(fā)組分的揮發(fā)，總劑量減少，這使得PZQ在非揮發(fā)組分中的濃度維持不變甚至有所增加，能夠維持較高的給藥速率（Morgan et al., 2003）。 PZQ多組分透皮劑在臨床應(yīng)用的意義這次實驗發(fā)現(xiàn)，PZQ在1,4二氧六環(huán)二甲亞砜和四氫呋喃二甲亞砜體系的混合溶媒中溶解度可以達到200~300mg同樣的，由于PZQ和二甲亞砜、1,4二氧六環(huán)、四氫呋喃的分子結(jié)構(gòu)相差較大，且溶解性能也有較大差異，所以PZQ在這三種溶媒中的溶解度較低。用礦泉水將剪毛處涂濕，將粘有血吸蟲尾蚴的蓋玻片倒貼在剪毛處15 min，使血吸蟲尾蚴充分鉆入皮膚。 肝臟病理切片的制作及病理檢查每只家兔取肝臟左葉邊緣和右葉邊緣相同部位肝組織，大小約1 cm3各2塊，置于10%的甲醛溶液中固定48 h，并經(jīng)流水沖洗，分別依次用50%，60%，70%，80%，90%，95%乙醇溶液及無水乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟48 h，石蠟包埋。20只家兔隨機分成5組，每組4只并用苦味酸標記。 （1）其中，為100 mg即制得PH=（許曉文，2005）。在UV300分光光度計319 nm處測定吸光度。2 材料與實驗方法吡喹酮分析純韓國SHINPOONG藥物有限公司乙二醇苯醚分析純國藥集團化學(xué)試劑有限公司四氫呋喃分析純天津市化學(xué)試劑三廠二甲亞砜分析純國藥集團化學(xué)試劑有限公司油酸分析純天津市東麗區(qū)泰蘭德化學(xué)試劑廠1,2二氧六環(huán)分析純國藥集團化學(xué)試劑有限公司正辛醇分析純天津天泰精細化學(xué)品有限公司磷酸氫二鈉分析純上海新華化工廠磷酸二氫鈉分析純上海新華化工廠甲醛溶液分析純湖北大學(xué)化工廠 實驗材料新西蘭家兔 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物實驗中心陽性釘螺江蘇省血吸蟲病防治所 主要實驗儀器Nicolet evolution 300紫外可見分光光度計美國Thermo Electron公司 camera DXM1200顯微圖像分析系統(tǒng)日本尼康公司pH計（pH3C）上海雷磁儀器廠 微孔濾膜天津奧賽恩斯儀器有限公司SHAB型恒溫振蕩器常州國華電器有限公司低溫冷卻循環(huán)泵DLSB上海衛(wèi)凱儀器設(shè)備有限公司AL204型電子天平梅特勒托利多儀器（上海）有限公司 PZQ混合組分溶媒的篩選及透皮性能預(yù)測 PZQ在混合溶劑中溶解度的測定（1）飽和溶液濃度的測定方法 在試管中放一定量的溶劑和PZQ，裝上塞子，置于恒溫振蕩器，恒溫24h，使得試管底部有過量溶質(zhì)存在。吡喹酮分子具有較強的親脂性，分子量相對較小且熔點較低，根據(jù)透皮藥物分子的選擇標準，它是一種比較適合透皮給藥的候選藥物。 選題的目的與意義血吸蟲病是一種歷史悠久、在世界范圍內(nèi)廣泛傳播的寄生蟲疾病，對人類的健康造成了非常嚴重的危害，同時嚴重影響了全球的畜牧業(yè)發(fā)展。經(jīng)皮給藥能夠進一步減少藥物的用量（彭惠玲等，1991）。所以，設(shè)法使得體循環(huán)中吡喹酮的濃度增加，可能將會更好的研究該藥物的抗肉芽腫作用。灌服吡喹酮150 mg/kg，反復(fù)用藥56天，小鼠肺部血吸蟲肉芽腫直徑明顯減少，炎性細胞受到抑制（Huang, 2011）。經(jīng)核酸代謝研究認為吡喹酮可抑制蟲體核酸與蛋白質(zhì)合成，但是認為這并不是殺滅日本血吸蟲的重要環(huán)節(jié)（肖樹華等，1981b）。由于吡喹酮仍能引發(fā)一些嚴重副反應(yīng)，且反應(yīng)機制不完全清楚，所以對于伴有嚴重心律不齊或心力衰竭、晚期血吸蟲病肝臟代償功能極差、腎功能嚴重障礙等疾病的患者，一般不予用藥。