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氨基酸的離子交換柱色譜分離實驗教案-免費閱讀

2025-07-01 19:56 上一頁面

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【正文】 【數(shù)據(jù)處理】以光吸收值為縱坐標,洗脫管號(洗脫體積)為橫坐標繪制氨基酸色譜圖。加樣后打開止水夾,使液緩慢流出至凹液面與樹脂上表面約距1mm ,立即關(guān)閉止水夾。注意:裝好的柱要求連續(xù)、均勻,無紋格、無氣泡,表面平整,否則倒回燒杯,重新裝柱。用4倍體積的2mol/L的鹽酸浸泡1小時,傾去清液,洗至中性。在pH12條件下,因pH高于Lys的pI值,Lys又解離為陰離子從樹脂上被交換下來,這樣通過改變洗脫液的pH值可使它們被分別洗脫而達到分離的目的。2. 茚三酮反應(yīng)機理在弱酸條件下(pH57),蛋白質(zhì)或氨基酸與茚三酮共熱,可生成藍紫色縮合物。再用2mol/L的氫氧化鈉處理,做法同上。整個過程液面不可低于樹脂床面。(用吸量管沿柱壁四周均勻加入),打開止水夾,使液體緩慢流出至凹液面與樹脂上表面再次約距1mm ,重復此加入緩沖液操作23次,最后加緩沖液至液面高于柱頂2cm左右。【思考題】
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