【正文】 。8(10):, M., Mori, Y., Sakurada, A., et Hcadherin(CDH13)gene is inactivated in human lung Genet 1998,103:96101 , , a novel cadherin with growth inhibitory functions and diminished expression in human breast 1996,2:776782 ,Y., Delgado, Y., Gomez, J., et of Hcadherin protein expression in human nonsmall cell lung cancer is associated with Res 2001,7:16831687 S, Toyooka KO,Harada K, et methylation of the CDH13(Hcadherin)promoter region in colorectoral cancers and Res 2002,62:33823386 T, Liang SB, Matsuyoshi N, et of Tcadherin(CDH13, Hcadherin)expression in cutaneous squamous cell Investigation 2002, 82:10231029 M,Staub J,Cliby W ,et of Hcadherin(CDH13)on 16q in the region of frequent deletion in ovarian J Oncol 1999,15:715720 ZY, Wu, Y., Hedrick, N., and Gutmann, cell regulation ivolves G2 phase arrest and requires p21 CIP1/WAF1 and cellular Biology 2003,23:566578 B, Guo M, Herman JG, et promoter methylation profiles of tumor suppressor genes in hepatocellular J ,163:, RL, Nemeth, E, Tran, H, et promoter region hypermethylation in ovarian carcinoma: a populationbased Res 2000, 60: , DJ, Hibberts, NA, McNicol, AM, et of pRb expression in pituitary adenomas is associated with methylation of the RB1 CpG Res 2000, 60: , JK, Zheng, S, Lafuente, A, et methylation of p16INK4a in anatomic and genderspecific subtypes of sporadic colorectal Epidemiol Biomarkers Prev 1999, 8: , ., Toyooka,S., Vimani, K., et of expression and abrrent methylation of the CDH13(Hcadherin)gene in breast and lung carcinomas., Cancer Res 2001,61:45564560 A, Meddeb M, Pineau P, et chromosomal abnormalities in hepatocellular carcinoma detected by parative genomic Chromosomes ,18: J, Ni M, Xu J, et profiling of twenty promoterCpG islands of genes which may contribute to hepatocellular Cancer 2002, 2:29項(xiàng)目的研究?jī)?nèi)容、研究目標(biāo)，以及擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題一、研究Tcadherin在肝癌中的基因功能 ，使其表達(dá)Tcadherin分子，研究表達(dá)Tcadherin分子的肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征的變化，證實(shí)是否Tcadherin重新表達(dá)能抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征。二、在臨床切除的肝癌標(biāo)本中研究Tcadherin基因失活與肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，在人肝癌中揭示Tcadherin基因失活與肝癌的惡性生物學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系。擬采取的研究方案及可行性分析一、研究Tcadherin（Tcad）在肝癌中的基因功能的技術(shù)路線 ↓以脂質(zhì)體lipofectin為載體轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞↓ 以G418篩選表達(dá)Tcad分子的陽(yáng)性克隆↓Western blot鑒定轉(zhuǎn)染后Tcad蛋白表達(dá)↓比較表達(dá)Tcad的陽(yáng)性克隆與不表達(dá)Tcad的肝癌細(xì)胞的生物學(xué)特征:細(xì)胞增殖計(jì)數(shù)3H標(biāo)胸腺嘧啶攝取率測(cè)定克隆增殖試驗(yàn) 細(xì)胞粘附試驗(yàn) 細(xì)胞聚集試驗(yàn) Tcadherin（+）或（）的肝癌細(xì)胞（各20只）：腫瘤生長(zhǎng)速度腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生的時(shí)間、累及積器官及頻率 裸鼠的生存期 blot檢測(cè)細(xì)胞周期調(diào)控蛋白p53,p21,p27,cyclin D的表達(dá)變化 CIP1/WAF1表達(dá)致使肝癌細(xì)胞于細(xì)胞周期G2期阻滯的分子機(jī)制。： 免疫組織化學(xué)三、研究去甲基化藥物誘導(dǎo)Tcadherin表達(dá)及其治療學(xué)意義的技術(shù)路線。采用Western blot進(jìn)一步證實(shí)Tcadherin在上述存在的啟動(dòng)子甲基化肝癌細(xì)胞株中蛋白水平表達(dá)缺失。項(xiàng)目的特色及創(chuàng)新之處 1．近年已開(kāi)始有Tcadherin分子在肝癌、乳腺癌、肺癌及結(jié)直腸癌中表達(dá)顯著下降、缺失的報(bào)導(dǎo)，推測(cè)Tcadherin分子在這些腫瘤中可能扮演腫瘤抑制基因角色。，如E，Ncadherin分子缺失或突變與多種腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移特征密切相關(guān)，但目前對(duì)Tcadherin基因失活與肝癌的侵犯及轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特征的關(guān)系目前尚無(wú)研究，該研究具有先進(jìn)性和獨(dú)創(chuàng)性。，該研究對(duì)進(jìn)一步揭示肝癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制、研究更有效的治療藥物具有重要的科學(xué)及臨床意義。 