【正文】 透皮給藥過(guò)程中，隨著易揮發(fā)組分的揮發(fā)，總劑量減少，這使得PZQ在非揮發(fā)組分中的濃度維持不變甚至有所增加，能夠維持較高的給藥速率（Morgan et al., 2003）。 PZQ多組分透皮劑在臨床應(yīng)用的意義這次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，PZQ在1,4二氧六環(huán)二甲亞砜和四氫呋喃二甲亞砜體系的混合溶媒中溶解度可以達(dá)到200~300mg同樣的，由于PZQ和二甲亞砜、1,4二氧六環(huán)、四氫呋喃的分子結(jié)構(gòu)相差較大，且溶解性能也有較大差異，所以PZQ在這三種溶媒中的溶解度較低。用礦泉水將剪毛處涂濕，將粘有血吸蟲尾蚴的蓋玻片倒貼在剪毛處15 min，使血吸蟲尾蚴充分鉆入皮膚。 肝臟病理切片的制作及病理檢查每只家兔取肝臟左葉邊緣和右葉邊緣相同部位肝組織，大小約1 cm3各2塊，置于10%的甲醛溶液中固定48 h，并經(jīng)流水沖洗，分別依次用50%，60%，70%，80%，90%，95%乙醇溶液及無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟48 h，石蠟包埋。20只家兔隨機(jī)分成5組，每組4只并用苦味酸標(biāo)記。 （1）其中，為100 mg即制得PH=（許曉文，2005）。在UV300分光光度計(jì)319 nm處測(cè)定吸光度。2 材料與實(shí)驗(yàn)方法吡喹酮分析純韓國(guó)SHINPOONG藥物有限公司乙二醇苯醚分析純國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司四氫呋喃分析純天津市化學(xué)試劑三廠二甲亞砜分析純國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司油酸分析純天津市東麗區(qū)泰蘭德化學(xué)試劑廠1,2二氧六環(huán)分析純國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司正辛醇分析純天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司磷酸氫二鈉分析純上海新華化工廠磷酸二氫鈉分析純上海新華化工廠甲醛溶液分析純湖北大學(xué)化工廠 實(shí)驗(yàn)材料新西蘭家兔 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心陽(yáng)性釘螺江蘇省血吸蟲病防治所 主要實(shí)驗(yàn)儀器Nicolet evolution 300紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)美國(guó)Thermo Electron公司 camera DXM1200顯微圖像分析系統(tǒng)日本尼康公司pH計(jì)（pH3C）上海雷磁儀器廠 微孔濾膜天津奧賽恩斯儀器有限公司SHAB型恒溫振蕩器常州國(guó)華電器有限公司低溫冷卻循環(huán)泵DLSB上海衛(wèi)凱儀器設(shè)備有限公司AL204型電子天平梅特勒托利多儀器（上海）有限公司 PZQ混合組分溶媒的篩選及透皮性能預(yù)測(cè) PZQ在混合溶劑中溶解度的測(cè)定（1）飽和溶液濃度的測(cè)定方法 在試管中放一定量的溶劑和PZQ，裝上塞子，置于恒溫振蕩器，恒溫24h，使得試管底部有過(guò)量溶質(zhì)存在。吡喹酮分子具有較強(qiáng)的親脂性，分子量相對(duì)較小且熔點(diǎn)較低，根據(jù)透皮藥物分子的選擇標(biāo)準(zhǔn)，它是一種比較適合透皮給藥的候選藥物。 