基因表達(dá)與蛋白質(zhì)純化技術(shù)探討(ppt40)-食品飲料-免費閱讀
【正文】 ?如果希望表達(dá)的多肽的分子量小于 10 kDa, 一定要進(jìn)行融合表達(dá) 來自 庫下載 ? 采用 MBD融合 ? 采用 GST融合 ? 采用 CBD融合 ? 采用 thioredoxin融合 ? 采用 Origami等宿主菌 ? 降低菌體培養(yǎng)的速度 溫度 (1530℃ ), 降低轉(zhuǎn)速 讓表達(dá)產(chǎn)物可溶化 來自 庫下載 ? 采用 CBD融合 (pET36/37) ? 采用 Dsb融合 (pET39/40) ? 采用帶 pelB/ompT引導(dǎo)肽的載體 (pET12/20/22) ? 采用帶 MBD融合 (pMAL載體 , Biolabs) ? 采用帶 SUMO融合 (pET SUMO, Invitrogen) 讓蛋白質(zhì)分泌到間質(zhì)去 純化方便 : 先用 EDTA/蔗糖 溶液處理 , 然后 5 mM MgSO4 洗出 來自 庫下載 ? 透析法 : 簡單 。 畢氏酵母 (Pichia pastoris)。 裂殖酵母 （ Schizosaccharomyce pombe） 來自 庫下載 昆蟲細(xì)胞 ? 可以病毒感染的型式在成蟲中生產(chǎn)，也可在體外培養(yǎng)細(xì)胞中生產(chǎn)蛋白 。 但費時 , 費緩沖液 , 蛋白質(zhì)濃度不能過高 (容易產(chǎn)生沉淀 ) ? 快速稀釋法 : 最常用的小規(guī)模復(fù)性方法 。 ?如果所表達(dá)的蛋白質(zhì)沒有二硫鍵或只用來制備抗血清 , 采用包含體表達(dá)比較好 。 ? 商品化表達(dá)體系： 釀酒酵母 （ Saccharomyce cerevisiae） 。 ? 適合分泌型和膜蛋白的表達(dá)，有加糖修飾； ? 糖鏈有所區(qū)別，表達(dá)量有限； ? 作為藥物宿主細(xì)胞未被 FDA認(rèn)可 來自 庫下載 CHO細(xì)胞 ?可進(jìn)行分泌表達(dá)，有天然立體結(jié)構(gòu)，加糖方式與人體蛋白質(zhì)完全一致； ?表達(dá)量不夠高，培養(yǎng)成本較高 來自 庫下載 植物組織 ? 植物可大面積種植，可以廉價大規(guī)模生產(chǎn)； ? 轉(zhuǎn)基因植物制作費時，表達(dá)的組織特異性較難控制； ? 表達(dá)量較難提高，分離純化不方便 來自 庫下載 動物乳腺組織 ? 分泌生產(chǎn)有天然立體結(jié)構(gòu)和活性的蛋白質(zhì)至乳汁，產(chǎn)量高，分離純化方便，特別適合藥用蛋白的生產(chǎn)； ? 轉(zhuǎn)基因動物制作花費巨大，實驗周期長 來自 庫下載 鳥類輸卵管組織 ? 分泌生產(chǎn)有天然立體結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)到蛋清，產(chǎn)量高，容易貯存和運輸，分離純化方便； ? 實驗成本低，飼養(yǎng)費用低； ? 加糖方式可能與人有所不同 來自 庫下載 體系選擇 研究基因功能 : 大腸桿菌 , 裂殖酵母 ,昆蟲細(xì)胞 , CHO細(xì)胞 多肽藥物生產(chǎn) :
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