外文翻譯--運(yùn)用實(shí)時(shí)pcr技術(shù)監(jiān)測(cè)生物浸出黃銅礦中的嗜熱微生物的數(shù)量-免費(fèi)閱讀
【正文】 沃特林 2020年）。眾所周知的 Leptospirillum spp.，通常是發(fā)現(xiàn)鐵氧化菌在酸性礦山排水系統(tǒng)和生物浸出（奧爾森等人。 2020年）。 在浸出過程中，形成鈍化層認(rèn)為是由礦物表面上的黃鉀鐵礬沉淀，作為溶解緩慢的原因，鈍化更大的阻礙是限制礦物表面層銅萃取流動(dòng)的細(xì)菌，營(yíng)養(yǎng)鹽，氧化劑，反應(yīng)從產(chǎn)品和（斯托特等。Hawkes et al. 2020).F. thermophilum L1是一個(gè)混合營(yíng)養(yǎng)嗜熱溫和古菌。群落在 4060℃（羅林斯和約翰遜 2020年）。 此外，中度嗜熱嗜酸使用在研究中只包含一到兩個(gè)拷貝的 16S rRNA基因 每個(gè)基因組（劉等人 。F. thermophilum L1僅在后期和 16S rRNA基因的拷貝數(shù)占 22％的總拷貝檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)。結(jié)果表明，拷貝數(shù)經(jīng)檢測(cè)，估計(jì)在實(shí)際的匹配副本因子 （表 2），表明了實(shí)時(shí) PCR方法可用于量化混合的 DNA樣本個(gè)別 16S rRNA基因。 熔解曲線分析表明，熒光信號(hào)同時(shí)獲得一個(gè)實(shí)時(shí) PCR檢測(cè)起源從具體的 PCR產(chǎn)物，而不是從人造的引物二聚體。群落 4中的接種細(xì)胞密度分別為對(duì) 3 107細(xì)胞 ml1。群落 5表明，黃銅礦浸出能力最強(qiáng)（ ％）在所有已定義的群落。 C，而監(jiān)測(cè)熒光。 實(shí)時(shí) PCR技術(shù)運(yùn)用了實(shí)時(shí)孔定量 PCR檢測(cè)系統(tǒng)（生物拉德實(shí)驗(yàn)室公司，大力士，美國(guó)）。這些引物用實(shí)行實(shí)時(shí)定量 PCR進(jìn)行了測(cè)試其是否符合實(shí)驗(yàn)的要求（見下文）。用于 PCR目的，純化的基因組 DNA的濃度用分光光度計(jì)測(cè)量使用 NanoDrop 174。浸 3 出系統(tǒng)的 pH值用 pH計(jì)進(jìn)行測(cè)定。 生物浸出實(shí)驗(yàn)，使用以下 5個(gè)菌落： caldus S2及屬嗜 鐵鉤端螺旋菌 YSK ： caldus S2和嗜熱號(hào)L1。 C，初始 pH值 ，轉(zhuǎn)速 170RPM的搖床中培養(yǎng)。 KH2PO4, 。 MgSO4 KCl, 。 LN株根據(jù)他們已知的性能。實(shí)時(shí)定量 PCR技術(shù)基于在線熒光 PCR產(chǎn)物檢測(cè)，提供了一種快速，簡(jiǎn)單的方法來測(cè)量菌群中微生物種群并已成功地應(yīng)用到測(cè)量細(xì)菌和古細(xì)菌硫化礦物浸出系統(tǒng)（劉等人。 2020年 。黃鐵礦氧化溶解（硫化鐵），定義為由 7種中度嗜熱菌的組合（ MT6端螺旋菌， Acidimicrobium 硫桿菌，在。 Okibe and Johnson 2020)。和 Ferroplasma cupricumulans 在生物浸出系統(tǒng)操作在 4550176。黃銅礦（ CuFeS2）是最豐富，含有耐火材料的硫化銅，因此生物浸出的銅礦是關(guān)鍵的工業(yè)目標(biāo)。微生物在生物浸出中的數(shù)量動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)過程中采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR）技術(shù)。所有這些中，發(fā)現(xiàn)復(fù)雜混合物同時(shí)包含自養(yǎng)（屬嗜鐵鉤端螺旋菌和 AT。而大多數(shù)研究主要集中在嗜溫微生物的應(yīng)用，包括氧化亞鐵硫桿菌的，端螺旋菌桿菌和嗜酸硫桿菌，在 2540 的成長(zhǎng)最佳℃，而在此溫度下黃銅礦生物浸出范圍低溶解率（沃特林 2020）。C 間， 對(duì) 礦石溶解發(fā)揮了重要作用 。 Okibe 等。 caldus，脂環(huán) Y004， 3 Sulfobacillus屬。 Demergasso等。 2020年 ）。我們的實(shí)驗(yàn)室的所有獨(dú) 立菌株，被培養(yǎng)在一種激活的培養(yǎng)基中。 K2HPO4, 。 