選題的目的與意義血吸蟲病是一種歷史悠久、在世界范圍內(nèi)廣泛傳播的寄生蟲疾病，對(duì)人類的健康造成了非常嚴(yán)重的危害，同時(shí)嚴(yán)重影響了全球的畜牧業(yè)發(fā)展。經(jīng)皮給藥能夠進(jìn)一步減少藥物的用量（彭惠玲等，1991）。所以，設(shè)法使得體循環(huán)中吡喹酮的濃度增加，可能將會(huì)更好的研究該藥物的抗肉芽腫作用。灌服吡喹酮150 mg/kg，反復(fù)用藥56天，小鼠肺部血吸蟲肉芽腫直徑明顯減少，炎性細(xì)胞受到抑制（Huang, 2011）。經(jīng)核酸代謝研究認(rèn)為吡喹酮可抑制蟲體核酸與蛋白質(zhì)合成，但是認(rèn)為這并不是殺滅日本血吸蟲的重要環(huán)節(jié)（肖樹(shù)華等，1981b）。由于吡喹酮仍能引發(fā)一些嚴(yán)重副反應(yīng)，且反應(yīng)機(jī)制不完全清楚，所以對(duì)于伴有嚴(yán)重心律不齊或心力衰竭、晚期血吸蟲病肝臟代償功能極差、腎功能嚴(yán)重障礙等疾病的患者，一般不予用藥。一般認(rèn)為在合理的使用劑量下，幾乎不會(huì)有嚴(yán)重的副作用產(chǎn)生（Xiao et al., 2010），吡喹酮的副反應(yīng)一般較輕且短暫，不影響治療的進(jìn)行和日常工作，常見(jiàn)副反應(yīng)有： 消化系統(tǒng)反應(yīng)較輕而少，多見(jiàn)無(wú)定位腹痛、惡心嘔吐、腹?jié)q腹痛、食欲減弱等，偶有黃疸與便血發(fā)生。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，在治療劑量下，試驗(yàn)動(dòng)物的神經(jīng)系統(tǒng)、心、肝等器官無(wú)病理性損害，但電生理研究表明吡喹酮對(duì)心肌細(xì)胞鈣離子內(nèi)流有影響，可以抑制Na+K+ATP酶的作用，當(dāng)分次給藥時(shí)則能明顯降低毒性，提高動(dòng)物半數(shù)致死量（劉一日韋等，1944）。絕大多數(shù)代謝物和葡萄糖醛酸或硫酸結(jié)合成鹽排出。 Cheng et al., 2011）。目前，促進(jìn)藥物透過(guò)皮膚的主要技術(shù)如下：以可逆改變皮膚結(jié)構(gòu)為主的化學(xué)促透技術(shù)，如使用天然或合成的透皮劑促進(jìn)劑；以改變藥物物理性質(zhì)為主的載體促透技術(shù)，如將藥物做成脂質(zhì)體、微乳(Chen et al., 2004)、傳遞體(Cevc et al., 1996)、醇質(zhì)體、環(huán)糊精、固態(tài)脂質(zhì)納米粒等；以高新技術(shù)導(dǎo)向?yàn)橹鞯拇偻感录夹g(shù)，如離子導(dǎo)入、電致孔(Brown et al., 2008)、超聲（Wong et al., 2008）、激光、高壓氣體、微針陣列(Prausnitz et al., 2004)等。有的制劑成分能在穿過(guò)皮膚的過(guò)程中改變皮膚的屏障性能。例如，東莨菪堿貼劑被設(shè)計(jì)貼于耳后。 藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)影響著藥物的擴(kuò)散率，這是由于細(xì)胞間質(zhì)中的極性頭部會(huì)與藥物中的氫鍵相互作用，所以，用作透皮的藥物中的氫鍵不能超過(guò)2個(gè)。 此外，親水性或水溶性好的藥物較難透過(guò)角質(zhì)層；但如果脂溶性過(guò)高的藥物，卻會(huì)在角質(zhì)層中滯留，不利于向活性表皮擴(kuò)散。