【正文】 小，細菌不能通過(tōnggu242。在U型管中培養(yǎng)一些時間后，再從兩端分別取細菌進行培養(yǎng)，沒有發(fā)現(xiàn)一個細菌能在基本培養(yǎng)基上生長。,F 因子與細菌(x236。)環(huán)狀DNA，但有時 也可整合至染色體上,F＋細胞：含有(h225。,高頻(ɡāo p237。 F’因子：整合的 F 因子偶爾也能離開細菌染色體回到細胞質(zhì)中，少數(shù)情況下，脫離染色體時，可以攜帶寄主的少數(shù)基因，形成環(huán)狀的F。 ③ Hfr菌株：F 因子整合(zhěnɡ h233。 ② F－ F－ ，不能接合，因無 F 因子不能形成(x237。 ④ Hfr F－ ，可接合，受體一般為F－ ，但為高頻重組。jūn)重組的特點,Hfr 與F－ 細胞之間接合，通常只有部分的供體染色體DNA進入受體。 fen)二倍體區(qū)發(fā)生奇數(shù)次交換導(dǎo)致線性染色體，該細胞不能存活,部分二倍體區(qū)發(fā)生偶數(shù)次交換形成重組的環(huán)狀染色體，該細胞可存活,細菌重組的特點：基因轉(zhuǎn)移是單方向的，僅供體→受體 這與真核生物減數(shù)分裂中染色單體間交換導(dǎo)致的重組不同,第二十八頁，共六十八頁。n)研究作出了重大的突破。,① 接合 采用Hfr菌株為strs， F－菌株為strr ， 混合通氣培養(yǎng)(細菌與細 菌開始接觸) 232。接合在完全培養(yǎng)基上進行，培養(yǎng)基以 葡萄糖為碳源，不加鏈霉素、疊氮化鈉和噬菌體T1。 ⑤ 作圖 根據(jù)各基因出現(xiàn)時間先后的順序?qū)⑺帕性谌旧w上，并標明 出現(xiàn)的時間，而各基因出現(xiàn)時間的差數(shù)就是它們之間的距離，這種圖 距是以時間（ min）為單位的，有別于真核生物遺傳作圖時以厘摩 （ cM）為單位。,這種根據(jù)供體基因進入(j236。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)Hfr的未選擇性標記基因進入F－所需時間： 分鐘 轉(zhuǎn)移的Hfr基因 ＜9 0 9 azir 11 azir tonr 18 azir tonr lac+ 25 azir tonr lac+ gal+,（2）中斷(zhōngdu224。,（3）重組(zh242。 問兩基因間的距離為多少？,第三十四頁，共六十八頁。n),lac和ade之間單交換(jiāohu224。n) lac 和 ade 之間的重組率,選擇在腺甘酸（ade）缺乏的培養(yǎng)基上生長的類型。 可用此來計算重組值。用重組率（RF）所測得的基因間距離與用中斷雜交(z225。 大腸桿菌染色體全長約100 min，含4106核苷酸對，所以總圖距相當(dāng)于2 000 cM，故1 cM≈2 000 bp。,第三十八頁，共六十八頁。,7.5.1 細菌(x236。 在實施以上步驟時： ①一般(yībān)要對受體細胞進行處理：化學(xué)處理或用強電場處理（electroporation，電穿孔）。,第四十頁，共六十八頁。 未被降解的一條鏈部分或整個地與受體DNA鏈進行交換(jiāohu224。,通過轉(zhuǎn)化確定基因連鎖、基因順序和圖距： 在轉(zhuǎn)化過程中，DNA小片段→受體。 兩個基因緊密連鎖時，它們就有較多的機會包括在同一個DNA片段中，并同時整合到受體染色體里——共轉(zhuǎn)化（cotransformation），共轉(zhuǎn)化的基因一般是連鎖的。o)的轉(zhuǎn)化類型和數(shù)目： a+b+ 307 a+b 215 a b+ 278,轉(zhuǎn)化子的總數(shù)是800,（用a+作為選擇(xuǎnz233。ng)基因順序： 例如：如果基因p和q常常一起傳遞到受體，這樣兩個基因可能是相對地緊密連鎖，同樣基因q和o也經(jīng)常一起傳遞到受體細胞。 若順序是p－q－o，這樣p和o將很少或根本不發(fā)生共轉(zhuǎn)化，因為它們離得相對較遠。n)： 例如： 用枯草桿菌（Bacillus subtilis）的一個菌株trp2＋ his2＋tyr1＋作供體，提取DNA，向受體trp2－ his2－ try1－ 菌株進行了轉(zhuǎn)化，得到轉(zhuǎn)化子類型如下：,問3個基因間的距離和排列(p225。