7H2O, 。Na2SO4, 。 9K basal salts培養(yǎng)基不添加硫酸亞鐵是用于黃銅礦生物浸出試驗(yàn)。 caldus S2和嗜熱樓一樓 ％（瓦特 / V）的酵母提取物 。浸出殘 渣過濾，洗滌，并用冷凍干燥 干燥，最后由 X射線衍射分析。釹 1000分光光度計(jì)（ NanoDrop技術(shù)，威爾明頓，美國(guó)）和調(diào)整，以最終濃度 25 ng /μ l。 PCR和實(shí)時(shí) PCR 常規(guī) PCR方法是用 T 梯度 Thermoblock（ Biometra，哥廷根，德國(guó)）。反應(yīng)混合物中包含 25微升綠色熒光 SYBR 174。該特異性 PCR擴(kuò)增檢查通過檢查融化曲線的 Tm，它的對(duì)稱性，以及缺乏非特異性山峰。 從圖中可以看出。這是檢測(cè)到的細(xì)胞密度下降至 108個(gè)細(xì)胞毫升 1在中間階段約 107個(gè)細(xì)胞 ml1在后一階段。實(shí)時(shí) PCR檢測(cè)數(shù)據(jù)分析表明，單一的熔 融峰對(duì)應(yīng)于標(biāo)準(zhǔn)的 DNA觀察了所有樣本（數(shù)據(jù)未顯示）。 黃 銅礦浸出嗜酸系統(tǒng)中溫和嗜熱細(xì)菌實(shí)時(shí)定量 PCR技術(shù) 實(shí)時(shí) PCR法用于跟蹤微生物群落 4和第 5浸礦環(huán)境。 At. caldus s2 and Sulfobacillus sp. LN都是在浸礦微生物系統(tǒng) 5中占主導(dǎo)。 2020年）。 L. ferriphilum YSK是自養(yǎng)氧化中度嗜熱菌。 Sulfobacillus藻中 LN的是混合營(yíng)養(yǎng)鐵，用硫氧化和嗜熱。 2020沃特林 2020年）。相較于群落含 L. ferriphilum，群落 2和 3似乎有效地減少由黃銅礦浸出銅。 2020年）。實(shí)時(shí) PCR檢測(cè)被證明是有效和快速的方法來監(jiān)測(cè)在生物浸出系統(tǒng)，特別是數(shù)量動(dòng)態(tài)對(duì)于簡(jiǎn)單的微生物群落。哈貝格和約翰遜 2020年 。這就是為什么這些原核生物也蓬勃發(fā)展在黃銅礦氧化環(huán)境。少量酵母提取物為 F. thermophilum L1在實(shí)驗(yàn)室中生長(zhǎng)所必須的，并可能為其提供生長(zhǎng)因子，但在其自然的環(huán)境中，像真菌等微生物可能提供這一增長(zhǎng)因子（多普森等人。硫酸鹽的生產(chǎn)也造成了減少垃圾滲濾液的 pH值（ Sand et al. 2020）。 2020年 。邏輯設(shè)計(jì) 39。單熔融峰表明，引物二聚體有沒有像人造的一樣。雖然 3株菌株在群落 4日開始有相同的細(xì)胞數(shù)， At. caldus s2and L. ferriphilum YSK共占超過 99％的生物浸出體系中的總原核生物中間階段。 為了進(jìn)一步驗(yàn)證實(shí)時(shí) PCR檢測(cè)，個(gè)別 16S rRNA基因擴(kuò)增的標(biāo)準(zhǔn)（每個(gè)為 104拷貝 /測(cè)試）從 4不同的物種，包括 At. caldus s2, YSK, F. thermophilum L1, and 用特異性引物擴(kuò)增及其復(fù)印件數(shù)字是計(jì)算參照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個(gè) PCR產(chǎn)物中包含一個(gè)單片段預(yù)期的大小（圖 2），結(jié)果揭示了 BLAST分析（數(shù)據(jù)未顯示），該 PCR產(chǎn)物序列比較一致，都是100％，這證明了擴(kuò)增的 DNA片段正確的。三價(jià)鐵的濃度無明顯變化觀察在非生物控制和群落 2滲濾液。此外， ％和 ％的銅是群落 1與群落 4 4 分別從黃銅礦浸出。 C至 176。將 PCR產(chǎn)物進(jìn)行系列稀釋從 103到 108份微每升和實(shí)時(shí) PCR技術(shù)擴(kuò)增建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)曲線 。 DNA序列由 Sangon 和 BLAST合成，并在 GenBank 分析檢查產(chǎn)品。 DNA的樣本可視 化，與溴化乙錠染色后，電泳通過 1％（瓦特 / V）的瓊脂糖凝膠。亞鐵鐵濃度確定，用鉀滴定重鉻酸鉀（ K2
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