“生物檢驗檢疫”課程實驗教案授課人：陳勇實驗一：病料的采-免費(fèi)閱讀
【正文】 雖在低于20℃的溫度下，亦不再凝固。試驗時，將被檢細(xì)菌接種于硝酸鹽培養(yǎng)基試管中，在37。 實驗結(jié)果： 液體成紅色者為陽性，黃色者為陰性，橙色者為可疑。其中，可是甲基紅指示劑變成紅色，并至少持續(xù)4天之久。此即為VP試驗陽性。絕大多數(shù)細(xì)菌都能利用糖類為碳源和能源，但是各種細(xì)菌在分解糖類的能力上有很大差別。 （2）學(xué)習(xí)吲哚試驗的操作技術(shù)。實驗三 細(xì)菌的生化特性鑒定細(xì)菌的生理生化試驗是菌種鑒定的重要依據(jù)，通過細(xì)菌的生理生化反應(yīng)了解細(xì)菌在不同基質(zhì)中的各種代謝途徑和產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物及在菌種鑒定中的重要性，本實驗選做其中的9個實驗，包括硫化氫試驗、靛基質(zhì)試驗（吲哚實驗）、糖發(fā)酵試驗、乙酰甲基甲醇試驗（VP試驗）、甲基紅試驗（）、尿素酶試驗、檸檬酸鹽利用試驗、硝酸鹽還原試驗、明膠液化試驗。 莢膜染色法 （1）希司氏莢膜染色法 細(xì)菌涂片，甲醇固定后，用一小塊濾紙片覆蓋于涂膜上，滴加結(jié)晶紫染液，并置于火焰上略加熱至發(fā)生蒸汽為止（約近1分鐘），傾去染液，除去濾紙片，再用20%硫酸銅溶液沖洗，待干后鏡檢。C水浴箱中，2小時后加入甲醇50毫升，靜置1天以上，過濾后即可使用。新鮮配制的美藍(lán)染色不好，陳舊的染色好。（2）革蘭氏染色：G+和G其細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和成分不同，G菌的細(xì)胞壁中含有較多的易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，并且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，在使用乙醇或丙酮脫色時，因類脂質(zhì)溶解增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)菌被脫色，再經(jīng)石炭酸復(fù)紅復(fù)染后即成紅色。（2） 形狀 菌落的外形有圓形、不整形、樹根形、葡萄葉形等。 某些細(xì)菌除具有基本結(jié)構(gòu)外，還具有某些特殊結(jié)構(gòu)，如莢膜、鞭毛、芽孢等，通過特殊染色法加以觀察，對鑒別細(xì)菌的種類具有一定意義。雙球菌在一個平面上分裂，分裂后菌體成對排列，如腦膜炎雙球菌、肺炎鏈球菌；鏈球菌連續(xù)不斷地在一個平面上分裂，呈鏈狀排列，如化膿鏈球菌；葡萄球菌是在多個不同角度平面上做不規(guī)則分裂，分裂后菌體堆積成葡萄串狀，如金黃色葡萄球菌。培養(yǎng)細(xì)菌：將培養(yǎng)皿放入37。取菌種：（1）每個試管中放入1毫升的生理鹽水。在微生物學(xué)的科學(xué)試驗及發(fā)酵生產(chǎn)中，都要把一種微生物移接到另一滅過菌的新鮮培養(yǎng)基中，使其生長繁殖并獲得代謝產(chǎn)物。未破的膿腫，水皰液，水腫液等無菌注射器吸取，注入無菌容器中。術(shù)后局部常規(guī)消毒。（一） 靜脈采血魚是尾靜脈；馬，牛，羊犬，貓一般多在頸靜脈；成年豬在耳靜脈；6個月以內(nèi)的豬在前腔靜脈；禽在翅靜脈采血。兔或豚鼠等的采血：在胸部左側(cè)觸及心臟跳動處垂直刺入，邊刺邊抽注射器內(nèi)塞，將血取出。（七）實質(zhì)臟器的采集 選擇典型病變連同一部分正常組織，切下一，二塊，每塊不小于4厘米*2厘米*2厘米。分裝試管：將溶解的培養(yǎng)基分裝入試管，且分裝入的培養(yǎng)基應(yīng)不超過試管高度的三分之一，塞上木塞。左右的角度（角度愈小愈好，以免空氣中細(xì)菌進(jìn)入皿中將培養(yǎng)基污染）。 細(xì)菌的基本形態(tài)可分為三類：球菌、桿菌和螺旋菌。螺旋菌 菌體彎曲。例如葡萄球菌在瓊脂平皿上，由于產(chǎn)生色素的不同，形成各種顏色之圓形而突起的菌落；炭疽桿菌形成扁平、干燥、邊緣不整齊的波紋狀菌落，用放大鏡觀察時，它們呈卷發(fā)樣構(gòu)造；腸道桿菌屬的細(xì)菌形成圓形、濕潤、黏稠、扁平、大小不等之菌落；巴氏桿菌和豬丹毒桿菌形成細(xì)小露珠狀菌落。（7） 硬度 有黏液狀、脂狀、干燥或濕潤等。因孔雀綠是弱堿性染料，與菌體結(jié)合力較差，因此易被水沖洗掉，而進(jìn)入芽孢中的孔雀綠卻難以溶出。 瑞氏染色液 ，純中性甘油1毫升，在研缽中混合研磨，再加甲醇60毫升，使其溶解，裝入中性瓶中越夜，次日過濾，盛于棕色瓶中，保存于暗處。最后滴加石炭酸復(fù)紅稀釋液復(fù)染1分鐘，水洗，自干或用吸水紙吸干后鏡檢。芽孢成綠色，菌體呈淡紅色。 實驗材料： 細(xì)菌 培養(yǎng)基 酒精棉球 酒精燈 接種針 恒溫箱等 實驗步驟 用穿刺接種法接試驗菌于硫酸亞鐵瓊脂培養(yǎng)基中，37。 實驗結(jié)果： 取培養(yǎng)好的試管，振搖均勻后，靜置分層。四、乙酰甲基甲醇試驗（VP試驗） 實驗?zāi)康模? （1）了解VP試驗的反應(yīng)原理及用途 （2）學(xué)習(xí)VP試驗的操作技術(shù)
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