蛋白質(zhì)化學(xué)最終版ppt課件-免費(fèi)閱讀
【正文】 ?特點(diǎn)： 1. 高度特異性 ? 2. 可逆行 （四）根據(jù)配基特異性的分離純化方法 三、蛋白質(zhì)的純度鑒定、含量測(cè)定和結(jié)構(gòu)分析 （一）蛋白質(zhì)的純度鑒定 1. 層析法： 層析純 2. 電泳法： 電泳純 3. 免疫化學(xué)法： 免疫純 （二）蛋白質(zhì)含量測(cè)定 1. 凱氏定氮法 2. 福林（ Folin ） 酚試劑法（ Lowry法） 3. 雙縮脲法 4. 紫外分光光度法 5. BCA比色法 6. Bradford蛋白分析法 視頻：蛋白質(zhì)含量測(cè)定 X射線(xiàn)衍射法和核磁共振技術(shù) （ NMR)是研究蛋白質(zhì)三維空間結(jié)構(gòu)最準(zhǔn)確的方法 。 鹽析沉淀： 視頻：蛋白質(zhì)的鹽析 超過(guò)濾 加壓 蛋白質(zhì)溶液 半透膜 支持膜的柵板 超濾液 透析 （二）根據(jù)分子大小不同的分離純化方法 未知 logMr 洗出液中的蛋白質(zhì)濃度 洗脫體積（ mL） 層析的主要設(shè)備 3. 密度梯度離心 蔗糖密度梯度 滴加樣品 CsCl密度梯度離心 蛋白質(zhì)在高于或低于其 pI的溶液中為帶電的顆粒 ， 在電場(chǎng)中能向正極或負(fù)極移動(dòng) 。 四、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì) 蛋白質(zhì)分子大小在膠粒范圍之內(nèi) 。 瘋牛病是由朊病毒蛋白 ( PrP)引起的一組人和動(dòng)物神經(jīng)退行性病變。 glu his α 角蛋白中的 α 螺旋和二硫鍵 （三）超二級(jí)結(jié)構(gòu) 模體 多肽鏈順序上相鄰的二級(jí)結(jié)構(gòu)常常在空間折疊中靠近，彼此相互作用，形成有規(guī)則的二級(jí)結(jié)構(gòu)聚集體，是蛋白質(zhì)發(fā)揮特定功能的基礎(chǔ)。 16肽 ， Ｎ端 H Ｃ端 Ｓ Ａ法裂解： ONS PS EOVE RLA HOWT B法裂解： SEO WTON VERL APS HO 重疊法 確定序列： HOWTONSEOVERLAPS ⑤ 分析已純化蛋白質(zhì)的氨基酸殘基組成 測(cè)定多肽鏈的氨基末端與羧基末端為何種氨基酸殘基 把肽鏈水解成片段，分別進(jìn)行分析 測(cè)定各肽段的氨基酸排列順序，一般采用 Edman降解法 一般需用數(shù)種水解法，并分析出各肽段中的氨基酸順序，然后經(jīng)過(guò)組合排列對(duì)比，最終得出完整肽鏈中氨基酸順序的結(jié)果。 * 肽鏈中的氨基酸分子因?yàn)槊撍s合而基團(tuán)不全，被稱(chēng)為 氨基酸殘基 。 （三）、 氨基酸的兩性解離及等電點(diǎn) C H R COO－ H3N+ pH=pI +OH pHpI +H+ +OH +H+ pHpI 氨基酸的兼性離子 陽(yáng)離子 陰離子 CHNH 2COOHRCHNH 3 +C O O R CHNH 2C O O RCH C O O HRNH 3 +C O O－ C H H 3 N + CH3 K1 C O O H C H H 3 N + CH3 C O O－ H 2 N CH3 K2 Ala+ Ala 177。 有些蛋白質(zhì)含有少量 磷 或金屬元素 鐵、銅、鋅、錳、鈷、鉬 ，個(gè)別蛋白質(zhì)還含有 碘 。 各種蛋白質(zhì)的含氮量很接近，平均為 16％ 。 Ala－ H C C O O H C H H 3 N + CH2 C O O H C O O－ C H H 3 N + CH2 C O O H C O O－ C H H 2 N CH2 C O O － Asp+ Asp177。 * 由十個(gè)以?xún)?nèi)氨基酸相連而成的肽稱(chēng)為 寡肽，由更多的氨基酸相連形成的肽稱(chēng) 多肽 。 蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定 按照三聯(lián)密碼的原則推演出氨基酸的序列 分離編碼蛋白質(zhì)的基因 測(cè)定 DNA序列 排列出 mRNA序列 蛋白質(zhì)鏈 DNA mRNA 二、蛋白質(zhì)的構(gòu)象 又稱(chēng)為空間結(jié)構(gòu)，立體結(jié)構(gòu)，高級(jí)結(jié)構(gòu)，三維構(gòu)象等。 αα βββ βαβ 鈣結(jié)合蛋白中結(jié)合鈣離子的模體 鋅指結(jié)構(gòu) 纖連蛋白分子的結(jié)構(gòu)域 （四）結(jié)構(gòu)域 在較大的蛋白質(zhì)分子中，由多肽鏈上相鄰的超二級(jí)結(jié)構(gòu)緊密的聯(lián)系，進(jìn)一步折疊形成一個(gè)或多個(gè)相對(duì)獨(dú)立的三維實(shí)體，各行使其功能，稱(chēng)為結(jié)構(gòu)域 。 leu PrPc α螺旋 PrPsc β折疊 正常 瘋牛病 不同生物與人的 Cytc的 AA差異數(shù)目 生物 AA差異數(shù)目 黑猩猩
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