皮膚可以分為角質(zhì)層和活性表皮兩部分。由于第一種藥物透過(guò)方式的阻力較大，因此藥物主要通過(guò)角質(zhì)層細(xì)胞間隙透過(guò)角質(zhì)層。同時(shí)，隨著各種新透皮技術(shù)的不斷開(kāi)發(fā)，多種大分子都有可能透過(guò)皮膚進(jìn)入人體，如蛋白質(zhì)、多肽, 乃至基因片段（Babiuk, 2000）。而后硝酸甘油、可樂(lè)定、硝異梨酯、雌二醇、炔諾酮、芬太尼、煙堿和睪酮貼片相繼上市，僅這幾類制劑在美國(guó)市場(chǎng)的年銷售額就已超過(guò)30 億美元（Langer, 2004），發(fā)展?jié)摿薮?。青蒿素是從自菊科植物黃花蒿（Artemisia annua L.）中提取分離的倍半萜內(nèi)酯，80年代我國(guó)學(xué)者發(fā)現(xiàn)青蒿素及其衍生物（蒿甲醚和青蒿琥酯）具有抗血吸蟲童蟲的作用。奧沙尼喹口服副反應(yīng)程度較輕，出現(xiàn)頭暈、嗜睡、惡心、嘔吐等，一般幾小時(shí)內(nèi)可自行消失，半數(shù)患者無(wú)任何反應(yīng)。 歷史上出現(xiàn)的銻制劑抗血吸蟲藥物出現(xiàn)過(guò)酒石酸銻鉀（鈉）、沒(méi)食子酸銻鈉（銻273）、銻酚等。(鄭江等,2003)。在我國(guó)除了人類，日本血吸蟲病的終宿主還有將近40種，尤其以耕牛為主。然而，2010年統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)全國(guó)有釘螺面積為37 hm2，比去年增加1 hm2；，基本上分布于安徽、湖南和湖北等地區(qū)（雷正龍等，2010)。發(fā)熱是該病重要的癥狀，發(fā)熱期間，多出現(xiàn)食欲減退、腹瀉、惡心等消化道疾病，此外還會(huì)出現(xiàn)一系列的 過(guò)敏性反應(yīng)。隨后蟲卵周圍產(chǎn)生肉芽組織層，其中除淋巴細(xì)胞，大單核細(xì)胞外，常出現(xiàn)一定數(shù)量的漿細(xì)胞。最主要的損傷器官是肝臟與腸管。尾蚴及童蟲所致病變：血吸蟲尾蚴鉆進(jìn)皮膚后數(shù)小時(shí)至12日，可引起尾蚴性皮炎。 日本血吸蟲成蟲寄生于人或哺乳動(dòng)物的血管中，成熟雌雄蟲合抱交配，在腸壁的小血管中產(chǎn)卵，雌蟲每天產(chǎn)卵2000~3000個(gè)，這些蟲卵在腸壁血管內(nèi)發(fā)育成熟。血吸蟲病嚴(yán)重破壞人體重要的內(nèi)臟器官，打破機(jī)體的代謝平衡，患者喪失勞動(dòng)力，對(duì)人體產(chǎn)生非常嚴(yán)重的危害，如果放任其發(fā)展，最終將導(dǎo)致患者死亡。 mechanism of action縮略語(yǔ)表 縮寫符號(hào) 英文名 中文名 PZQ Praziquantel 吡喹酮 EGPE Ethylene glycol phenyl ether 乙二醇苯醚 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲亞砜 THF Tetrahydrofuran 四氫呋喃 OA Oleic acid 油酸 TDDS Transdermal drug delivery system 透皮給藥系統(tǒng)1 前言 日本血吸蟲病及防治現(xiàn)狀血吸蟲?。╯chistosomiasis）是一種嚴(yán)重危害人類、牛羊等哺乳動(dòng)物健康的寄生蟲病。