【正文】 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 94 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 95 澳洲的寶石蛋白石 (opal) 蛋白石是由二氧化硅 納米 球 (nanosphere)沉積形成的礦物，其色彩繽紛的外觀與色素?zé)o關(guān)， 而是因為它 幾何結(jié)構(gòu)上的周期性 使它具有光子能帶結(jié)構(gòu)，隨著能隙位置不同，反射光的顏色也跟著變化 光子晶體－選擇反射太陽光中某波長光而呈現(xiàn)顏色 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 96 這是因為太陽光是由 紅 、橙、黃、綠、青、 藍 、紫七種顏色組成的。導(dǎo)數(shù)光譜是解決干擾物質(zhì)與被測物光譜重疊，消除膠體等散射影響吸收，提高光譜分辨率的一種數(shù)據(jù)處理技術(shù)。 例如 乙醇中微量苯的鑒定。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 71 小結(jié)： 參比溶液選擇原則： 凡是有色的溶劑或顯色劑或基底液，應(yīng)盡量消除對測定配合物的吸收影響。 （配位數(shù)和水解等與 pH相關(guān)）。 國產(chǎn) WFZ8005型 、 島津 UV260型 、 UV265型 11110lg BSbcIIA ??????? ? 22220lg BSbcIIA ???? ????bcAAIIA )(lg 121221?????? ?? ??????College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 65 分光光度計校正 儀器使用過一段時間后 波長 和 吸光度 出現(xiàn)漂移，要進行校正。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 60 ★ 吸收池 absorption cell 比色皿 cuvette 玻璃吸收池：用于可見光區(qū) 石英吸收池：用于紫外區(qū) 1）盛放參比的吸收池和盛放樣品的吸收池應(yīng)匹配，即有相同的厚度與透光性。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 58 紫外 — 可見分光光度計 紫外－可見分光光度計由上五部分組成。 （光學(xué)因素） College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 56 b．雜散光 儀器中常含有與所需波長相差較大的光，一般樣品不吸收， 所以不干擾測定。 ε 105 超高靈敏；（ 6－ 10） 104高靈敏； 2 104 不靈敏。 2. a的大小反映測量的靈敏度。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 42 H2O的配位場小于 NH3 7 9 4 n m O)C u ( H 242 淺藍色?663nm )C u ( N H 243 深藍色?特點：吸收強度小。 ②烯烴：有雙鍵，產(chǎn)生 π→π ＊ 躍遷， λmax 約在 180nm；共軛體系中的 π→π ＊ 躍遷， 對應(yīng) K帶吸收， ε 大； π→π ＊ 躍遷的λmax 隨共軛增長，移向長波方向，當(dāng)有五個雙鍵時， λmax 達到可見光區(qū)。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 34 3）溶劑效應(yīng) 極性溶劑使 π π*躍遷發(fā)生紅移。 小結(jié) ： ?→ ?* 飽和鍵 所需能量最大 200nm遠紫外區(qū) 紫外 — 可見分光光度法溶劑，例己烷、環(huán)己烷 等 ?→ ?* C=C或共軛雙鍵 所需能量適中 單雙鍵200nm 共軛雙鍵200nm 共軛雙鍵常為紫外－可見分光光度法研究對象，躍遷強度大， ε 1 104 n→ ?* C=X (X=O/N/S/P) 所需能量最小 200nm近 紫外區(qū) 紫外－可見研究對象，躍遷強度小， ε 100. n→ ?* CX (X=O/N/S/P) 所需能量適中 200nm附近 雜原子電負(fù)性越大，λ max越小。 ??不同濃度的同一種物質(zhì)，在 λ max處吸光度 A 的差異性可作為 物質(zhì)定量分析的依據(jù) 。 如 CuSO4溶液的濃度愈高，對黃色光的吸收就愈多，表現(xiàn)為透過的藍色光愈強，溶液的藍色愈深。 ?若物質(zhì)對白光中所有顏色的光全部吸收，它就呈現(xiàn)黑色。 光的特性 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 6 光子的能量與波長的關(guān)系（反比） ??hchE ??能量 J或 eV Planck常數(shù) 1034 JCollege of Bioengineering, Jimei University, CHINA 1 第二章 紫外 — 可見分光光度法 引言 紫外－可見吸收光譜 光吸收定律－ LambertBeer定律 紫外－可見分光光度計 分析條件的選擇 UVVis光度法的應(yīng)用 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 2 光譜分析法 ：利用物質(zhì)與光（輻射能）相互作用而建立起來的定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法 。s 頻率， Hz 光速 108 m/s 波長 nm 1eV= 1019 J ＝ College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 7 例：計算波長為 200 nm的光子的能量 解： ?hcE ?m 10200m / s 102 . 9 9 8sJ 9834????????eV 6 . 2 0J 19 ??? ?College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 8 各種電磁波譜波長范圍 ： 無線電波 1～ 1000 m 微波 103～ 1 m 紅外 ～ 1000 ?m 可見 400～ 800 nm 紫外 100～ 400 nm 近紫外 200～ 400 遠紫外 100～ 200 X射線 ～ 10 nm 本章重點討論 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 9 紫外－可見吸收光譜 一 .吸收光譜的產(chǎn)生 分子內(nèi)三種運動對應(yīng)三種能級： 電子運動－電子能級 (Electron energy level) 原子之間的相對振動－振動能級 (vibration) 分子轉(zhuǎn)動－轉(zhuǎn)動能級 (rotation) 分子整體能級 E=Ee+Ev+Er College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 10 當(dāng)有一頻率 v , 如果輻射能量 hv恰好等于該分子較高能級與較低能級的能量差時，即有： hvEEE ???? 12分子從基態(tài)能級躍遷到激發(fā)態(tài)能級 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 11 基態(tài) 激發(fā)態(tài) College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 12 Δ E電 =120eV Δ E振 = Δ E轉(zhuǎn) = 在分子能級躍遷所產(chǎn)生的能量變化，電子躍遷能量變化最大，它對應(yīng)電磁輻射能量主要在區(qū)紫外 — 可見區(qū)。 ?若反射所有顏色的光則呈現(xiàn)白色 ?若透過所以顏色的光，則為無色 。 因此，人眼可以通過比較溶液顏色的深淺來確定溶液中吸光物質(zhì)的濃度大小。 ??在 λ max處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以 測定最靈敏 。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 30 生色團 （發(fā)色團）：能吸收外來輻射并引起 n→ ?*和 ?→ ?* 躍遷結(jié)構(gòu)單元。 4） pH值 pH增大，苯酚 π π* 吸收帶發(fā)生紅移。 College of Bioengineering, Jimei University, CHINA 39 ③醛酮：有＞ C＝ O基因，產(chǎn)生 n→π ＊；