【正文】 菌株編號氨芐西林阿莫西林/克拉維酸頭孢他啶頭孢噻呋慶大霉素大觀霉素四環(huán)素氟苯尼考磺胺異噁唑復方新諾明恩諾沙星氧氟沙星美羅培南乙酰甲喹安普霉素黏菌素AMA/CCTDCFTGMSPTTEFFCSFSXTENROFXIPMMEQAPCOL注：直接填寫檢測的MIC數(shù)值。2℃很穩(wěn)培養(yǎng)箱中孵育16~18小時。然后，（1~2108CFU/mL）。 結果判定如果某一待檢樣品擴增產(chǎn)物的條帶與偽結核棒狀桿菌陽性對照的條帶在一條直線上，即他們與加樣孔的距離相同，則該樣品可判定為偽結核棒狀桿菌。擴增目的片段長度約758 bp. PCR反應條件94 ℃預變性2min，94 ℃變性30s，54℃退火30s，72℃延伸50s，30個循環(huán)，最后72℃終延伸10min，同時設立陰性和陽性對照。 培養(yǎng)將上述接種后的平板置于37 ℃ 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h~48h。 1 ℃ 顯微鏡：10 ~ 100 EP管: ml 采樣管 采樣棉拭子 微量加樣器 吸頭 （與微量加樣器相匹配） PCR儀 微波爐 電泳儀 電泳凝膠成像分析系統(tǒng)（或紫外透射儀）3 培養(yǎng)基和試劑 DNA Marker 引物及擴增片段長度PLD基因引物：上游：CTCAAGGCGTGGATGA下游：GGTAGCCAGATGGTGAGTAG 運送培養(yǎng)基 10 ％的綿羊脫纖血平板 2Taq PCR MasterMix （含染料） 瓊脂糖 50TAE緩沖液：將242 g Tris 堿， ml 冰乙酸，100 ml EDTA（pH ），加純水至1000 ml。隸誆熒鑒獫綱鴣攣駘賽澇鈧籜軍驢該。鰻順褸悅漚縫囅屜鴨騫鬩藶騍擯駟謔。陰性對照不加模板。，37℃培養(yǎng)36h，待進一步細菌鑒定。加純凈水至 1000mL 16sRNA引物上游引物 5’GGCTTCGTCACCCTCTGT3’下游引物 5’GTGATGAGGAAGGGTGGTGT3’4 副豬嗜血桿菌分離與鑒定程序鼻腔拭子、肺臟、胸腔液、關節(jié)液拭子或肺臟在TSA上劃線挑取可疑菌落接種于TSB鏡檢/PCR鑒定/衛(wèi)星實驗副豬嗜血桿菌鏃鋝過潤啟婭澗駱讕瀘載撻贏禱驛懼。2 設備和材料除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設備外，其它設備和材料如下。電泳結束后，用凝膠成像儀進行成像分析。（PCR）鑒定（1）PCR模板制備 ，按細菌DNA提取試劑盒操作指南提取菌株基因組DNA，作為PCR模板。魏氏梭菌無動力，能將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。5 h 內不發(fā)酵者為陰性。 納疇鰻吶鄖禎銣膩鰲錟顫階躦萵騍潤?，撝C齷蘄賞組靄縐嚴減籩諏戀鄰驂灝。：做好采樣準備后赴養(yǎng)殖場或屠宰廠，針對擬采樣的健康畜/禽或發(fā)病畜/禽，用無菌棉簽蘸取其排泄的新鮮糞便（用滅菌鑷子扒開糞便表皮，蘸取內部糞便），置于運送培養(yǎng)基。 本方法適用于畜禽源魏氏梭菌的分離與鑒定。1℃，培養(yǎng)18~24h；挑取腸球菌可疑菌落純化生化鑒定屎腸球菌或糞腸球菌鰓躋峽禱紉誦幫廢掃減萵輳慘纈騾窺。 生化鑒定卡或商品化試條。本方法適用于各種動物中屎腸球菌和糞腸球菌的分離與鑒定。L上樣緩沖液混勻后加入一個加樣孔。 PCR反應條件采用的PCR反應條件見下表。對于已純化的菌落，可使用微生物生化鑒定系統(tǒng)或者生化拭條進行生化鑒定，并進行結果判定。