20xx年醫(yī)學專題—第七章哺乳動物胚胎干細胞技術-預覽頁
【正文】 干細胞。o xu232。nɡ)干細胞進一步分化成專能干細胞，只能分化成某一類型的細胞。,胚胎(pēitāi)性干細胞 Embryonic stem (ES) Cells,來自早期胚胎、原始生殖細胞或畸胎瘤組織等源于胚胎的干細胞，其基本特性是具有穩(wěn)定地在體外自我更新(gēngxīn)、并穩(wěn)定地維持正常核型和發(fā)育全能或多能性、能分化為屬于外胚層、中胚層和內胚層范疇的各種類型分化細胞，甚至參與個體發(fā)育，又稱為萬能細胞(Multipotent stem cells )。n)生物體組織中負有構建和補充某種組織細胞功能的干細胞。r)中分離出來的具有發(fā)育全能性的細胞系。,2.來源(l225。 內消呼肝胰（內胚層發(fā)育為消化系統(tǒng)，呼吸系統(tǒng)，肝臟，胰臟） 外表感神仙（外胚層發(fā)育為表皮，感覺，神經(jīng)系） 其余的是中胚層,第十一頁，共七十頁。iyǎng)傳代而不發(fā)生分化，能進行冷凍保存和遺傳改造。)細胞數(shù)目，形成多種系混雜的集合體,ES 細胞(x236。 4）形成嵌合體：組織和器官的細胞含有兩個或兩個以上基因型構建而成的完整個體，稱為(chēnɡ w233。,第十五頁，共七十頁。,第十六頁，共七十頁。通過交配可以分離出帶有ES細胞遺傳性狀的個體，這是ES細胞具有種系傳遞能力的一種證明。)因子）:ES細胞表面的有一復合受體，由低親和性的LIF受體和普通亞基gp130構成異源二聚體，LIF與受體結合后激活Jak酶，通過對STAT3的磷酸化激活維持細胞自我更新的基因。)量在50~150%，才能實現(xiàn)自我更新和維持多能性。 q249。,二、胚胎(pēitāi)干細胞研究的意義,1.ES細胞是研究哺乳動物個體發(fā)生發(fā)育(fāy249。udǎo)分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質細胞，DMSO誘導分化為平滑肌細胞等。,3.研究基因功能的首選細胞 由于ES細胞具有穩(wěn)定(wěnd236。,4.是生產(chǎn)轉基因動物的主要方法之一 用外源基因轉染后，篩選陽性細胞，然后注入到囊胚腔或其他卵裂球聚合獲得嵌合體后代，用轉染的ES細胞分化(fēnhu224。,第二十六頁，共七十頁。nɡ)、老年性癡呆、帕金森病、嚴重燒傷、脊髓損傷和遺傳性缺陷等疾病,組織(zǔzhī)工程學、功能基因組學和 蛋白質組學、發(fā)育生物學,新藥開發(fā)與藥效、毒性(duy,三、胚胎干細胞研究(y225。,1981年英國劍橋大學的Evans和Kaufman用延緩著床的胚泡的胚胎內細胞團ICM （inner cells mass)獲得鼠的ES細胞； 同年(t243。,第三十一頁，共七十頁。這為胚胎干細胞的臨床應用(y236。,1999年12月，美國科學家在《美國科學院院刊》報告說，小鼠肌肉組織(jī r242。,第三十三頁，共七十頁。,2003年，美國衛(wèi)生獨立研究院（National Institutes of Health，NIH）華裔科學家施松濤等人首次發(fā)現(xiàn)牙齒間質存在干細胞。sh249。)在Cell及Science發(fā)表論文宣布成功利用人類上皮細胞誘導出iPS細胞。bāo)后，巧妙的將誘導iPS時帶入細胞的基因去除，大大降低了細胞癌變風險。iyǎng)基本程序,1.胚胎干細胞的分離 目前ES細胞主要有兩個來源，即胚泡內細胞團和生殖嵴中的原始生殖細胞，前者更為常用。,小鼠多用3－4天的胚泡或2－3天的桑椹(sānɡ zhēn)胚，,豬取8－10天的胚泡，,綿羊(mi225。,第四十頁，共七十頁。,第四十一頁，共七十頁。dǐ)，最為常用。,第四十三頁，共七十頁。n)照射，使細胞分裂停止，形成特殊的細胞層，即飼養(yǎng)層。,第四十五頁，共七十頁。,第四十六頁，共七十頁。 方法簡單，且能避免飼養(yǎng)層細胞的干擾。)胚胎,雌性成年小鼠注射5U孕馬血清(xu232。,第四十八頁，共七十頁。,第四十九頁，共七十頁。,培養(yǎng)(p233。nz224。 ch,常規(guī)(ch225。)消化液在37℃消化5min；,解離的細胞團移至滋養(yǎng)層的24孔培養(yǎng)板，繼續(xù)培養(yǎng)4天，可在一些孔內見到巢狀胚胎干細胞團；,胰蛋白酶消化巢狀胚胎干細胞團并繼續(xù)培養(yǎng)，克隆和純化ES細胞。bāo)的保存,1.常規(guī)(ch225。,第五十四頁，共七十頁。 2.階段特異性胚胎抗原(k224。,3.端粒酶檢測：通常ES細胞端粒酶水平遠高于其他(q237。,第五十六頁，共七十頁。,（3）嵌合體實驗：把培養(yǎng)的ES細胞與早期胚胎的卵裂球聚合，或直接把ES細胞注入囊胚腔，然后讓重組胚在體內繼續(xù)發(fā)育，通過檢測后代的嵌合狀況，分析ES細胞的分化潛力。n)，只有小鼠、猴和人能到達以上指標。qi225。 2.ES細胞定向誘導分化的理論和技術水平低 目前的技術還無法對ES細胞實施專一的誘導分化，即分化為特定的細胞類型，如神經(jīng)或心肌細胞等。 目前關于這方面的機理研究較少，克服排異反應的技術還不具備。,第六十二頁，共七十頁。)起來非常復雜。ny225。li225。jiā)是被禁止的，所以這類研究比較困難。y,內容(n232。從胚泡中分離出細胞團的方法主要免疫外科學方法，顯微外科學方法和組織培養(yǎng)
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