在臨床切除的肝癌標(biāo)本中研究Tcadherin基因失活與肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，揭示Tcadherin的腫瘤抑制基因功能失活與臨床肝癌的惡性生物學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系。在美國(guó)華盛頓大學(xué)神經(jīng)腫瘤及分子遺傳研究室從事神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制的研究工作近4年，主要從事腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制，利用基因芯片尋找與腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的遺傳改變，并利用已知的腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤的遺傳改變，如Ras激活突變，NF1基因缺失，cdk4過(guò)表達(dá)，P53及Rb缺失，并在動(dòng)物模型上進(jìn)一步驗(yàn)證上述遺傳改變與腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。同時(shí)，探索研究新基因如Tcadherin和GAP43基因?qū)δX膠質(zhì)細(xì)胞瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，首次發(fā)現(xiàn)Tcadherin和GAP43是兩個(gè)重要的參與腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤生長(zhǎng)調(diào)控的基因，并揭示其調(diào)節(jié)機(jī)制。該文發(fā)表于Molecular and Cellular Biology 2003,23:566578。3(4): 302 Zhiyong, et of additional genetic events associated with neurofibromatosis 1(NF1)pilocytic astrocytoma , 2001。肝癌發(fā)病的分子機(jī)制及綜合治療一直是我科的重點(diǎn)研究項(xiàng)目，已發(fā)表研究論文三百余篇。申請(qǐng)人簡(jiǎn)介（省略）國(guó)家自然科學(xué)基金的評(píng)審程序標(biāo)書(shū)的評(píng)議指標(biāo)及分值 ：420分 ：330分 ：250分 總分1000分一、立論依據(jù)（420分）（100分)涉及重要領(lǐng)域的重要問(wèn)題, 具有重要的理論價(jià)值或應(yīng)用前景 ：（90分）研究的背景：國(guó)內(nèi)外目前的研究現(xiàn)狀 存在的問(wèn)題：提出研究的切入點(diǎn) 研究設(shè)想：研究目標(biāo)及思路 （150分）理論創(chuàng)新：新學(xué)說(shuō)或理論 方法創(chuàng)新：新方法 技術(shù)創(chuàng)新：技術(shù)改進(jìn)或完善（80分)廣度和深度：近5年的主要研究進(jìn)展 研究中存在的主要問(wèn)題參考文獻(xiàn)： 國(guó)外文獻(xiàn)近5年 數(shù)量：2030二、研究方案（330分）（80分）范圍合適：35個(gè)內(nèi)容 重點(diǎn)突出：12個(gè)重點(diǎn)關(guān)鍵問(wèn)題選擇準(zhǔn)確：12個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題 （90分）設(shè)計(jì)合理：基礎(chǔ)與臨床方法可行：成熟可靠 可重復(fù)性強(qiáng) 易于掌握 （90分）方法先進(jìn)： 技術(shù)成熟可靠： 有創(chuàng)新：（70分）： 明確，可以達(dá)到，留有余地。重點(diǎn)突出：內(nèi)容（主線突出）與形式（黑體強(qiáng)調(diào)）；交代清楚（縮寫，研究的來(lái)龍去脈）。中英文主題詞準(zhǔn)確和概括性強(qiáng)。學(xué)術(shù)思想創(chuàng)新性─明顯創(chuàng)新，這是此部分的關(guān)鍵點(diǎn)，也是整個(gè)申請(qǐng)書(shū)的特色與靈魂。充分：全面，深入；科學(xué)性強(qiáng)：符合科學(xué)精神與原則，推論有邏輯性，依據(jù)客觀，代表性研究成果的選擇與意義分析。立項(xiàng)依據(jù)和國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析是為對(duì)重要問(wèn)題創(chuàng)新性研究這一目標(biāo)服務(wù)的。關(guān)鍵問(wèn)題選擇準(zhǔn)確：對(duì)關(guān)鍵問(wèn)題分析準(zhǔn)確并加以選擇方法(如何做:通過(guò)何種技術(shù)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)）─先進(jìn)、有技術(shù)創(chuàng)新：具體的最新方法，在某些方面或整體上有創(chuàng)新。項(xiàng)目創(chuàng)新點(diǎn)─ 創(chuàng)新性強(qiáng)，屬于開(kāi)創(chuàng)性工作：探索性嘗試，具有先導(dǎo)性意義。實(shí)驗(yàn)方案─內(nèi)容，方法和技術(shù)路線綜合性描述，以內(nèi)容為中心線索。項(xiàng)目組成員－研究梯隊(duì)完整，研究力量強(qiáng)。九、申請(qǐng)者承諾本人簽名與簡(jiǎn)表相符。申請(qǐng)人應(yīng)該站在評(píng)審人角度，使申請(qǐng)書(shū)重點(diǎn)突出，層次分明，行文流暢，敘述簡(jiǎn)明、具體，又系統(tǒng)全面、論點(diǎn)與論據(jù)充分、有邏輯性，立論令人信服。摘要：介紹目標(biāo)，方法，內(nèi)容，目的，意義。學(xué)科的基本理論與應(yīng)用問(wèn)題，重大疾病的發(fā)病機(jī)制，診斷、治療與預(yù)防。立項(xiàng)依據(jù)─ 充分，科學(xué)性強(qiáng)?！?溫故知新 ”，系統(tǒng)、全面和深入對(duì)所研究問(wèn)題的分析與理解，在加上科學(xué)想象力才能有創(chuàng)新。重點(diǎn)突出：確定研究的重點(diǎn)，并且集中所有資源進(jìn)行突破性研究。技術(shù)路線－(怎樣做:工作程序:利用選擇的方法對(duì)所研究的內(nèi)容按怎樣的時(shí)間順序進(jìn)行研究）─合理可行：符合科研規(guī)律?？尚行苑治鲆?。實(shí)驗(yàn)條件─具備，或與國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室合作。七、申請(qǐng)者正在承擔(dān)其它研究項(xiàng)目合理介紹─無(wú)：申請(qǐng)者實(shí)力差；有：反映申請(qǐng)者實(shí)力太多：申請(qǐng)者的研究精力能否保證本研究完成八、申請(qǐng)者承擔(dān)國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目情況不超項(xiàng)；已經(jīng)結(jié)題─完成質(zhì)量?jī)?yōu)秀：論文多，或質(zhì)量高；至少基本完成計(jì)劃