1℃，微需氧條件下培養(yǎng)24~48h挑取彎曲桿菌可疑菌落純化生化鑒定PCR鑒定空腸彎曲桿菌或結腸彎曲桿菌瑣釙濺曖惲錕縞馭篩涼貿(mào)錒戧晉魘繅。倉嫗盤紲囑瓏詁鍬齊驁絛鯛鱧俁魷親。：5%氧氣+10%二氧化碳+85%氮氣，或商品化微需氧包。四、動物源彎曲桿菌的分離與鑒定方法1 范圍本標準規(guī)定了動物源空腸彎曲菌和結腸彎曲菌的分離鑒定方法。 新鮮兔血漿制備：，加蒸餾水100mL,溶解后過濾，裝瓶，121℃高壓滅菌15min。用營養(yǎng)瓊脂純化一代，待進一步細菌鑒定?！?77。三、動物源金黃色葡萄球菌的分離與鑒定方法1 范圍本標準規(guī)定了用于耐藥性測定的動物源金黃色葡萄球菌的分離和鑒定方法。諺辭調擔鈧諂動禪瀉類謹覡鸞幀鮮奧。 PCR法鑒定 PCR模板的制備用接種環(huán)從營養(yǎng)瓊脂上挑選16～24h的純培養(yǎng)物，12000r/min離心2min，棄上清。 將菌液混勻，接種沙門氏菌顯色培養(yǎng)基，36℃177。1℃，培養(yǎng)18~24h；或TTB增菌液，42177。 沙門氏菌顯色瓊脂。 微量加樣器：1μL～1000μL。 生物安全柜。本方法適用于各種動物中沙門氏菌的分離與鑒定。1℃，培養(yǎng)18~24h；挑取大腸桿菌可疑菌落純化生化鑒定大腸桿菌識饒鎂錕縊灩筧嚌儼淒儂減攙蘇鯊運。 采樣管或商品化采樣棉拭子。2 設備和材料除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設備外，其它設備和材料如下。中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所匯總后，在12月31日前報送農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧獸醫(yī)局。細菌分離與鑒定采用選擇性培養(yǎng)基，定向做大腸桿菌、腸球菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和彎曲桿菌分離，用生化試驗、PCR技術或血清學方法對分離物進行鑒定。全國定點跟蹤監(jiān)測養(yǎng)殖場名錄（首批全國獸用抗菌藥使用減量化行動試點養(yǎng)殖場名單）序號省份（數(shù)量）養(yǎng)殖場通訊地址動物種類1北京市（2）北京金星鴨業(yè)有限公司中辛莊養(yǎng)殖基地北京市通州區(qū)漷縣鎮(zhèn)中辛莊村西肉鴨2北京眾樂河畔養(yǎng)殖專業(yè)合作社北京平谷區(qū)南獨樂河鎮(zhèn)南獨樂河村北果園1號蛋雞3天津市（2）天津市寧河原種豬場天津市寧河區(qū)東棘坨鎮(zhèn)艾林村南生豬4天津市廣源畜禽養(yǎng)殖有限公司天津市寶坻區(qū)大鐘莊農(nóng)場蛋雞5河北?。?）石家莊雙鴿潤農(nóng)養(yǎng)殖有限公司石家莊市無極縣大陳鎮(zhèn)西郎村生豬6平山縣西柏坡五豐蛋雞養(yǎng)殖合作社石家莊平山縣南甸鎮(zhèn)東楊莊村蛋雞7河北灤平華都食品有限公司承德市灤平縣河濱路9號肉雞8河北樂源牧業(yè)有限公司石家莊市鹿泉區(qū)銅冶鎮(zhèn)西任村奶牛9河北恩康牧業(yè)有限公司保定市易縣獨樂鄉(xiāng)中獨樂村肉雞10山西省（3）山西樺桂農(nóng)業(yè)科技有限公司陽曲縣城晉驛原國營良種場肉羊11晉中市金糧農(nóng)業(yè)科技開發(fā)有限公司晉中市榆次區(qū)東趙鄉(xiāng)李焉村肉雞12山西南山百世食安農(nóng)牧業(yè)有限公司呂梁市交口縣石口鄉(xiāng)南山村生豬13內蒙古自治區(qū)（3）鄂爾多斯市賽科星養(yǎng)殖有限責任公司內蒙古鄂爾多斯市達拉牧旗昭君鎮(zhèn)二狗灣村奶牛14內蒙古賽諾種羊科技有限公司內蒙古烏蘭察布市四子五旗烏蘭花鎮(zhèn)肉羊15內蒙古富川養(yǎng)殖科技股份有限公司內蒙古馬彥淖爾市臨河區(qū)烏蘭圖克鎮(zhèn)新民五社肉羊16遼寧?。?）