一般認為在合理的使用劑量下，幾乎不會有嚴重的副作用產(chǎn)生（Xiao et al., 2010），吡喹酮的副反應(yīng)一般較輕且短暫，不影響治療的進行和日常工作，常見副反應(yīng)有： 消化系統(tǒng)反應(yīng)較輕而少，多見無定位腹痛、惡心嘔吐、腹?jié)q腹痛、食欲減弱等，偶有黃疸與便血發(fā)生。 動物實驗表明，在治療劑量下，試驗動物的神經(jīng)系統(tǒng)、心、肝等器官無病理性損害，但電生理研究表明吡喹酮對心肌細胞鈣離子內(nèi)流有影響，可以抑制Na+K+ATP酶的作用，當分次給藥時則能明顯降低毒性，提高動物半數(shù)致死量（劉一日韋等，1944）。絕大多數(shù)代謝物和葡萄糖醛酸或硫酸結(jié)合成鹽排出。 Cheng et al., 2011）。目前，促進藥物透過皮膚的主要技術(shù)如下：以可逆改變皮膚結(jié)構(gòu)為主的化學(xué)促透技術(shù)，如使用天然或合成的透皮劑促進劑；以改變藥物物理性質(zhì)為主的載體促透技術(shù)，如將藥物做成脂質(zhì)體、微乳(Chen et al., 2004)、傳遞體(Cevc et al., 1996)、醇質(zhì)體、環(huán)糊精、固態(tài)脂質(zhì)納米粒等；以高新技術(shù)導(dǎo)向為主的促透新技術(shù)，如離子導(dǎo)入、電致孔(Brown et al., 2008)、超聲（Wong et al., 2008）、激光、高壓氣體、微針陣列(Prausnitz et al., 2004)等。有的制劑成分能在穿過皮膚的過程中改變皮膚的屏障性能。例如，東莨菪堿貼劑被設(shè)計貼于耳后。 藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)影響著藥物的擴散率，這是由于細胞間質(zhì)中的極性頭部會與藥物中的氫鍵相互作用，所以，用作透皮的藥物中的氫鍵不能超過2個。 此外，親水性或水溶性好的藥物較難透過角質(zhì)層；但如果脂溶性過高的藥物，卻會在角質(zhì)層中滯留，不利于向活性表皮擴散。皮膚可以分為角質(zhì)層和活性表皮兩部分。由于第一種藥物透過方式的阻力較大，因此藥物主要通過角質(zhì)層細胞間隙透過角質(zhì)層。同時，隨著各種新透皮技術(shù)的不斷開發(fā)，多種大分子都有可能透過皮膚進入人體，如蛋白質(zhì)、多肽, 乃至基因片段（Babiuk, 2000）。而后硝酸甘油、可樂定、硝異梨酯、雌二醇、炔諾酮、芬太尼、煙堿和睪酮貼片相繼上市，僅這幾類制劑在美國市場的年銷售額就已超過30 億美元（Langer, 2004），發(fā)展?jié)摿薮蟆Ｇ噍锼厥菑淖跃湛浦参稂S花蒿（Artemisia annua L.）中提取分離的倍半萜內(nèi)酯，80年代我國學(xué)者發(fā)現(xiàn)青蒿素及其衍生物（蒿甲醚和青蒿琥酯）具有抗血吸蟲童蟲的作用。奧沙尼喹口服副反應(yīng)程度較輕，出現(xiàn)頭暈、嗜睡、惡心、嘔吐等，一般幾小時內(nèi)可自行消失，半數(shù)患者無任何反應(yīng)。 歷史上出現(xiàn)的銻制劑抗血吸蟲藥物出現(xiàn)過酒石酸銻鉀（鈉）、沒食子酸銻鈉（銻273）、銻酚等。(鄭江等,2003)。在我國除了人類，日本血吸蟲病的終宿主還有將近40種，尤其以耕牛為主。然而，2010年統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)全國有釘螺面積為37 hm2，比去年增加1 hm2；，基本上分布于安徽、湖南和湖北等地區(qū)（雷正龍等，2010)。發(fā)熱是該病重要的癥狀，發(fā)熱期間，多出現(xiàn)食欲減退、腹瀉、惡心等消化道疾病，此外還會出現(xiàn)一系列的 過敏性反應(yīng)。