試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，二甲亞砜1,4二氧六環(huán)和二甲亞砜四氫呋喃體系具有進(jìn)一步研究的價(jià)值。血吸蟲病之所以危害嚴(yán)重，是由于血吸蟲卵在動(dòng)物的肝、腸等器官引發(fā)肉芽腫，肝內(nèi)肉芽腫最終發(fā)展為肝纖維化、肝硬化，引起宿主死亡。血吸蟲病治療試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，吡喹酮透皮給藥能夠使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝臟上蟲卵肉芽腫數(shù)目、體積減少率分別達(dá)到80%、50%以上。 schistosome egg granuloma。這三種血吸蟲病流行的區(qū)域也不一樣，血吸蟲大部分流行于亞洲東部和西部、中東、非洲、中南美洲等地區(qū)。原始吸蟲不僅在螺類宿主消化道內(nèi)可以生存，發(fā)育，甚至進(jìn)行有性生殖，并且出現(xiàn)了第二宿主或者第三宿主。血吸蟲成蟲在宿主體內(nèi)一般存活2～5年。血吸蟲蟲卵所致病變：血吸蟲肉芽腫的形成是可溶性抗原誘導(dǎo)、T細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)。急性蟲卵結(jié)節(jié)呈黃白色，～4mm直徑大小的結(jié)節(jié)，中央蟲卵數(shù)1至幾十個(gè)不等。比如，感染較輕的人群可能不會(huì)出現(xiàn)癥狀，重度感染可以引起患者急性血吸蟲病，治療不及時(shí)可最終發(fā)展為晚期血吸蟲病，出現(xiàn)肝臟纖維化、腹水或者上消化道出血等。 我國(guó)血吸蟲病疫情現(xiàn)狀 血吸蟲病流行于長(zhǎng)江流域以南的江浙滬、兩湖兩廣等共12個(gè)省、市、自治區(qū)。此外，退耕還湖，平垸行洪，使得一些地區(qū)重新變?yōu)槁輩^(qū)。由于血吸蟲防治的歷史遺留問(wèn)題，我國(guó)缺乏高效有序的血防機(jī)構(gòu)進(jìn)行組織管理。然而存在諸多的原因，如血吸蟲存在多種免疫逃避、動(dòng)物模型與人免疫機(jī)制的差異、抗原的提純與分離困難，具有較好穩(wěn)定保護(hù)力的疫苗一直未被開(kāi)發(fā)（李東等，2011），研發(fā)出的疫苗離臨床治療所需的要求還有較大差距，到目前為止還未研究出有實(shí)用價(jià)值的獸用或人用血吸蟲疫苗，但世界各國(guó)科學(xué)家仍未放棄努力，血吸蟲疫苗的研制任重道遠(yuǎn)。呋喃丙胺副作用較多且發(fā)病率個(gè)體差異較大，男性多于女性，成人多于兒童，藥物副反應(yīng)的頻率和強(qiáng)度與給藥劑量也有關(guān)系。 吡喹酮（PZQ）是由聯(lián)邦德國(guó)EMerck和Bayer兩家藥廠于1972年合成的廣譜抗蠕蟲藥物，國(guó)內(nèi)1977年合成并應(yīng)用于血吸蟲病臨床試驗(yàn)，該藥不僅對(duì)多種人體寄生蟲如血吸蟲、華支睪吸蟲、姜片吸蟲、絳蟲的成蟲及其幼蟲有顯著的殺滅作用，而且對(duì)埃及、曼式和日本血吸蟲均有很強(qiáng)的殺滅作用。 傳統(tǒng)的皮膚用藥僅用來(lái)治療局部皮膚疾病，過(guò)去認(rèn)為藥物難以透過(guò)皮膚角質(zhì)層以達(dá)到全身治療的目的。TTDS的研究已擴(kuò)展到更多的研究領(lǐng)域，如帕金森病，注意力缺乏，多動(dòng)癥等。 