【正文】 （七）滅蠅：可用5%氯氰菊酯（奮斗吶）、%溴氰菊酯或其他殺蟲劑，按說明書使用。（二）只需要對經(jīng)常接觸的物體表面（如門把手、課桌椅、餐桌、嬰兒床欄桿、樓梯把手等）、玩具、游樂設(shè)施、寢具及書本等做重點性消毒。在與患者接觸后，觸摸眼、口、鼻前，打噴嚏或咳嗽后，如廁后，帶口罩前及摘口罩后，接觸公共設(shè)施如扶手、門柄、電梯按鈕、公共電話后、從外面回家后等均應(yīng)及時洗手。預(yù)后：痊愈/好轉(zhuǎn)/未愈/死亡/其他 ；后遺癥（有， ；無）三、臨床情況（一）臨床癥狀 如有請打“√”發(fā)熱（有， ℃/ 無）； 皮疹（有，主要部位： / 無）口腔炎：口腔粘膜上出現(xiàn)紅色潰瘍型皰疹 是 □ 否 □呼吸系統(tǒng)：流涕 □ 咳嗽 □ 咽痛 □ 其他：__________________________消化系統(tǒng)： 惡心 □ 嘔吐 □ 腹痛 □ 腹瀉 □ 其他：_______________神經(jīng)系統(tǒng)：頭痛□ 噴射狀嘔吐□ 精神異?！?嗜睡□ 意識障礙□ 昏迷□ 驚厥□心血管系統(tǒng)：心律失常：有 □ 無 □（二）體征頸項強直：有 □ 無 □； 巴氏癥：有 □ 無 □；克氏癥：有 □ 無 □； 布氏癥：有 □ 無 □腱反射： 正常 □ 亢進 □ 減弱 □；肌張力：正常 □ 亢進 □ 減弱 □（三）輔助檢查血象：有，無。如果儲存在避光的容器中，溴化乙錠溶液可以重復(fù)使用；7）在蒸餾水中涮一下凝膠；8）在紫外透射儀下觀察PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果，并照相作記錄。RNA酶抑制劑（RNasin,40U/μl）A：陽性對照：無感染性的對照RNA。A1A2孔（B1BC1CD1DE1EF1FG1GH1H2）中每孔加入1:，不必換吸尖，在A3A4孔（B3BC3CD3DE3EF3FG3GH3H4）中每孔加入1:，A5A6孔（B5BC5CD5DE5EF5FG5GH5H6）中每孔加入1:，A7A8孔（B7BC7CD7DE7EF7FG17GH7H8）中每孔加入1:，A9A10孔（B9BC9CD9DE9EF9FG9GH9H10）中每孔加入1:，A11A12孔（B11B1C11C1D11D1E11E1F11F1G11G1H11H12）為每份待測血清對照孔，；（2）（病毒滴度事先已經(jīng)稀釋為100 CCID50/）；（3）蓋好蓋子后用微量板混勻器混勻，放入36℃ CO2孵箱中孵育2h；（4）另取一塊96孔板縱向使用，做100 CCID50/（每次實驗都必須做）。3．稀釋血清（1）發(fā)病1~3d內(nèi)采取患者急性期血清，發(fā)病后2~4周采取恢復(fù)期血清，分別－20℃凍存?zhèn)錂z。但是，不明顯的腸道病毒感染（隱性感染）也很常見，所以在評估檢測結(jié)果時就要小心一些。5．病毒分離結(jié)果解釋：RD細胞支持HFMD的主要病原體——CA16和EV71的復(fù)制，CA16和EV71均能在RD細胞培養(yǎng)中引起特殊的腸道病毒致細胞病變效應(yīng)（CPE），表現(xiàn)為細胞圓縮、分散、胞漿內(nèi)顆粒增加，最后細胞自管壁脫落。這些已接種標本的試管應(yīng)在－20℃凍存，（此時是第二代）。 3+, 50%~75%。 HEp2細胞，來源于人喉癌上皮細胞。為了保證檢測結(jié)果的準確性和有效性，標本應(yīng)在病例發(fā)病后盡早采集，盡快檢測。采集時間為出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀后3天內(nèi)，~。