20xx年單域抗體的研究和應(yīng)用進(jìn)展-免費(fèi)閱讀
【正文】 單域抗體易于改造并且可以用原核表達(dá)系統(tǒng)獲得的優(yōu)勢(shì)將會(huì)展現(xiàn)強(qiáng)大的利用價(jià)值。對(duì)KN035與PDL1的復(fù)合物進(jìn)行晶體結(jié)構(gòu)解析發(fā)現(xiàn)KN035可以競(jìng)爭(zhēng)性地封閉PDL1與PD1的幾個(gè)關(guān)鍵結(jié)合位點(diǎn)， 例如Ile5Tyr56 and Arg113[53].在2020年1月， KN035獲得臨床批準(zhǔn)并在3月底開始了第一例臨床試驗(yàn)。G蛋白可以通過(guò)與β2AR結(jié)合并增強(qiáng)其與激動(dòng)劑之間的親和力。Chamma等將GFP的單域抗體應(yīng)用于活細(xì)胞成像和雙色熒光成像系統(tǒng)。
基于酵母表面展示技術(shù)的單域抗體篩選
酵母屬于真核的單細(xì)胞生物， 用于抗體展示技術(shù)的酵母一般是釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae, 這種酵母有大約200 nm厚的細(xì)胞壁， 出芽的酵母細(xì)胞壁表面有凝集素蛋白， 可以與相對(duì)交配型的酵母上的Aga2p蛋白結(jié)合， 單域抗體便是以融合蛋白的形式與Aga2p蛋白融合表達(dá)并展示于酵母細(xì)胞表面[1820].
酵母展示抗體庫(kù)的篩選方法一般采用磁珠輔助的細(xì)胞分選 （MACS） 和流式細(xì)胞分選 （FACS） , MACS的主要作用是為了減少非特異性結(jié)合， 通常會(huì)在MACS篩選過(guò)后的基礎(chǔ)上進(jìn)行多輪的FACS進(jìn)行篩選[20,21].
相比于噬菌體展示技術(shù)， 酵母展示技術(shù)既有優(yōu)勢(shì)也有不足。Sandrine Moutel等新近采用全合成的方法構(gòu)建了人源化的通用單域抗體庫(kù)Na LiH1, 庫(kù)容達(dá)到310, 并從中成功篩選到若干針對(duì)不同靶標(biāo)的高親和力單域抗體 （k D達(dá)到10mol/L–10mol/L） [17].
噬菌體展示技術(shù)篩選抗體的流程一般包括以下幾點(diǎn) （圖2） : （1） 抗體基因片段的獲取。這一技術(shù)借助噬菌體的高擴(kuò)增性， 將基因型和功能表型 （結(jié)合活性） 結(jié)合在一起， 是一種非常高效的篩選系統(tǒng)[16].
由于不存在傳統(tǒng)抗體的輕重鏈匹配問題， 單域抗體更適合采用噬菌體展示文庫(kù)技術(shù)進(jìn)行篩選。本文主要從sd Abs的結(jié)構(gòu)和理化特征、篩選和制備方法、在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用等方面總結(jié)分析了單域抗體的新近研究進(jìn)展， 并展望了其進(jìn)一步發(fā)展和應(yīng)用的前景以及面臨的問題。近年來(lái)在生物學(xué)基礎(chǔ)研究和醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用方面均備受關(guān)注并被廣泛應(yīng)用。單域抗體的研究和應(yīng)用進(jìn)展單域抗體的研究和應(yīng)用進(jìn)展 本文關(guān)鍵詞：抗體，進(jìn)展，研究
單域抗體的研究和應(yīng)用進(jìn)展 本文簡(jiǎn)介：摘要：傳統(tǒng)IgG抗體分子一般由輕鏈和重鏈組成，輕鏈包含一個(gè)可變區(qū)（VL）和一個(gè)恒定區(qū)（CL）,重鏈包含一個(gè)可變區(qū)（VH）和3個(gè)恒定區(qū)（CH1,CH2,CH3）.單域抗體（singledomainantibody,sdAb）,是指缺失抗體輕鏈，而只有重鏈可變區(qū)的一類抗體，因其分子量小，也被稱為納米抗體