bāo)數(shù)，因此不能統(tǒng)計在內(nèi),第四十六頁，共六十八頁。)時可能的交換類型及其重組子,第四十七頁，共六十八頁。 轉(zhuǎn)導(dǎo)可分為: 普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)（general transduction） 局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)（restricted transduction） 烈性噬菌體的感染周期 溫和噬菌體的感染周期,第四十八頁，共六十八頁。)裂解反應(yīng)，使宿主細胞裂解。那么轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體是如何形成的呢？ 1965年，K. Ikeda和J. Tomizawa對 E.coli 的溫和噬菌體P1的一些實驗研究闡明了轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體是如何形成的。)的噬菌體DNA被包裝到蛋白質(zhì)外殼時，偶然地也會把純粹是細菌的DNA片段包裝到一個噬菌體外殼中，形成所謂轉(zhuǎn)導(dǎo)顆粒（transducing particle）/轉(zhuǎn)導(dǎo)病毒,第五十二頁，共六十八頁。i)決定噬菌體附著細胞表面的能力，因此，這種噬菌體顆粒仍然具有侵染性。,普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)(zhuǎn dǎo)作圖,（1）共轉(zhuǎn)導(dǎo)頻率的計算——確定基因之間的次序和距離(j249。共轉(zhuǎn)導(dǎo)的頻率愈高，表明兩個基因在染色體上的距離愈近，連鎖愈密切；相反，如果兩個基因的共轉(zhuǎn)導(dǎo)很低，說明其距離較遠，因此，測定兩基因的共轉(zhuǎn)導(dǎo)頻率就可以確定基因之間的次序和距離。n)中，將產(chǎn)生各種不同的轉(zhuǎn)導(dǎo)體。,轉(zhuǎn)導(dǎo)(zhuǎn dǎo)作圖中兩個基因a b之間的重組率計算,第五十七頁，共六十八頁。)可以從第3種轉(zhuǎn)導(dǎo)型上立即判斷出來，因為它是四次交換導(dǎo)致中間位置基因改變，其數(shù)目最少（等于0） 三個基因的次序：supC trpA pyr F,第五十九頁，共六十八頁。,轉(zhuǎn)導(dǎo)(zhuǎn dǎo)作圖中共轉(zhuǎn)導(dǎo)(zhuǎn dǎo)率與圖距的關(guān)系,1966年，T.T Wu (Harvard University)得到了一個共轉(zhuǎn)導(dǎo)率與從接合實驗(sh237。該噬菌體DNA整合進細菌染色體中時，都占有(zh224。λ總是通過attP 與E.coli 上的attB 位點配對，經(jīng)位點專一性重組整合進大腸桿菌染色體上（K12菌株）。,局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)(zhuǎn dǎo),第六十二頁，共六十八頁。 低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)裂解液 噬菌體裂解液可感染gal－的細菌，裂解液中大多數(shù)是野生型的噬菌體，相當(dāng)少的λdgal+轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體，這樣的裂解液叫做低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)（Low frequency transduction，LFT）裂解液。細菌是雜合子gal+/gal－，因此能發(fā)酵半乳糖。所產(chǎn)生的溶菌產(chǎn)物包含約一半正常的噬菌體和一半λdgal+ 轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體。y224。,作業(yè)及課外(k232。,內(nèi)容(n232。電鏡觀察表明：擬核結(jié)構(gòu)最顯著的特征是其DNA被包裹壓縮成一個個有序的環(huán)狀結(jié)構(gòu)域(loop domain)。選出的lac－ade＋類型即是重組子，因為位于后面的