隨后蟲卵周圍產(chǎn)生肉芽組織層，其中除淋巴細胞，大單核細胞外，常出現(xiàn)一定數(shù)量的漿細胞。最主要的損傷器官是肝臟與腸管。尾蚴及童蟲所致病變：血吸蟲尾蚴鉆進皮膚后數(shù)小時至12日，可引起尾蚴性皮炎。 日本血吸蟲成蟲寄生于人或哺乳動物的血管中，成熟雌雄蟲合抱交配，在腸壁的小血管中產(chǎn)卵，雌蟲每天產(chǎn)卵2000~3000個，這些蟲卵在腸壁血管內(nèi)發(fā)育成熟。血吸蟲病嚴重破壞人體重要的內(nèi)臟器官，打破機體的代謝平衡，患者喪失勞動力，對人體產(chǎn)生非常嚴重的危害，如果放任其發(fā)展，最終將導(dǎo)致患者死亡。 mechanism of action縮略語表 縮寫符號 英文名 中文名 PZQ Praziquantel 吡喹酮 EGPE Ethylene glycol phenyl ether 乙二醇苯醚 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲亞砜 THF Tetrahydrofuran 四氫呋喃 OA Oleic acid 油酸 TDDS Transdermal drug delivery system 透皮給藥系統(tǒng)1 前言 日本血吸蟲病及防治現(xiàn)狀血吸蟲?。╯chistosomiasis）是一種嚴重危害人類、牛羊等哺乳動物健康的寄生蟲病。試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，二甲亞砜1,4二氧六環(huán)和二甲亞砜四氫呋喃體系具有進一步研究的價值。血吸蟲病之所以危害嚴重，是由于血吸蟲卵在動物的肝、腸等器官引發(fā)肉芽腫，肝內(nèi)肉芽腫最終發(fā)展為肝纖維化、肝硬化，引起宿主死亡。血吸蟲病治療試驗發(fā)現(xiàn)，吡喹酮透皮給藥能夠使實驗動物肝臟上蟲卵肉芽腫數(shù)目、體積減少率分別達到80%、50%以上。 schistosome egg granuloma。這三種血吸蟲病流行的區(qū)域也不一樣，血吸蟲大部分流行于亞洲東部和西部、中東、非洲、中南美洲等地區(qū)。原始吸蟲不僅在螺類宿主消化道內(nèi)可以生存，發(fā)育，甚至進行有性生殖，并且出現(xiàn)了第二宿主或者第三宿主。血吸蟲成蟲在宿主體內(nèi)一般存活2～5年。血吸蟲蟲卵所致病變：血吸蟲肉芽腫的形成是可溶性抗原誘導(dǎo)、T細胞介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)。急性蟲卵結(jié)節(jié)呈黃白色，～4mm直徑大小的結(jié)節(jié)，中央蟲卵數(shù)1至幾十個不等。比如，感染較輕的人群可能不會出現(xiàn)癥狀，重度感染可以引起患者急性血吸蟲病，治療不及時可最終發(fā)展為晚期血吸蟲病，出現(xiàn)肝臟纖維化、腹水或者上消化道出血等。 我國血吸蟲病疫情現(xiàn)狀 血吸蟲病流行于長江流域以南的江浙滬、兩湖兩廣等共12個省、市、自治區(qū)。此外，退耕還湖，平垸行洪，使得一些地區(qū)重新變?yōu)槁輩^(qū)。由于血吸蟲防治的歷史遺留問題，我國缺乏高效有序的血防機構(gòu)進行組織管理。然而存在諸多的原因，如血吸蟲存在多種免疫逃避、動物模型與人免疫機制的差異、抗原的提純與分離困難，具有較好穩(wěn)定保護力的疫苗一直未被開發(fā)（李東等，2011），研發(fā)出的疫苗離臨床治療所需的要求還有較大差距，到目前為止還未研究出有實用價值的獸用或人用血吸蟲疫苗，但世界各國科學(xué)家仍未放棄努力，血吸蟲疫苗的研制任重道遠。呋喃丙胺副作用較多且發(fā)病率個體差異較大，男性多于女性，成人多于兒童，藥物副反應(yīng)的頻率和強度與給藥劑量也有關(guān)系。 