單域抗體的研究和應(yīng)用進(jìn)展 本文內(nèi)容：
摘要：傳統(tǒng)Ig G抗體分子一般由輕鏈和重鏈組成， 輕鏈包含一個(gè)可變區(qū) （VL） 和一個(gè)恒定區(qū) （CL） , 重鏈包含一個(gè)可變區(qū) （VH） 和3個(gè)恒定區(qū) （CH1, CH2, CH3） .單域抗體 （single domain antibody, sd Ab） , 是指缺失抗體輕鏈， 而只有重鏈可變區(qū)的一類抗體， 因其分子量小， 也被稱為納米抗體 （nanobody） .上世紀(jì)九十年代， 單域抗體最早在駱駝科動(dòng)物中被發(fā)現(xiàn)， 之后在護(hù)士鯊， 大星鯊和鰩魚等軟骨魚綱動(dòng)物中也發(fā)現(xiàn)了類似的抗體。在哺乳類動(dòng)物中， 目前只有在胼足亞目的駱駝科動(dòng)物血液中發(fā)現(xiàn)含有功能性的重鏈抗體， 同屬于偶蹄目的反芻亞目和豬形亞目動(dòng)物體內(nèi)未發(fā)現(xiàn)這類抗體[3].Hc Ab普遍存在于各種駱駝科動(dòng)物中， 包括單峰駝Camelus dromedarius、亞州雙峰駝Camelus bactrianus、南美洲的大羊駝Lama glama、原駝Lama guanicoe、羊駝Vicugna pacos等動(dòng)物中均有發(fā)現(xiàn)， 盡管其所占比例略有不同， 如在南美洲羊駝的血液中重鏈抗體比例為10%–25%, 而在普通的雙峰駱駝中則高達(dá)50%–80%[45].除了駱駝科動(dòng)物外， 在護(hù)士鯊 （又稱為鉸口鯊， nurse shark, Ginglymostoma cirratum） 、大星鯊 （Smooth dogfish, Mustelus canis） 、白斑角鯊 （Spiny dogfish, Squalus acanthias） 、鰩魚 （Skate） 和魟魚 （Ray） 等軟骨魚綱動(dòng)物血液也存在類似結(jié)構(gòu)的抗體。傳統(tǒng)抗體VH的FR2區(qū)域通常會(huì)包含數(shù)個(gè)相對(duì)保守的疏水氨基酸， 利于與VL通過(guò)疏水相互作用結(jié)合， 但在VHH中這段區(qū)域常是暴露的， 因此這幾個(gè)氨基酸被演化替換成親水性的氨基酸， 例如， 在傳統(tǒng)抗體的VH中第37位的Val、第44位的Gly、第45位的Leu和第47位的Phe/Trp等疏水氨基酸， 在駱駝科動(dòng)物VHH中被相應(yīng)替換為Phe/Tyr （aa37） 、Glu/Gln （aa45） 、Arg/Cys （aa45） 、Gly/Arg/Leu/Ser （aa47） 等相對(duì)親水性更強(qiáng)的氨基酸[78].這些氨基酸改變使得VHH在蛋白可逆折疊、熱穩(wěn)定性和抗蛋白降解等方面的性質(zhì)相較于傳統(tǒng)抗體更優(yōu)。從天然庫(kù)中篩選獲得高親和力單域抗體的成功率基本與庫(kù)容成正比， 理論上只要所構(gòu)建的抗體庫(kù)庫(kù)容和多樣性足夠大 （10 CFU/m L） , 即可從中篩選到針對(duì)各種靶抗原的高親和力單域抗體， 甚至是針對(duì)哺乳動(dòng)物中高度保守的抗原 （類似自身抗原） 的單域抗體。淘選一般要進(jìn)行多輪， 每輪淘選后可采用PhageELISA檢測(cè)， 直到能檢測(cè)到明顯的富集效果。 通過(guò)抗體的Fc段與膜上的脂蛋白結(jié)合， 這種展示和表達(dá)方式稱為Anchored p
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