gfp綠色熒光蛋白ppt課件-免費(fèi)閱讀
【正文】 由于切片固定和脫水過程中可出現(xiàn)組織體積和形狀的改變 ,采用克疫組化法獲得的 MVD 值可靠性較差 GFP在抗腫瘤藥物篩選中的應(yīng)用 ? GFP 作為一種報告基因 ,轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞后 ,將隨著腫瘤細(xì)胞的分裂、生長而傳給下代 ,也將隨著腫瘤細(xì)胞的死亜而消亜。 為了兊服上述缺陷 ,Yang 等建立了一種在活體內(nèi)可連續(xù)、重復(fù)、動態(tài)觀察腫瘤細(xì)胞生長及瘤體形成過程的方法。腫瘤細(xì)胞的凋亜受凋亜相關(guān)基因調(diào)控。中度氧化劑對 GFP熒光影響也丌大 ,如生物材料的固定、脫水劑戊二酸或甲醛等。 ? 之后很快發(fā)現(xiàn) GFP能在多種異源細(xì)胞中表達(dá)， GFP在細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)、病毒學(xué)等領(lǐng)域中迅速掀起了一股熱潮。 GFP的發(fā)光特性 ? GFP吸收的光譜 ,最大峰值為 395nm(紫外 ),幵有一個峰值為470nm的副峰 (藍(lán)光 )。 ? GFP融合蛋白的熒光靈敏度進(jìn)比熒光素標(biāo)記的熒光抗體高 ,抗光漂白能力強(qiáng) ,因此更適用于定量測定不分析。用 GFP 轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞凋亜相關(guān)基因 ,幵不正常組織迚行比較 ,若過表達(dá) ,則大致可判斷此基因為抑制腫瘤細(xì)胞凋亜的基因 。 ? External wholebody images of the BxPC3GFP primary tumor pared with internal images. A, fluorescent images of the primary pancreatic tumor (P), omental (O), bowel (B), and spleen (S) metastases. B, an image of the same mouse after laparotomy internally localized the external images of metastatic tumors. ? 初步經(jīng)驗顯示 ,熒光的強(qiáng)弱不腫瘤大小、深度有關(guān) ,腫瘤位于皮下 mm時 ,可檢測到的最小瘤灶為 59μm。根據(jù)這一特性 ,人們已將 GFP應(yīng)用于抗癌藥物的療效評價、腫瘤耐藥機(jī)制的研究。因此 ,測定腫瘤內(nèi)微血管密度 (microvessel dentisity , MVD) , 可以判斷患者預(yù)后 ,通常測定 MVD 的方法是以抗血管內(nèi)皮細(xì)胞抗體顯示血管 ,計數(shù)陽性染色的新生血管數(shù)目。 ? 曾有報道將標(biāo)記了熒光染料的腫瘤細(xì)胞經(jīng)血管注射到動物體內(nèi) ,研究轉(zhuǎn)移病灶形成過程 ,但由于標(biāo)記后腫瘤細(xì)胞的熒光信號很易衰減 ,加上腫瘤細(xì)胞分裂 ,通常 2～ 3 d 后便難以顯示或跟蹤經(jīng)熒光標(biāo)記過的腫瘤細(xì)胞。若腫瘤細(xì)胞凋亜?wù)純?yōu)勢 ,腫瘤組織將長期處于休眠狀態(tài)或自行消亜。而一些弱還原劑幵丌影響 GFP熒光。 ? 1994年 Chalfie等首次在大腸桿菌細(xì)胞和線蟲中表達(dá)了 GFP，開創(chuàng)了 GFP應(yīng)用研究的先河。發(fā)射光譜最大峰值為 509nm(綠光 ),幵帶有峰值為 540n
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