吡喹酮（PZQ）是由聯(lián)邦德國EMerck和Bayer兩家藥廠于1972年合成的廣譜抗蠕蟲藥物，國內(nèi)1977年合成并應(yīng)用于血吸蟲病臨床試驗，該藥不僅對多種人體寄生蟲如血吸蟲、華支睪吸蟲、姜片吸蟲、絳蟲的成蟲及其幼蟲有顯著的殺滅作用，而且對埃及、曼式和日本血吸蟲均有很強的殺滅作用。 傳統(tǒng)的皮膚用藥僅用來治療局部皮膚疾病，過去認為藥物難以透過皮膚角質(zhì)層以達到全身治療的目的。TTDS的研究已擴展到更多的研究領(lǐng)域，如帕金森病，注意力缺乏，多動癥等。 透皮給藥的過程（1）藥物經(jīng)皮轉(zhuǎn)運的途徑 皮膚是一道天然的保護屏障，用于抵御外來的有害物質(zhì)入侵機體和體液的過度蒸發(fā)，同樣的，皮膚的屏障作用也使得普通的藥物不能順利地透過皮膚進入生物體內(nèi)。在整個滲透過程中，富含類脂的角質(zhì)層是主要的障礙，對于一些水溶性大分子、離子型藥物和多功能團極性物質(zhì)，較難通過角質(zhì)層，附屬器途徑是此類藥物吸收的重要途徑。透皮給藥系統(tǒng)中的藥物由給藥系統(tǒng)進入皮膚的過程如圖13（周建平，2008），首先，藥物從系統(tǒng)中擴散至角質(zhì)層，后繼續(xù)擴散，部分藥物會和角質(zhì)層結(jié)合形成藥物儲庫；其余藥物繼續(xù)擴散到活性表皮，藥物可結(jié)合于該層皮膚的受體，表皮內(nèi)的酶也可能對藥物有代謝作用；藥物繼續(xù)深入真皮層并被毛細血管吸收進入體循環(huán)，在真皮內(nèi)也可能形成藥物儲庫或者被酶代謝。所以分子量過大的藥物需要采取輔助技術(shù)使皮膚擴張到足夠的空隙，才能透過皮膚。女性皮膚較之男性薄，理論上透皮給藥吸收更好。當皮膚病變時，藥物的經(jīng)皮吸收也會發(fā)生改變，如牛皮蘚、濕疹患者皮膚的透過性增加，燙傷、有炎癥的皮膚時藥物吸收速率也加快。比如：凝膠劑、乳膠劑軟膏中藥物吸收速度快于骨架型貼片中藥物吸收速度。系統(tǒng)化學(xué)全名為2環(huán)己基甲酰基1, 2, 3, 6, 7, 11b六氫4H吡嗪并[2, 1α]異喹啉4酮，結(jié)構(gòu)式如下：其中，吡喹酮有一個手性碳原子，應(yīng)有兩個旋光異構(gòu)體，目前市場上銷售的都是外消旋體。吡喹酮無器官特異性蓄積現(xiàn)象，多次給藥，只有肝、腎中含量有所增加。動物與人對吡喹酮的耐受性良好。但是二者病變性質(zhì)相同都為可逆性改變（褚連仲等，1983）。一般經(jīng)抗過敏處理，212天消失。(肖樹華等，1981a)。一般認為吡喹酮殺死宿主內(nèi)的血吸成蟲，阻斷了新蟲卵的排放，停止免疫反應(yīng)作用, 最終早期蟲卵肉芽腫逐漸消退，機體恢復(fù)正常的免疫功能的。如果要完全或局部除去這些寄生蟲則需要將其暴露在更高濃度的藥物中更長一段時間（Andrews et al, 1983。因此研究吡喹酮透皮劑具有重要的實際意義（李小紅，2012）。王在華應(yīng)用吡喹酮透皮劑對動物日本血吸蟲病進行系列治療研究，篩選出代號8604213的4% 吡喹酮透皮劑減蟲率（%）最佳。透皮給藥與傳統(tǒng)的口服給藥相比，有著更高的血藥濃度并可持續(xù)相對長的時間，更有利于吡喹酮對肉芽腫的直接作用和調(diào)動宿主的免疫功能，消退蟲卵肉芽腫。 多組分的透皮劑對藥物的滲透能夠達到協(xié)同促進的作用，目前研制的透皮促進劑大部分采用多組分體系（司紅彬，2007）。 PZQ在水油兩相溶液間分配系數(shù)的測定（1）工作曲線的繪制準確稱取PZQ適量，加正辛醇溶解后，定量移至50mL容量瓶中，定容，制得112230mg2H2O ，置于燒杯中，加蒸餾水攪拌溶解，移至50 mL容量瓶，加蒸餾水至刻度，定容。mL