用專用采樣棉簽，適度用力拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位，應(yīng)避免觸及舌部；迅速將棉簽放入裝有3~5ml保存液（維持液或生理鹽水，推薦使用維持液）的采樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封，以防干燥。一、標本采集對象標本采集對象是暴發(fā)疫情出現(xiàn)時手足口病的臨床診斷病例和病例發(fā)病所在社區(qū)（村）的臨近無病例的社區(qū)（村）或托幼機構(gòu)的5歲以下的兒童（作為健康對照人群）。但是，無癥狀的腸道病毒感染也是常見的，所以對檢測結(jié)果的解釋要慎重一些。病毒分離成功后，送至國家參比實驗室進行鑒定或復(fù)核，同時對全國手足口病的病原進行病毒學(xué)監(jiān)測。下呼吸道標本氣管插管時采集采集呼吸道抽取物或分泌物同上詳見表下注。漱口液入院后立即采集10ml不含抗菌素的采樣液漱口，無菌螺口塑料管收集同上詳見表下注。采樣人： 采樣單位： 送樣人： 附件3手足口病實驗室檢測方案（試行）為規(guī)范手足口病的標本采集、運送及實驗室檢測操作程序，提高檢測準確性，從而為手足口病的明確診斷和相關(guān)實驗研究提供可靠的依據(jù)，特制定本方案。因為腸道病毒包括若干個血清型，通常使用組合抗血清進行鑒定，有些組合抗血清已經(jīng)商品化。對于難以分離到的腸道病毒，分子生物學(xué)方法如RTPCR是很有用的。二、標本種類及采集、運送（一）糞便標本采集病人發(fā)病7日內(nèi)的糞便標本，用于病原檢測。先用75%的酒精對皰疹周圍的皮膚進行消毒，然后用消毒針將皰疹挑破用棉簽蘸取皰疹液，迅速將棉簽放入內(nèi)裝有3~5ml保存液（維持液或生理鹽水，推薦使用維持液）的采樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封。三、標本采集注意事項在手足口病的實驗室診斷中，從皰疹液或腦脊液中分離病毒具有很高的診斷價值，但對于不同血清型的腸道病毒，腦脊液中的病毒分離率是大不相同的。對于檢測手足口病的病原來說，建議所有懷疑含EV7CA16的標本均需接種到以下兩種細胞系：216。4．接種和觀察（病毒分離）（1）顯微鏡下觀察單層細胞，以確保細胞是健康的。（注意：同一病例標本的細胞培養(yǎng)物不能混在一起再傳代，例如：不同細胞的培養(yǎng)物應(yīng)單獨傳代）；（12）盲傳2代后，仍然沒有出現(xiàn)CPE的，則判定為陰性；（13）注意：如果接種后24h內(nèi)出現(xiàn)CPE，很可能是標本中的非特異性成分導(dǎo)致的毒性反應(yīng)。 C：盲傳：有時一周之后傳代細胞會老化，甚至細胞對照也出現(xiàn)了病變。從有上述臨床癥狀群患者的咽拭子或糞便中重復(fù)分離到同一型病毒，且從周圍患同樣疾病者中也檢出相同的病毒，且病毒分離率遠高于正常人群，則有診斷的參考價值。1．液體配制A液：血清處理液：（100ml中含下列液體） MEM 85ml 3% L谷氨酰胺 1ml %碳酸氫鈉 2ml 胎牛血清 2ml 青、鏈霉素（各10000U/ml） 10mlB液：細胞營養(yǎng)液：（按生長液配方配制，100ml中含下列液體） MEM 85ml 3% L谷氨酰胺 1ml %碳酸氫鈉 2ml HEPES 1ml 胎牛血清 10ml 青、鏈霉素（各10000U/ml） 1ml C液：病毒（血清）稀釋液：（按維持液配方配制，100ml中含下列液體） MEM 93ml 3% L谷氨酰胺 1ml %碳酸氫鈉 2ml HEPES 1ml