透皮給藥的過(guò)程（1）藥物經(jīng)皮轉(zhuǎn)運(yùn)的途徑 皮膚是一道天然的保護(hù)屏障，用于抵御外來(lái)的有害物質(zhì)入侵機(jī)體和體液的過(guò)度蒸發(fā)，同樣的，皮膚的屏障作用也使得普通的藥物不能順利地透過(guò)皮膚進(jìn)入生物體內(nèi)。在整個(gè)滲透過(guò)程中，富含類脂的角質(zhì)層是主要的障礙，對(duì)于一些水溶性大分子、離子型藥物和多功能團(tuán)極性物質(zhì)，較難通過(guò)角質(zhì)層，附屬器途徑是此類藥物吸收的重要途徑。透皮給藥系統(tǒng)中的藥物由給藥系統(tǒng)進(jìn)入皮膚的過(guò)程如圖13（周建平，2008），首先，藥物從系統(tǒng)中擴(kuò)散至角質(zhì)層，后繼續(xù)擴(kuò)散，部分藥物會(huì)和角質(zhì)層結(jié)合形成藥物儲(chǔ)庫(kù)；其余藥物繼續(xù)擴(kuò)散到活性表皮，藥物可結(jié)合于該層皮膚的受體，表皮內(nèi)的酶也可能對(duì)藥物有代謝作用；藥物繼續(xù)深入真皮層并被毛細(xì)血管吸收進(jìn)入體循環(huán)，在真皮內(nèi)也可能形成藥物儲(chǔ)庫(kù)或者被酶代謝。所以分子量過(guò)大的藥物需要采取輔助技術(shù)使皮膚擴(kuò)張到足夠的空隙，才能透過(guò)皮膚。女性皮膚較之男性薄，理論上透皮給藥吸收更好。當(dāng)皮膚病變時(shí)，藥物的經(jīng)皮吸收也會(huì)發(fā)生改變，如牛皮蘚、濕疹患者皮膚的透過(guò)性增加，燙傷、有炎癥的皮膚時(shí)藥物吸收速率也加快。比如：凝膠劑、乳膠劑軟膏中藥物吸收速度快于骨架型貼片中藥物吸收速度。系統(tǒng)化學(xué)全名為2環(huán)己基甲酰基1, 2, 3, 6, 7, 11b六氫4H吡嗪并[2, 1α]異喹啉4酮，結(jié)構(gòu)式如下：其中，吡喹酮有一個(gè)手性碳原子，應(yīng)有兩個(gè)旋光異構(gòu)體，目前市場(chǎng)上銷售的都是外消旋體。吡喹酮無(wú)器官特異性蓄積現(xiàn)象，多次給藥，只有肝、腎中含量有所增加。動(dòng)物與人對(duì)吡喹酮的耐受性良好。但是二者病變性質(zhì)相同都為可逆性改變（褚連仲等，1983）。一般經(jīng)抗過(guò)敏處理，212天消失。(肖樹(shù)華等，1981a)。一般認(rèn)為吡喹酮?dú)⑺浪拗鲀?nèi)的血吸成蟲，阻斷了新蟲卵的排放，停止免疫反應(yīng)作用, 最終早期蟲卵肉芽腫逐漸消退，機(jī)體恢復(fù)正常的免疫功能的。如果要完全或局部除去這些寄生蟲則需要將其暴露在更高濃度的藥物中更長(zhǎng)一段時(shí)間（Andrews et al, 1983。因此研究吡喹酮透皮劑具有重要的實(shí)際意義（李小紅，2012）。王在華應(yīng)用吡喹酮透皮劑對(duì)動(dòng)物日本血吸蟲病進(jìn)行系列治療研究，篩選出代號(hào)8604213的4% 吡喹酮透皮劑減蟲率（%）最佳。透皮給藥與傳統(tǒng)的口服給藥相比，有著更高的血藥濃度并可持續(xù)相對(duì)長(zhǎng)的時(shí)間，更有利于吡喹酮對(duì)肉芽腫的直接作用和調(diào)動(dòng)宿主的免疫功能，消退蟲卵肉芽腫。 多組分的透皮劑對(duì)藥物的滲透能夠達(dá)到協(xié)同促進(jìn)的作用，目前研制的透皮促進(jìn)劑大部分采用多組分體系（司紅彬，2007）。 PZQ在水油兩相溶液間分配系數(shù)的測(cè)定（1）工作曲線的繪制準(zhǔn)確稱取PZQ適量，加正辛醇溶解后，定量移至50mL容量瓶中，定容，制得112230mg2H2O ，置于燒杯中，加蒸餾水?dāng)嚢枞芙?，移?0 mL容量瓶，加蒸餾水至刻度，定容。mL