東官營肉雞養(yǎng)殖扶貧農(nóng)場北票市東官營鎮(zhèn)皇古屯村肉雞17瓦房店市紅沿河鎮(zhèn)忠華養(yǎng)殖場遼寧大連瓦房店市紅沿河鎮(zhèn)梁西村小王屯東山肉雞18大連韓偉養(yǎng)雞有限公司旅順分公司大連市旅順口區(qū)三澗堡待道東安路38號蛋雞19吉林?。?）吉林省天惠牧業(yè)有限公司長春市綠園區(qū)合心鎮(zhèn)東安村生豬20長春市宏大種雞場長春市綠園區(qū)合心鎮(zhèn)東安村蛋雞21九臺區(qū)東湖街道辦事處隆達興養(yǎng)殖農(nóng)民專業(yè)合作社吉林省長春市九臺區(qū)東湖鎮(zhèn)腰站村八社肉牛22黑龍江?。?）杜爾伯特蒙古族自治縣谷實牧業(yè)有限公司哈爾濱高新技術產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)迎賓路集中區(qū)洪湖路28號生豬23哈爾濱市信生家禽養(yǎng)殖有限公司哈爾濱市呼蘭區(qū)長嶺街道平坊村蛋雞24牡丹江市雙利牧業(yè)有限公司牡丹江市陽明區(qū)磨刀石鎮(zhèn)大甸子村蛋雞25上海市（2）光明牧業(yè)有限公司新東奶牛場上海市崇明區(qū)新海鎮(zhèn)北沿公路3126號奶牛26光明牧業(yè)有限公司金山種奶牛場上海市金山區(qū)廊下鎮(zhèn)永光路1588號奶牛27江蘇?。?）江蘇立華牧業(yè)股份有限公司江蘇省常州市武進區(qū)牛塘鎮(zhèn)盧西村委河西村500號肉雞28南通天成現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技有限公司江蘇省南通市海安縣老壩港濱海新區(qū)灘涂墾區(qū)蛋雞29光明食品集團上海海豐大豐禽業(yè)有限公司江蘇省鹽城市大豐區(qū)海豐農(nóng)場蛋雞30江蘇洋宇生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司江蘇省泰州市新街鎮(zhèn)李蕩村7組生豬31江蘇加華種豬有限公司江蘇省宿遷市泗陽縣南劉集花井村生豬32浙江?。?）浙江開盛生態(tài)農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司浙江省江山市大橋鎮(zhèn)陳家村馬車岙生豬33慈溪市新浦益大養(yǎng)雞場浙江省慈溪市新浦鎮(zhèn)腰塘村蛋雞34浙江美保龍種豬育種有限公司浙江省金華市婺城區(qū)白龍橋鎮(zhèn)古方二村生豬35嘉興嘉華牧業(yè)有限公司浙江省嘉興市桐鄉(xiāng)市洲泉鎮(zhèn)湘溪村周家浜北生豬36安徽?。?）安徽張曉毛食品有限公司安徽省安慶市懷寧縣公嶺鎮(zhèn)三鋪村蛋雞37安徽省順安農(nóng)產(chǎn)品銷售有限公司安徽省寧國市津河西路110號肉雞38嘉吉動物蛋白（安徽）有限公司安徽省來安縣經(jīng)濟開發(fā)區(qū)中央大道33號肉雞39界首市洪理養(yǎng)殖專業(yè)合作社安徽省界首市任寨鄉(xiāng)任寨行政村肉羊40福建?。?）