【正文】 我們應(yīng)用 Western blot分析發(fā)現(xiàn)，在 G2/M期阻滯同時(shí)有 Cdc25C蛋白表達(dá)下降，但 CDK1蛋白表達(dá)不受 DADS 作用的影響。 cyclinD1在細(xì)胞增殖過程中意義最大 ， 是 G1期細(xì)胞增殖信號的關(guān)鍵蛋白 。mL1 DADS 5181。 我們 上述研究結(jié)果顯示 ， pRb、 p21表達(dá)的增強(qiáng)和 cMyc、 Ras及突變型 p53表達(dá)減弱均可導(dǎo)致細(xì)胞停滯于 G1期 。 差異表達(dá)片段 DADS2，長 272bp，與魚類 hepcidinlike precursor mRNA具有高同源性，其上調(diào)可能與 DADS造成細(xì)胞內(nèi)低鐵低氧環(huán)境，繼而誘導(dǎo)人胃癌 MGC803細(xì)胞分化相關(guān)。 SB 66 177。 未處理組 MGC803細(xì)胞核漿比例大，核仁均質(zhì)，以 12個(gè)核仁細(xì)胞為主；胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器稀少，細(xì)胞分化程度低。 P53基因編碼 P53蛋白 ， P53蛋白有野生型和突變型 ， 野生型 P53基因具有抑制細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化的作用 。L1) : ─ 15 30 60 ─ 30 SB(mM) : ─ ─ ─ ─ 5 5 DADS對體外培養(yǎng) MGC803細(xì)胞組蛋白乙?；挠绊? 0 15 30 6 0 D ADS c ont ert at ion s ( m g/L)Average density(OD)02040608010012014016012h24hp21WAF1 βactin 處理時(shí)間 （ h） : 12h 24h 12h 24h 12h 24h 12h 24h DADS(mg TPA則通過影響 GPⅡ b及 GATAs轉(zhuǎn)錄來誘導(dǎo)MC3細(xì)胞分化 。維甲酸受體 (RAR)是廣泛存在各種組織細(xì)胞核內(nèi)的一類受體蛋白，有 RARS和 RXRS兩類，每一類又有 α 、 β 、 γ 三種類型，比較其 DNA序列和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，二者屬于類固醇 甲狀腺素 vitD3受體在內(nèi)的核內(nèi)受體超家族。人實(shí)體瘤采用小鼠腎包膜下移植和裸鼠移植建立分化誘導(dǎo)模型 。 三 、誘導(dǎo)腫瘤分化的研究 (1)白血病細(xì)胞分化誘導(dǎo)模型 最常用的是急性 髓性 白血病細(xì)胞株 HL60。 （ redifferentiation） 又稱逆轉(zhuǎn) （ reversion） ， 它是指在分化誘導(dǎo)劑的作用下 ， 惡性腫瘤細(xì)胞被誘導(dǎo)而重新向正常細(xì)胞的方向演變分化 ， 表現(xiàn)為形態(tài)學(xué) 、 生物學(xué) 、 生物化學(xué)等諸多指標(biāo)均向正常細(xì)胞接近 ，甚至完全轉(zhuǎn)變?yōu)檎＜?xì)胞 。 長期以來，“細(xì)胞一旦癌變后，就永遠(yuǎn)是癌細(xì)胞”的觀點(diǎn)一直統(tǒng)治著腫瘤學(xué)領(lǐng)域，即惡性腫瘤是不能逆轉(zhuǎn)的。腫瘤的發(fā)生發(fā)展經(jīng)歷了啟動、促發(fā)、侵襲、轉(zhuǎn)移等階段。如人起源于一個(gè)受精卵，通過細(xì)胞分裂形成內(nèi)、中、外三個(gè)胚層細(xì)胞。 ⑶維生素 A類化合物：維甲酸、 AM80、芳維甲等。 其它實(shí)體瘤分化誘導(dǎo)模型 其它實(shí)體瘤如黑色素瘤 、 肝癌 、前列腺癌 、 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 、 肺癌等均有報(bào)道 。 ATRA能誘導(dǎo) APL病人惡性腫瘤細(xì)胞分化成熟，口服 ATRA可使大多數(shù)患者達(dá)到完全臨床緩解，即使是傳統(tǒng)化療失敗后亦是如此。 2. 