20xx年醫(yī)學專題—第4講+細胞融合與體細胞雜交-預覽頁
【正文】 二 細胞融合的分類(fēn l232。)成的融合(r243。 3.從融合效果： （1）對稱融合（Symmetric fusion）：兩個完整的細胞間的融合。nɡ zh236。ngh233。動物體內的破骨細胞也是自發(fā)融合形成的多核細胞。 20世紀80年代，齊默曼（Zimmerman）等建立電場誘導細胞融合方法。o)環(huán)節(jié),（1）親本選擇(xuǎnz233。i),（1）定義： 去除細胞壁后裸露的細胞稱之為原生質體（protoplast）。,（3）制備(zh236。ul237。izh236。,（4）分離(fēnl237。 沉降法：低速離心，收集沉淀。,22,沉降(ch233。,23,不連續(xù)梯度法,離心管中配制(p232。iyop242。FDA（二乙酸熒光素）能自由地穿越細胞質膜，在活細胞內，F(xiàn)DA被酯酶裂解即發(fā)熒光（熒光素），由于熒光素不能自由通過質膜，因而可以在熒光顯微鏡下通過具熒光的細胞的觀察確定細胞活性,25,第二十五頁，共七十一頁。 氧電極法：有活力原生質體光照下放出(f224。,五 細胞融合方法(fāngfǎ),1.生物法 病毒誘導細胞融合：研究最早的細胞融合誘導方法。仙臺病毒（HAJ）是兩層磷脂組成的外膜包裹著RNA與蛋白質的復合體。,28,第二十八頁，共七十一頁。 （2）通過病毒與原生質體或細胞膜的作用使兩個細胞膜間互相滲透，胞質互相融合。,2 化學法,可以采用(cǎiy242。,（1）NaNO3誘導(y242。NaNO3對原生質體無損害(sǔnh224。zǐ)誘導融合,1973年，凱勒（Keller）和梅爾切斯（Melchers）發(fā)現(xiàn)采用強堿性（例如pH10.5）的高濃度鈣離子(l237。,（3）PEG誘導(y242。 PEG分子具有輕微的負極性，可以與具有正極性基團的水分子、蛋白質、碳水化合物形成氫鍵，在相鄰的原生質體間起到分子橋的作用，使原生質體接觸。,（4）高Ca2+和pH誘導(y242。,36,第三十六頁，共七十一頁。,3 物理(w249。 優(yōu)點：融合率高、重復性與可控制性強。,細胞融合舉例2 ——薄荷的電誘導(y242。bāo)篩選,因融合(r243。)的關鍵而必需的技術,44,第四十四頁，共七十一頁。 AAA，BBB，AAB,BBA等多聚體。zhǒng)細胞篩選方法,（1）細胞(x236。) RITC (異硫氰酸羅丹明) RITC在熒光顯微鏡下呈紅色,第四十七頁，共七十一頁。親本原生質體生長要求外源激素，而有的雜種細胞由于雙親互補作用會產生內激素，從而使雜種細胞能在無激素的培養(yǎng)基上生長。)處理,矮牽牛+爬山虎,細胞(x236。ng)的融合細胞篩選,50,第五十頁，共七十一頁。,七 細胞融合的應用(y236。)：單克隆抗體生產（動物(d242。 fen) 體細胞雜交 Somatic cell hybridization,54,第五十四頁，共七十一頁。 2 問題：與基因工程改造相比有什么優(yōu)點？ 植物的抗逆性多為多基因控制(k242。,二 技術(j236。w249。,例子(l236。n)有KH2PO4 KNO3 CaCl2,2H2O MgSO4.7H2O KI CuSO4.5H2O,第五十九頁，共七十一頁。ng),第六十二頁，共七十一頁。,66,第六十六頁，共七十一頁。)（油菜2n=38,紫羅蘭2n=14,2n=52）？ 6.為什么原生質體密度高不利于原生質體融合？ 7.為什么說融合體一定程度上的聚集利于細胞分裂？ 8.與生長素需求相比，為什么對分裂素的需求不明顯？,68,第六十八頁，共七十一頁。dng)總結,第4講 細胞(x236。bāo)相互融合達到這一結果的過程稱為體細胞(x236。bāo)是體細胞(x236。（2）通過病毒與原生質體或細胞(x236。,
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