川麥42不同逆境生長(zhǎng)情況研究開(kāi)題報(bào)告-免費(fèi)閱讀
【正文】 第三階段： 20xx年 5月，準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料，做預(yù)實(shí)驗(yàn)，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步修改實(shí)驗(yàn)方案。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 取 20 mL刻度試管 6支，從 05分別編號(hào)，按下表加入標(biāo)葡萄糖溶液，然后按順序向試管內(nèi)加人試劑，充分振蕩，立即將試管放人沸水浴中，逐管準(zhǔn)確保溫 l min，取出后自然冷卻至室溫，以空白作對(duì)照，在 625 nm波長(zhǎng)下測(cè)其光密度，以光密度為縱坐標(biāo)，以糖含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出標(biāo)準(zhǔn)線性方程。 樣品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定 另取 2根試管，分別準(zhǔn)確加入 mL樣品提取液， mL蒸餾水和 5 mL考馬斯亮藍(lán) G250試劑 ,其余操作與 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制相同，測(cè)其吸光值。 CAT 活性的測(cè)定 ：采用紫外分光光度法 [15] 取 10 mL 具塞試管，加 2 mL 酶提取液于沸水浴中加熱煮致失活，冷卻備用 。 SOD總活性 [U/g]=SCKTEWVA )A( CK ? SOD比活性 [U/mg]=蛋白質(zhì)含量 總活性SOD 過(guò)氧化物酶體（ POD）的測(cè)定 酶液制備 稱(chēng)取新鮮小麥葉片 g，剪碎，放入預(yù)冷的研缽中，加入適量預(yù)冷的磷酸緩沖液冰浴研磨成勻漿。 酶活力測(cè)定 ： 用 NBT光還原法 [15]。 1 ℃ 、 12 h / 12h 光 /暗周期、中等光強(qiáng)（光流密度 100 μmol m2 s1） 的恒 溫室中 培養(yǎng)， 待長(zhǎng)直三葉期，選取長(zhǎng)勢(shì)相似小麥幼苗進(jìn)行不同的脅迫處理（鹽脅迫、干旱脅、低溫脅迫） 24 h 和 72 h，對(duì)脅迫前后小麥中 超氧化物歧化酶（ SOD）、過(guò)氧化物酶體（ POD）、過(guò)氧化氫酶（ CAT） 、可溶性蛋白、脯氨酸、可溶性糖、丙二醛、葉綠素含量進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析從而對(duì)小麥抗旱性、抗旱性及耐鹽性做出評(píng)價(jià)，并對(duì)小麥的抗逆性研究提供依據(jù)。 小麥經(jīng)過(guò)低溫脅迫后會(huì)發(fā)生一系列的變化，其中一些指標(biāo)，如超氧化物歧化酶的活性及丙二醛的含量可以作為小麥抗凍性的生理生化指標(biāo) [14]。 ROS 的清除對(duì)于維持植物正常的功能具有重要意義。為了對(duì)川麥 42 的抗逆性做出鑒定，對(duì)小麥在不同的逆境（干旱、低溫、鹽漬）生理生化指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。因此小麥又稱(chēng)為穎花植物。因此 使用 單一 脅迫處理來(lái)評(píng)價(jià)小麥的抗逆性具有一定的局 限性，且各項(xiàng)指標(biāo)存 在著一定的相關(guān)性，因此需要檢測(cè)小麥的抗逆性需要 評(píng)價(jià)其多個(gè)脅迫下 各項(xiàng)指標(biāo)參數(shù)。研究干旱對(duì)植物的傷害機(jī)制有助于進(jìn)一步了解植物的抗旱適應(yīng)性機(jī)理，從而可為物種選育與栽培，以及新品種的推廣種植提供科學(xué)依據(jù)。 低溫寒害也是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中造成嚴(yán)重?fù)p失的自然災(zāi)害一，會(huì)對(duì)包括小麥在內(nèi)的許多作物的產(chǎn)量造成巨大的損失 [11,12]， 關(guān)于冬小麥研究已經(jīng)有不少報(bào)道 [13]，植物的抗寒性與活性氧代謝關(guān)系密切，低溫脅迫下植物體內(nèi)產(chǎn)生大量的 H2O O OH 等活性氧自由基，這些活性氧能造成膜脂過(guò)氧化，進(jìn)而造成膜系統(tǒng)的損傷。高等植物在逆境下脯氨酸的含量也引起了人們的廣泛重視。用 95%乙醇（ AR）丙種子萌發(fā) 移植入石英砂 鹽脅迫 干旱脅迫【哦 低溫脅迫 空白 萌發(fā)后 測(cè)量分析 培植至三葉期 4 酮（ AR） 1:1為參照，在分光光度計(jì) 665 / 649 nm下測(cè)其光密度。 反應(yīng)中各試劑用量如下表所示 ： 130 mmol/LMet（ mL） 750 μmol/LNBT（ mL） 100 μmol/LEDTA 二鈉（ mL） 20 μmol/L核黃素（ mL） 酶 液(μL) 蒸餾水 (mL) 1 2 3 4 5 6 7 8 0 0 0 5 10 15 20 25 在 560 nm波長(zhǎng)下，以 1號(hào)杯調(diào)零，測(cè)定其余各杯反應(yīng)體系的 光密度 。迅速將兩支試管中溶液混勻后，倒人比色杯，置于分光光度計(jì)樣品室內(nèi)，立即開(kāi)啟秒表記錄時(shí)間，于 470 nm處測(cè)定 光密度 ，每隔 30 s讀數(shù)一次。 1 2 3 4 5 6 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液 /mL 蒸餾水 /mL 考馬斯亮藍(lán)試 劑 /mL 蛋白質(zhì)含量 /μg
研究報(bào)告相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1