影響基因轉(zhuǎn)錄 Naka 等用 9cis維甲酸誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞株分化研究中 ， 發(fā)現(xiàn)大多數(shù)胃癌細(xì)胞株能合成 RARs和 RXRs mRNA， 其中一些細(xì)胞株并不停滯于 G0/G1期 ， 但可一過性增加 p21WAF1蛋白表達(dá) ， 降低 CDK EGFR及 cyclinD蛋白量 ， 減少 Rb基因產(chǎn)物磷酸化 。 我們前期研究的基礎(chǔ)上 ， 建立人胃癌 MGC803細(xì)胞裸鼠移植瘤模型 ， 以被證實(shí)有顯著誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化的藥物丁酸鈉 （ Sodium butyrate, SB） 為陽性對照 ， 觀察 DADS（ diallyl disulfide） 在體內(nèi)外誘導(dǎo) MGC803細(xì)胞分化時(shí) ， 對其核組蛋白乙?；磉_(dá)的調(diào)控作用 ， 以及二者之間的關(guān)系 ， 進(jìn)一步探討DADS對 MGC803細(xì)胞抑制和誘導(dǎo)分化的作用機(jī)理 。 Ras基因在細(xì)胞內(nèi)有 H， K， NRas， 編碼分子量為 21kd的蛋白 ，p21Ras蛋白具有 GTP酶活性 。 我們發(fā)現(xiàn) ， DADS作用下 ， MGC803細(xì)胞明顯抑制 ， 且呈劑量 效應(yīng)依賴關(guān)系；瘤細(xì)胞對 Con A的凝集率 、 集落形成率與 ALP比活性下降；瘤細(xì)胞異形性降低 ， 核漿比下降 ， 細(xì)胞表面微絨毛數(shù)目減少 ， 胞漿內(nèi)細(xì)胞器豐富 ， 胞核及部分細(xì)胞器呈退行性變 ， 可見細(xì)胞間連接結(jié)構(gòu)；細(xì)胞骨架蛋白合成增加與重組 ， 細(xì)胞間縫隙連接通訊功能恢復(fù) ， 提示 DADS可誘導(dǎo)MGC803細(xì)胞分化 。 間接免疫熒光染色（ 100） 劃痕標(biāo)記后數(shù)分鐘即可觀察到黃色熒光傳播，人胃癌 MGC803細(xì)胞不顯示熒光染料的傳播，表明無間縫隙連接通訊功能。kg1DADS處理組 ) Gr oupsTumor weight(g).2.4.6.8NSSB(6 6mg/kg)D AD S(5 0mg/kg)D AD S(1 00 mg/k g)D AD S(2 00 mg/k g)PCNA βactin 各處理因素 ： NS SB DADS DADS DADS 濃度 (mggmL1 DADS kg1組 DADS 200mg CDIs是 CDKs的負(fù)調(diào)控因子，可使 CDKs失活； cyclins是 CDKs的正調(diào)控因子，使 CDKs活化，二者對 CDK活性的影響控制細(xì)胞周期各時(shí)相的轉(zhuǎn)換。 DADS對人胃癌 MGC803和 BGC823細(xì)胞 G2/M期檢查點(diǎn) 激酶通路的影響 ?RTPCR檢測 Chk1和 Chk2在 mRNA水平的改變 ?Western blot檢測各蛋白的改變 ?免疫共沉淀檢測 Chk Chk2與 Cdc25C結(jié)合 M 1 2 3 4 5 6 600bp 300bp Chk1 βactin 01 2 3 4 5 6Ratio of gray valueRTPCR 檢測 MGC80 BGC823細(xì)胞 Chk1mRNA表達(dá)水平 M： Marker； 1： MGC803細(xì)胞對照組； 23： DADS 處理 MGC803細(xì)胞 1d、 2d； 4: BGC823細(xì)胞對照組； 56： DADS 處理 BGC823細(xì)胞 1d、 2d M 1 2 3 4 5 6 600bp 300bp Chk2 βactin 01 2 3 4 5 6Ratio of gray valueRTPCR 檢測 MGC80 BGC823細(xì)胞 Chk2mRNA表達(dá)水平 M： Marker； 1： MGC803細(xì)胞對照組； 2－ 3： DADS 處理 MGC803細(xì)胞 1d、 2d； 4: BGC823細(xì)胞； 5－ 6： DADS處理 BGC823細(xì)胞 1d、 2d DAD