【正文】 處理：停機取出反應(yīng)杯，用HIALKLID堿液和脫脂紗布小心擦拭反應(yīng)槽，換水，如此反復(fù)數(shù)次，再開機使反應(yīng)槽注滿水（注意排空空氣后再放入反應(yīng)杯）。 反應(yīng)杯不干凈　原因是1D1和1D2清洗液或HIALKLID堿液不足，引起清洗不徹底。處理：檢查未放置的標(biāo)本號重新放入（或補充標(biāo)本量），混有纖維蛋白的樣本必須再次離心以除去纖維蛋白，混有氣泡的標(biāo)本吸去氣泡。 2.　定值方法：　　有些廠商會給自己的標(biāo)準(zhǔn)品定一個定值范圍，這個定值范圍是由廠商聯(lián)合幾家使用同樣檢測系統(tǒng)的臨床用戶，僅多次測定得出的均值。此時該檢測系統(tǒng)在檢測其他新鮮病人樣品時，這些病人樣品結(jié)果的溯源性可上溯至公認(rèn)的參考方法。本身內(nèi)含被檢分析物，植被時刻添加某些分析物，增加含量。 二、標(biāo)準(zhǔn)品的定值 　　一般而言，檢驗工作中使用的標(biāo)準(zhǔn)品屬應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)。本文內(nèi)容詳細(xì)介紹了校準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品的來源及定值方式，得出正確使用三種參考物質(zhì)的方法。由于各公司的原檢測系統(tǒng)，從試劑、校準(zhǔn)品、儀器都有各自特點，形成了各檢測系統(tǒng)間的差異。在實踐中血清結(jié)果往往仍然出現(xiàn)偏倚，必須對新校準(zhǔn)品的定值略作調(diào)整，反復(fù)檢測，直至實現(xiàn)校準(zhǔn)目標(biāo)，調(diào)整的最佳值為該批校準(zhǔn)品的校準(zhǔn)值。要使組成的檢測系統(tǒng)實現(xiàn)校準(zhǔn)目標(biāo)，唯一方法是調(diào)整侯選校準(zhǔn)品的校準(zhǔn)值。這些血清是公司的一級“參考品”，參考方法對血清的定值猶如參考值，是確定校準(zhǔn)品校準(zhǔn)值的依據(jù)。觀察病人標(biāo)本的檢測值是否和參考方法的測定值具良好的可比性。但使用該測定值去校準(zhǔn)常規(guī)的檢測系列時，校準(zhǔn)品中被檢分析物參與反應(yīng)時的表現(xiàn)明顯不同于新鮮病人標(biāo)本，不能將參考方法系列的準(zhǔn)確度通過校準(zhǔn)品傳遞給病人標(biāo)本。二、校準(zhǔn)品的定值1．校準(zhǔn)值隨方法而異如前述，由于純標(biāo)準(zhǔn)液和新鮮病人標(biāo)本間的基體差異，以標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)化常用方法后，常用方法檢測病人標(biāo)本的結(jié)果和參考方法結(jié)果的可比性很差。配制或供應(yīng)這類標(biāo)準(zhǔn)品的實驗室或廠商具有符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的純品。第四章標(biāo)準(zhǔn)品和校準(zhǔn)品傳統(tǒng)的臨床檢驗，要使檢驗結(jié)果可靠或有依據(jù)，往往有一個標(biāo)準(zhǔn)品(Standard)。4．結(jié)果可靠性監(jiān)測（1）終點監(jiān)測：終點法測定要判斷所選的測光點是否到達(dá)終點或平衡點。2．試劑空白變化速率監(jiān)測 一些酶試劑在反應(yīng)溫度下不穩(wěn)定，其空白吸光度可隨著時間逐漸發(fā)生變化，這種變化的主要原因與工具酶或輔酶的純度有關(guān)，且因試劑的組成和生產(chǎn)廠家的不同而不同。若先加入缺乏α酮戊二酸的第一試劑，使其它酮酸與指示酶反應(yīng)之后再加入含有α酮戊二酸的第二試劑，啟動真正的ALT酶促反應(yīng)生成丙酮酸，而丙酮酸與乳酸脫氫酶的反應(yīng)消耗的NAD＋能真正反映ALT的活性，從而消除以上副反應(yīng)的影響。