福建光陽蛋業(yè)股份有限公司福建省福清市鏡洋鎮(zhèn)紅星村光陽蛋業(yè)蛋雞41福建省德福生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司福建省泉州市永春縣介福鄉(xiāng)紫美村蛋雞42南平市建陽區(qū)吉翔牧業(yè)有限公司南平市建陽區(qū)水吉鎮(zhèn)玉瑤村老虎山奶牛43福建光華百斯特生態(tài)農(nóng)牧發(fā)展有限公司福建省三明市尤溪縣洋中鎮(zhèn)洋邊村生豬44江西?。?）江西正邦科技股份有限公司江西省南昌市高新區(qū)艾溪湖一路569號生豬45江西萬年鑫星農(nóng)牧股份有限公司江西省上饒市萬年縣豐收工業(yè)園建業(yè)路生豬46井岡山市傲新華富育種有限公司江西省井岡山市廈坪鎮(zhèn)生豬47新余市仙女湖畔生態(tài)農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司分宜縣鈴山鎮(zhèn)松林巷蛋雞48山東?。?）莒南縣宏達肉雞養(yǎng)殖場山東省莒南縣道口鎮(zhèn)中道口村肉雞49青島新高地奶牛養(yǎng)殖場青島萊西市店埠鎮(zhèn)政府東奶牛50青島九聯(lián)集團肉雞第七十六養(yǎng)殖場青島萊西市沽河街道辦事處后莊扶村肉雞51山東牧族生態(tài)農(nóng)業(yè)科技有限公司諸城市石橋子鎮(zhèn)枳房村蛋雞52煙臺福祖畜牧養(yǎng)殖有限公司第一分公司萊陽市譚格莊鎮(zhèn)政府駐地生豬53泗水縣鴻百惠牧業(yè)有限公司泗水縣楊柳鎮(zhèn)岳家?guī)X村肉雞54河南?。?）牧原食品股份有限公司南陽市內鄉(xiāng)灌漲水田村生豬55漯河雙匯萬中禽業(yè)第一商品雞場漯河市源匯區(qū)大劉鎮(zhèn)陶莊村（師莊）西南地肉雞56淇縣祥林養(yǎng)殖有限公司鶴壁市淇縣鐵西永達公司肉雞57河南省科爾沁肉牛養(yǎng)殖有限公司南陽市新野縣歪子鎮(zhèn)寺門村肉雞58河南花花牛畜牧科技有限公司河南省新鄉(xiāng)市原陽縣官廠鄉(xiāng)小劉固村肉牛59汝州市中王生態(tài)農(nóng)牧科技有限公司河南省汝州市紙坊鎮(zhèn)中王村王莊奶牛60湖北?。?）武漢宏農(nóng)農(nóng)牧有限公司武漢市黃陂區(qū)木蘭鄉(xiāng)蛋雞61荊州紅太陽畜禽養(yǎng)殖有限公司荊州市荊州區(qū)川店鎮(zhèn)太陽村蛋雞62安陸市鳥王種禽有限責任公司湖北省安陸市解放大道東3號蛋雞63湖北全盛生態(tài)農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司湖北省天門市多祥鎮(zhèn)趙家莊村蛋雞64湖南?。?）新湘農(nóng)生態(tài)科技有限公司湖南省郴州市北湖區(qū)石蓋塘街道石蓋塘工業(yè)園工業(yè)大道生豬65湖南龍華農(nóng)牧發(fā)展有限公司湖南省株州市茶陵縣嚴塘鎮(zhèn)十里沖生豬66湖南湘佳牧業(yè)股份有限公司湖南省石門縣經(jīng)濟開發(fā)區(qū)天供山居委會夾山路9號肉雞67寧鄉(xiāng)廣東溫氏畜禽有限公司湖南省寧鄉(xiāng)市回龍鋪萬壽山村肉雞68廣東?。?）廣州市穗新牧業(yè)有限公司廣州市增城區(qū)仙村鎮(zhèn)岳湖村奶牛69臺山市河東禽業(yè)有限公司那金分公司臺山市三合鎮(zhèn)聯(lián)山管區(qū)龍安村瓦窯肉雞70廣東華農(nóng)溫氏畜牧股份有限公司鶴山分公司宅梧豬場廣東省鶴山市宅梧鎮(zhèn)