如根據(jù)甘油三酯等干擾物吸收光譜特征，選擇次波長，使干擾物在主、次波長處有盡可能相同的光吸收值，而被測物在主、次波長處的光吸收值應(yīng)有較大的差異。當(dāng)反應(yīng)液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性時，采用雙波長方式更好。 3．彈性速率 在酶活性測定中，當(dāng)酶活性太高，在連續(xù)監(jiān)測期中已不呈線性反應(yīng)時，有些儀器具有彈性速率（flexrate）功能，能自動選擇反應(yīng)曲線上連續(xù)監(jiān)測期中仍呈線性的吸光度數(shù)據(jù)計算結(jié)果，使酶活性測定的線性范圍得以擴大。6．方法學(xué)補償系數(shù) 用于校準(zhǔn)不同分析方法間測定結(jié)果的一致性，有斜率和截距兩個參數(shù)。（二）備選分析參數(shù)這類分析參數(shù)與檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性有關(guān)，一般來說不設(shè)置這類分析參數(shù)，分析儀也能檢測出結(jié)果，但若樣品中待測物濃度太高等，檢測結(jié)果可能不準(zhǔn)確。12．延遲時間 延遲時間（delay time）在連續(xù)監(jiān)測法中樣品與反應(yīng)試劑（第二試劑）混勻開始至連續(xù)監(jiān)測期第一個吸光度選擇點之間的時間。6．反應(yīng)方向 反應(yīng)方向（response direction）有正向反應(yīng)和負(fù)向反應(yīng)兩種，吸光度增加為正向反應(yīng)，吸光度下降為負(fù)向反應(yīng)。生化分析儀一般另外留一些檢測項目的空白通道，由用戶自己設(shè)定分析參數(shù)。第三章常用生化檢測項目分析方法舉例及參數(shù)設(shè)置一、常用生化檢測項目分析方法舉例　　1．終點法檢測　常用的有總膽紅素（氧化法或重氮法）、結(jié)合膽紅素（氧化法或重氮法）、血清總蛋白（雙縮脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、總膽汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、總膽固醇（膽固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白膽固醇（直接測定法）、鈣（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、鎂（二甲苯胺藍(lán)法）等。使用散射比濁法（scatter turbidimetry）能更加準(zhǔn)確快速地檢測抗原抗體形成濁度的大小或其速度，目前專用的特定蛋白分析儀可做此法檢測。③ 底物緩沖液(l5mmol/L ，37℃,pH )。因此，根據(jù)公式A=εbC，已知比色杯光徑b和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度，測得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度A后便可計算出NADH（NADPH）的摩爾吸光系數(shù)ε為 A/bC。C左右，且反應(yīng)過程中仍有可能上下波動，這對于酶學(xué)反應(yīng)來說影響是很大的。連續(xù)監(jiān)測法也可用于測定呈線性反應(yīng)的代謝物濃度，一般是某些基于酶法測定的代謝物。有時也稱此法為兩點法。該法能有效地消除溶血（hemolysis）、黃疸（icterus）和脂濁（lipoturbid）等樣品本身光吸收（見圖75）造成的干擾。終點法參數(shù)設(shè)置簡單，反應(yīng)時間一般較長，精密度較好。檔次較低的分析儀普遍采用單芯片控制系統(tǒng)，而中高檔的分析儀普遍采用多個微處理器（CPU），在其使用維護(hù)中，除上面講到的解決好散熱、除塵、除濕外，正確的操作也很重要。有效避免了交叉感染，提高了檢測準(zhǔn)確性。尤其是夏天，水易生長細(xì)菌，影響結(jié)果。因積塵太多或影響電路板正常工作，或影響儀器散熱、或造成管道尤其是探針系統(tǒng)堵塞。否則浸泡時間過長，比色杯透光度將減少。我院檢驗科于1998年購置了一臺Liasys（意大利）生化分析儀，經(jīng)過這幾年的使用，發(fā)現(xiàn)一些問題影響儀器正常使用。這是一位同行整理的學(xué)習(xí)筆記，很系統(tǒng)，希望對大家有所幫助。本文結(jié)合實踐，就儀器常見的故障加以分析，解決方案和日常維護(hù)小結(jié)如下，以供檢驗同道商討和借鑒。次氯酸濃度過大或浸泡時間過長，比色杯四周粘接處將脫落而損壞。因此，在儀器的使用環(huán)境中應(yīng)嚴(yán)格防塵。一定時間后應(yīng)加稀鹽酸浸泡，去除桶底沉淀。但這一沖洗系統(tǒng)僅對前管道系統(tǒng)（探針至比色杯）進(jìn)行了沖洗，而我們在日常工作中，經(jīng)常發(fā)現(xiàn)后管道系統(tǒng)易堵塞，其原因是各種反應(yīng)液中不同試劑以及血清蛋白等混合后產(chǎn)生大量絮狀沉淀，日積月累而導(dǎo)致堵塞。首先，應(yīng)配備專用不間斷電源（UPS），以免電壓過高過低或突然斷電影響儀器正常工作或造成數(shù)據(jù)丟失甚至燒毀線路板。終點時間的確定：①根據(jù)時間吸光度曲線來確定，如Trinder反應(yīng)測定尿酸，反應(yīng)曲線上3～5min時其吸光度已趨向穩(wěn)定，因而可將5min作為反應(yīng)終點。在單試劑分析加入試劑的初期、或雙試劑分析中第二試劑加入之初，若指示反應(yīng)吸光度尚未明顯變化，則可在此時選擇第一個吸光度，在指示反應(yīng)終點時選擇第二個吸光度，從而設(shè)置成兩點終點法。該分析方法有助于解決某些反應(yīng)的非特異性問題。酶活性（U/L）＝ΔA/min理論（或校準(zhǔn)）K值，代謝物濃度CU=ΔA/min校準(zhǔn)K值。如采用37176。假設(shè)，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度為1Ommo1/L()，酶試劑加入量為335μL，則實測NADH摩爾吸光系數(shù)= ＝6424　，即在此臺分析儀上340nm波長處測得NADH（NADPH）的摩爾吸光系數(shù)為6424，而理論上NADH（NADPH）的ε為6220。測定方法：4NP標(biāo)準(zhǔn)液加入量為5μL，底物緩沖液加入量為350μL，波長405nm，溫度37℃，測定得吸光度為A1；另用蒸餾水代替4NP標(biāo)準(zhǔn)液，按上述方法測定其吸光度為A2，4NP標(biāo)準(zhǔn)液吸光度ΔA= A1 A2，則實測4NP摩爾吸光系數(shù)＝ ＝18662　　2．校準(zhǔn)K值　酶活性校準(zhǔn)品經(jīng)校準(zhǔn)操作后由分析儀自動計算得出。有關(guān)免疫比濁法原理詳見第二章。以上項目中，除鈣、磷和鎂基本上還使用單試劑方式分析因而采用一點終點法外，其它測定項目都可使用雙試劑故能選用兩點終點法，包括總蛋白、白蛋白測定均已有雙試劑可用。因此必須理解各參數(shù)的確切意義。7．樣品量 樣品量（sampling volum）一般是2μl～35μl。13．連續(xù)監(jiān)測時間 連續(xù)監(jiān)測時間（continuous monitoring time）在延遲時間之后即開始，一般為60～120s，不少于4個吸光度檢測點（3個吸光度變化值）。1．樣品預(yù)稀釋 設(shè)置樣品量、稀釋劑量和稀釋后樣品量三個數(shù)值，便可在分析前自動對樣品進(jìn)行高倍稀釋。7．參考值范圍 對超過此范圍的測定結(jié)果，儀器會打印出提示。如AST可從1000U/L擴展至4000U/L，從而減少稀釋及重測次數(shù)、降低成本。（二）雙波長的作用雙波長(diwavelength)測定優(yōu)點是①消除噪音干擾。一般來說，次波長應(yīng)大于主波長100nm。